番木瓜环斑病毒甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆

1

作者 刘莉铭 彭斌 +3 位作者 康保珊 吴会杰 刘茜 古勤生 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2024年第2期8-14,共7页

番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序... 番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为74.60%~97.80%和85.30%~98.50%。基于全基因组序列的系统进化分析显示,HaNHK10与来自中国的所有分离物均聚集于II组中,并与中国山东的西葫芦分离物PRSV-SD亲缘关系最近。接种试验显示,HaNHK10分离物的全长cDNA克隆具有侵染性,它能系统侵染甜瓜、黄瓜、西瓜、南瓜、西葫芦和瓠瓜6种作物,经接种产生的病毒后代也能够通过摩擦接种侵染植株。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 甜瓜分离物 基因组 侵染性克隆

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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究

2

作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页

番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 RNA介导的病毒抗性

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番木瓜环斑病毒复制酶基因转化番木瓜的研究 被引量：6

3

作者 陈谷 叶长明 +1 位作者 黄俊潮 李宝健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期11-13,共3页

构建了含番木瓜环斑病毒复制酶（ＰＲＶＲＰ）基因的植物表达载体ｐＲＰＴＷ，导入农杆菌ＬＢＡ４４０４，转化番木瓜，转基因植株经点杂交和ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＰＲＶＲＰ基因已整合进番木瓜基因组。

关键词 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 农杆菌 转化

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番木瓜环斑病毒融合基因植物表达载体的构建 被引量：15

4

作者 饶雪琴 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期325-329,共5页

利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了... 利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了改进,并对改进的SOE的反应体系进行了优化,其中以Py-robestDNA聚合酶和60℃的退火温度为最佳。将融合基因VY构建在植物表达载体pCAMBIA2300上,测序结果表明,该融合基因的序列与设计相符。融合基因VY植物表达载体的构建,可为进一步获得对PRSV广谱抗性的转基因番木瓜奠定基础。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 PCR融合基因 SOE法

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dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究 被引量：10

5

作者 张帆 姜玲 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期385-391,共7页

以模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）和烟草（Nicotiana tabacum）及PRSV寄主植物番木瓜（CaricapapayaL.）作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外... 以模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）和烟草（Nicotiana tabacum）及PRSV寄主植物番木瓜（CaricapapayaL.）作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外壳蛋白CP基因反向重复表达载体pHellsgate12-CPIR（简称PHG12-CPIR）分别转化到烟草和拟南芥中,获得阳性植株,并利用渗透法和农杆菌介导的瞬时表达体系将pHG12-CPIR载体导入到番木瓜中。对转基因植株进行攻毒试验并分析了其抗病性。在接种3~7d内,在拟南芥和番木瓜上转基因植株的发病情况较轻,而野生型植株叶片与转基因植株相比,均表现出不同程度的黄化、皱缩和枯斑等症状。在接种PRSV后,番木瓜和拟南芥转化植株表现症状的叶片的比例与对照相比,结果显著低于对照,而在烟草植株上症状表现的差异不明显。在3种植物上RT-PCR检测结果显示,在接种番木瓜环斑病毒PRSV后,野生型植株中有高浓度的病毒积累,而转pHG12-CPIR基因植株中几乎没有病毒积累,推测转pHG12-CPIR基因植株中瞬时表达系统已启动RNAi机制抑制了CP基因的表达。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 CP基因 番木瓜 RNAi 抗病性 渗透法

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番木瓜环斑病毒研究进展 被引量：5

6

作者 黄江华 黄嘉薇 +1 位作者 张建军 彭仁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第8期3257-3259,共3页

综述了番木瓜病毒株系、生物学特性、检测及防治方法的最新研究进展。

关键词 番木瓜环斑病毒 株系 检测 防治

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番木瓜环斑病毒海南分离物全基因组结构分析 被引量：3

7

作者 卢雅薇 沈文涛 +2 位作者 唐清杰 牛艳梅 周鹏 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第9期54-58,共5页

从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分... 从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分析表明,HaiNan-P编码的氨基酸序列与GenBank中公布的11株PRSV同源性为89.8%~93.2%,略高于全长核苷酸的82.3%~89.1%。P1蛋白编码区同源性较低,仅为65.4%~80.1%,而HC-Pro、CI及CP同源性相对较高。运用MEGA 3.1软件、NJ法绘制系统进化树,分析结果显示,PRSV分离株类群分化与地理分布有一定的相关性。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 全基因组 同源性 系统进化树

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海南番木瓜环斑病毒全长cDNA克隆及其侵染性克隆构建 被引量：3

8

作者 赵光远 庹德财 +2 位作者 沈文涛 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期911-917,共7页

为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术（RACE）对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物（... 为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术（RACE）对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物（PRSV-HN2）的基因组cDNA进行了全序列测定。PRSV-HN2全长cDNA包含10 326 nt（不包括3′端的polyA,Gen Bank登录号为KF791028）,能编码3 346个氨基酸。对PRSV-HN2基因组核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了结构和功能分析,结果表明,其与其它23个PRSV分离物的核酸序列相似度达81%-91%,氨基酸相似度为88%-94%。利用酵母同源重组系统成功构建其侵染性克隆载体并通过农杆菌转化与侵染,最终获得其侵染性克隆。这为在分子水平上研究PRSV遗传变异、侵染及致病机理奠定理论基础。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 全长CDNA 克隆 酵母同源重组 序列分析 侵染性克隆

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转番木瓜环斑病毒复制酶基因番木瓜的多重定性检测 被引量：4

9

作者 阮小蕾 马丽娟 李华平 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期626-629,682,共5页

为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系... 为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系.退火温度为40～60℃时,都分别扩增出了清晰的目的基因.单基因常规PCR检测转基因模板量的下限为5×10-7g.建立的三重PCR检测技术,检测了包括NPTⅡ、Rep和CaMV35S;NPTⅡ、Rep和Nos;NPTⅡ、Rep和Papain等3个组合.建立了NPTⅡ、ReP、CaMV35S和Nos4个基因的四重PCR检测技术. 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 转基因番木瓜 多重聚合酶链式反应

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番木瓜环斑病毒海南株系植物RNAi表达载体的构建 被引量：2

10

作者 赵辉 张雨良 +5 位作者 孔华 贾瑞宗 朱芸 郭安平 曾会才 彭明 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2210-2215,共6页

为研究广谱抗环斑病毒(PRSV)海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白(CP)、辅助成分-蛋白酶(HC-Pro)和复制酶(Nib)基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区... 为研究广谱抗环斑病毒(PRSV)海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白(CP)、辅助成分-蛋白酶(HC-Pro)和复制酶(Nib)基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区域和挑选出海南PRSV典型株系的代表样品。以p UCCRNAi为骨架质粒,利用代表样品的CP、NIb、Hc-Pro基因片断保守序列构建RNAi发夹结构,将发夹结构导入p CAMBIA2300-35S-OCS植物表达载体,构建出抗PRSV植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS、p CAMBIA230035S-Hc-Pro-RNAi-OCS、p CAMBIA2300-35S-NIb-RNAi-OCS。实验将PRSV不同株系保守序列的分析与RNAi的高效抗病设计理念相结合,可用于创造高效、广谱抗PRSV病毒病的新种质。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 RNA沉默 基因转化

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番木瓜环斑病毒CP基因同源区段的克隆及植物表达载体的构建 被引量：2

11

作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 蔡群芳 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第2期54-59,共6页

采用RT-PCR技术对番木瓜环斑病毒CP基因的同源区段进行了克隆和鉴定分析。序列分析结果表明,获得PRSV-CP基因3′端的278bp DNA片段同源率最高。构建了目的基因包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p... 采用RT-PCR技术对番木瓜环斑病毒CP基因的同源区段进行了克隆和鉴定分析。序列分析结果表明,获得PRSV-CP基因3′端的278bp DNA片段同源率最高。构建了目的基因包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,并通过电激法导入农杆菌中。经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入获得了农杆菌工程菌株。利用该植物表达载体对番木瓜的遗传转化工作目前正在进行中。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因 同源区段 RNA介导植物表达载体 农杆菌工程菌株

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番木瓜环斑病毒海南南瓜分离物全基因组序列分析 被引量：2

12

作者 车海彦 曹学仁 罗大全 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第3期38-43,51,共7页

【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PR... 【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PRSV,采用分段扩增测序方法拼接获得PRSV-HnPumpkin基因组,利用NC-BI中的BLAST工具、DNAStar和MEGA 6.06软件进行序列分析及系统关系树构建。【结果】DAS-ELISA和RT-PCR检测结果表明,采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中存在PRSV(PRSV-HnPumpkin)。PRSV-HnPumpkin基因组全长为10 327nt,具有典型的PRSV基因组结构特征,含有1个开放阅读框,编码1个含有3 345个氨基酸的多聚蛋白。PRSV-HnPumpkin与已报道的其他PRSV分离物核苷酸和氨基酸之间的相似性分别为80.6%～95.1%和90.7%～97.9%。系统关系分析表明,PRSV-HnPumpkin与亚洲分离物处于同一组中,且与我国台湾分离物亲缘关系较近。【结论】获得了PRSV-HnPumpkin全序列,但其进化来源有待进一步探讨。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 南瓜病毒病 基因序列分析

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dsRNA介导的PRSV-CP基因3′-端同源序列瞬时表达对番木瓜环斑病毒侵染的影响 被引量：2

13

作者 魏军亚 刘德兵 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第3期78-82,共5页

体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法... 体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究同源dsRNA对番木瓜环斑病毒(PRSV)侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的dsRNA能够特异地干扰PRSV侵染。 展开更多

关键词 DSRNA 农杆菌浸润法 干扰 番木瓜环斑病毒

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番木瓜环斑病毒西瓜株系衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备 被引量：2

14

作者 黄显德 王玉 +2 位作者 田延平 古勤生 李向东 《山东农业科学》 2017年第12期86-89,共4页

以感染番木瓜环斑病毒西瓜株系(papaya ringspot virus-watermelon strain,PRSV-W)的西葫芦叶片为供试材料,通过RT-PCR克隆PRSV-W衣壳蛋白(coat protein,CP)基因,并将其连接到原核表达载体pEHISTEV上得到重组质粒pEHISTEV-PRSV-W-CP。... 以感染番木瓜环斑病毒西瓜株系(papaya ringspot virus-watermelon strain,PRSV-W)的西葫芦叶片为供试材料,通过RT-PCR克隆PRSV-W衣壳蛋白(coat protein,CP)基因,并将其连接到原核表达载体pEHISTEV上得到重组质粒pEHISTEV-PRSV-W-CP。将其转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后可表达分子量约为37 kD的融合蛋白。将融合蛋白从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰长耳兔,制备PRSV-W CP的抗血清。间接ELISA测定该血清效价为1∶8192。Western blot检测结果表明,该抗血清只与感染PRSV的西葫芦样品有特异性反应,而与健康西葫芦、感染西瓜花叶病毒的西葫芦及感染马铃薯Y病毒的普通烟样品均无反应。本研究为PRSV的快速检测以及CP蛋白功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒西瓜株系 衣壳蛋白 原核表达 抗血清制备 检测

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7种番木瓜环斑病毒分离株外壳蛋白基因的克隆与序列比较 被引量：4

15

作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 蔡群芳 黎小瑛 周鹏 《华南热带农业大学学报》 2006年第4期1-5,共5页

采用RT-PCR技术对我国海南、云南、广西和广东等不同番木瓜生产区的7个番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)进行克隆和鉴定分析。PRSV-CP编码区在864～873核苷酸之间,编码288～291氨基酸。对分离的7个PRSV-CP的核苷酸及氨基酸序列的比... 采用RT-PCR技术对我国海南、云南、广西和广东等不同番木瓜生产区的7个番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)进行克隆和鉴定分析。PRSV-CP编码区在864～873核苷酸之间,编码288～291氨基酸。对分离的7个PRSV-CP的核苷酸及氨基酸序列的比较结果表明大部分序列差异都处于N端,而各产区番木瓜PRSV-CP基因的3′端586～864bp区段,即278bpDNA片断的同源率最高,达到98.5%。这一同源序列的获得为利用植物基因工程培育广谱抗病性的番木瓜新品系奠定了基础。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 外壳蛋白基因 克隆 序列比较

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云南番木瓜环斑病毒部分ci基因的克隆及序列分析

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作者 朱静 谭冠林 +3 位作者 李晓静 刘芳 包改丽 李凡 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期637-641,共5页

对云南昆明、楚雄、保山、德宏、临沧、玉溪、红河等地番木瓜、南瓜和罗汉果上获得的番木瓜环斑病毒（Papayaringspotvirus，PRSV）不同分离物进行了部分ci基因的克隆和序列分析，获得的部分ci基因长666nt，编码221个氨基酸。关于13个P... 对云南昆明、楚雄、保山、德宏、临沧、玉溪、红河等地番木瓜、南瓜和罗汉果上获得的番木瓜环斑病毒（Papayaringspotvirus，PRSV）不同分离物进行了部分ci基因的克隆和序列分析，获得的部分ci基因长666nt，编码221个氨基酸。关于13个PRSV云南分离物部分ci基因核苷酸序列的同源性为80％。98％，氨基酸同源性为92％-100％。选取本文具有代表性的9个PRSV分离物与国内外12个PRSV分离物相比，核苷酸序列的同源性为79％-93％，氨基酸序列同源性为92％-99％。运用MEGA软件绘制的基于部分ci基因核苷酸序列的系统进化树表明，这些PRSV病毒可以分为两个大组，本文获得的9个云南分离物中的8个分离物与印度分离物（India—W—EU475877）聚为第1组，第Ⅱ组成员比较复杂，包括大部分的亚洲分离物及全部美洲分离物。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 ci基因 克隆 序列分析

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原核表达番木瓜环斑病毒NIa-Pro及其双重酶活鉴定 被引量：4

17

作者 韩杰 郑继平 +4 位作者 言普 庹德财 黎小瑛 沈文涛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期722-727,共6页

番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)编码的核内涵体蛋白a蛋白酶(Nuclear inclusion body a proteinase,NIa-Pro)是一种多功能病毒非结构蛋白,在病毒侵染宿主及病毒与宿主互作中起着重要作用。本研究利用以麦芽糖结合蛋白(MBP)... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)编码的核内涵体蛋白a蛋白酶(Nuclear inclusion body a proteinase,NIa-Pro)是一种多功能病毒非结构蛋白,在病毒侵染宿主及病毒与宿主互作中起着重要作用。本研究利用以麦芽糖结合蛋白(MBP)为融合表达框架的原核表达系统构建了表达NIa-Pro的重组载体pMAL-c5xNP,并转化大肠杆菌,经IPTG诱导和Ni^(2+)-NTA-琼脂糖亲和层析纯化获得了可溶的重组融合蛋白MBP-NIa(N端和C端分别融合MBP和His标签),然后利用蛋白酶Factor Xa切去重组融合蛋白中的MBP,再通过直链淀粉树脂亲和层析纯化获得了可溶的重组蛋白NIa-Pro。活性检测结果表明,重组蛋白PRSV-NIa-Pro具有非特异的双链DNA酶和特异的蛋白酶双重活性。 展开更多

关键词 NIa-Pro 番木瓜环斑病毒 原核表达 蛋白酶 DNA酶

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用Golden Gate法构建广谱抗番木瓜环斑病毒海南株系的CRISPR/FnCas9植物表达载体 被引量：4

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作者 王绪朋 赵辉 +3 位作者 贾瑞宗 孔华 郭运玲 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期955-962,共8页

分子生物学育种是目前防治番木瓜环斑病毒(PRSV)最有效的方法。早期转基因番木瓜抗病毒的策略是根据"致病菌衍生的抗病性"(PDR)原理,将病毒来源的基因全长序列,转入番木瓜并获得抗性。PDR策略最主要特点依赖于靶目标病毒基因... 分子生物学育种是目前防治番木瓜环斑病毒(PRSV)最有效的方法。早期转基因番木瓜抗病毒的策略是根据"致病菌衍生的抗病性"(PDR)原理,将病毒来源的基因全长序列,转入番木瓜并获得抗性。PDR策略最主要特点依赖于靶目标病毒基因序列相似性,不能有效解决海南的番木瓜环斑病毒遗传多样性复杂的株系。本研究着眼于创制广谱的抗PRSV新策略,用最新的CRISPR/FnCas9基因编辑技术和Golden Gate载体构建系统,依据不同PRSV株系的保守序列分析结果,将5个sgRNA(2个CP sgRNA,2个Nib sgRNA和1个HC-Pro sgRNA)串联在一个载体上,实现一个载体可识别剪切5个位点,从而达到广谱抗PRSV的效果,应对海南地区PRSV株系复杂的问题。目前载体已经进行了测序验证,并在番木瓜上进行了叶片局部瞬时表达,初步表现出对PRSV的抑制效果,这为获得广谱抗番木瓜环斑病毒的番木瓜品种奠定良好基础。 展开更多

关键词 番木瓜 CRISPR 番木瓜环斑病毒 广谱抗病 基因组编辑

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壳聚糖复合链霉菌30702对番木瓜环斑病毒病的防控效果 被引量：2

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作者 王浩晨 陈萍 +2 位作者 樊俊华 黄小龙 张荣萍 《中国南方果树》 北大核心 2020年第5期68-72,共5页

以"台农二号"番木瓜种苗为材料,设置壳聚糖1.0、0.5、0.25 g/L单一处理,壳聚糖+链霉菌30702菌液4.2×10~6 cfu/L,以宁南霉素0.05 g/L和清水处理为对照,测定各处理对番木瓜环斑病毒病(PRSV)的防效;并测定种苗叶片过氧化物... 以"台农二号"番木瓜种苗为材料,设置壳聚糖1.0、0.5、0.25 g/L单一处理,壳聚糖+链霉菌30702菌液4.2×10~6 cfu/L,以宁南霉素0.05 g/L和清水处理为对照,测定各处理对番木瓜环斑病毒病(PRSV)的防效;并测定种苗叶片过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性。结果表明,处理后56 d,壳聚糖1.0 g/L+链霉菌30702的防治效果最高,为88.6%,显著高于其他处理;壳聚糖+链霉菌30702处理的防治效果,SOD、POD、PPO活性较单独使用壳聚糖处理显著提升。 展开更多

关键词 番木瓜 壳聚糖 链霉菌30702 番木瓜环斑病毒病(PRSV)

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番木瓜环斑病毒弱毒株的构建及分析 被引量：1

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作者 付兰兰 庹德财 +3 位作者 沈文涛 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第12期2366-2375,共10页

弱毒株是利用交叉保护防治植物病毒病害的关键限制因子。通过对马铃薯Y病毒属病毒(强、弱毒株)的全长及部分氨基酸序列比对分析,筛选出在亲本强毒株PRSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8个可能与致病性相关的氨基酸突变位点(I_(309)、K_(481)、... 弱毒株是利用交叉保护防治植物病毒病害的关键限制因子。通过对马铃薯Y病毒属病毒(强、弱毒株)的全长及部分氨基酸序列比对分析,筛选出在亲本强毒株PRSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8个可能与致病性相关的氨基酸突变位点(I_(309)、K_(481)、K_(598)、R_(728)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))。采用定点突变和Gibson拼接法,分别成功构建了4种含有2个突变位点(L_(754)和N_(787))、4个突变位点(I_(309)、K_(481)、F_(753)和D_(944))、6个突变位点(I_(309)、K_(481)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))和8个突变位点(I_(309)、K_(481)、K_(598)、R_(728)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))的PRSV-LM全长c DNA侵染性克隆突变体:p Gprsvm^2、p Gprsvm4、p Gprsvm6和p Gprsvm8。经人工接种、病症观察和RT-PCR检测,4种突变体克隆均能系统性侵染非转基因番木瓜植株,除克隆p Gprsvm^2的病症表现与亲本强毒株PRSV-LM一致外,其他多位点突变的克隆p Gprsvm4、p Gprsvm6和p Gprsvm8在番木瓜植株上的病症严重程度出现依次减弱,而克隆p Gprsvm8的病症最弱,且延迟2周发病。本实验初步验证了6个氨基酸突变位点(I_(309)→S、K_(481)→Q、K_(598)→E、F_(753)→L、R_(728)→I和D_(944)→N)与PRSV-LM的病症表现及致病力相关,其中K_(598)→E和R_(728)→I可能是影响致病性的关键位点。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 弱毒株 定点突变 交叉保护

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