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一种快速鉴定Femu2p-C_2H_2蛋白与TTGGGTBOX相互作用的EMSA实验法 被引量:1
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作者 费小雯 吴小霞 +1 位作者 范新照 邓晓东 《热带生物学报》 2013年第4期365-368,共4页
分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA... 分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的特异性竞争反应分析。 展开更多
关键词 电泳迁移(EMSA)实验 Femu2p-C2H2蛋白 TTGGGT Box 特异性竞争反应
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氯胺酮对离体人辅助T细胞分化的影响
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作者 高梅 孙杰 +1 位作者 金文杰 钱燕宁 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1741-1747,共7页
目的:探讨氯胺酮对离体人辅助性T(Th)细胞分化和细胞内转录因子T-bet及GATA3活性的影响。方法:10例男性健康志愿者(20~45岁,BMI 15~25 kg/m2),分别采集空腹时外周静脉血20 ml,分离外周血单核细胞(PBMCs)。每份血样的PBMCs均随机加入... 目的:探讨氯胺酮对离体人辅助性T(Th)细胞分化和细胞内转录因子T-bet及GATA3活性的影响。方法:10例男性健康志愿者(20~45岁,BMI 15~25 kg/m2),分别采集空腹时外周静脉血20 ml,分离外周血单核细胞(PBMCs)。每份血样的PBMCs均随机加入佛波醇-十四酸酯-乙酸酯(PMA)25 ng/ml和离子霉素1μg/ml以及各种浓度(0、50、100、200μmol/L)的氯胺酮孵育4 h。然后测量Th细胞亚群百分数、上清液中的干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)的水平以及细胞内转录因子T-bet和GATA3的DNA结合活性。结果:在PMA和离子霉素刺激下Th1和Th2细胞计数、IFN-γ和IL-4水平均显著增加;在PMA和离子霉素刺激下,氯胺酮剂量依赖性降低Th1和Th2细胞计数、IFN-γ和IL-4水平,而增加Th1、Th2细胞计数的比值(Th1/Th2)和IFN-γ、IL-4的比值(IFN-γ/IL-4);同样经刺激后,细胞内T-bet和GATA3的活性显著增加;氯胺酮剂量依赖性降低T-bet和GATA3的活性,而增加T-bet与GATA3活性的比值(T-bet/GATA3)。结论:在PMA和离子霉素的刺激下,氯胺酮能够抑制Th细胞的分化,从而抑制各细胞因子的分泌,但Th1/Th2增加;氯胺酮增加Th1/Th2可能与调节增加T-bet/GATA3有关。 展开更多
关键词 氯胺酮 辅助T细胞 细胞因子 电泳迁移率实验
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NF-κB参与枸橼酸铁铵过载诱导的人肝细胞hepcidin基因表达 被引量:1
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作者 李士伟 李想 关锋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期695-701,共7页
目的:研究核因子κB(NF-κB)在枸橼酸铁铵过载诱导人肝细胞铁调素(hepcidin)基因表达中的调控作用。方法:依据前期不同浓度枸橼酸铁铵抑制人肝细胞HH4增殖实验结果,选取0.1、1、5和10 mmol/L枸橼酸铁铵处理人肝细胞HH4 48 h,半定量PCR... 目的:研究核因子κB(NF-κB)在枸橼酸铁铵过载诱导人肝细胞铁调素(hepcidin)基因表达中的调控作用。方法:依据前期不同浓度枸橼酸铁铵抑制人肝细胞HH4增殖实验结果,选取0.1、1、5和10 mmol/L枸橼酸铁铵处理人肝细胞HH4 48 h,半定量PCR法检测胞内hepcidin的表达水平;利用染色质免疫共沉淀(Ch IP)、电泳迁移率实验(EMSA)和双萤光素酶报告基因检测系统,并结合胞内NF-κB活性抑制实验,确定NF-κB对人hepcidin转录活性的影响。结果:5 mmol/L和10 mmol/L浓度的枸橼酸铁铵处理细胞后,hepcidin表达水平显著增强;Ch IP和EMSA实验证实NF-κB能够与hepcidin基因启动子结合;重组萤光素酶报告质粒TOPFlash-p Hepcidin相对萤光素酶活性明显高于对照组;与重组质粒TOPFlash-p Hepcidin相比,突变重组萤光素酶报告质粒TOPFlash-p Hepcidin-mut相对萤光素酶活性显著降低;NF-κB抑制剂BAY 11-7082显著降低了hepcidin基因的表达。结论:NF-κB参与了铁过载诱导的人hepcidin基因表达。这为进一步深入研究肝细胞铁过载模式下多因子协同调控hepcidin基因表达的具体分子机理奠定了基础。 展开更多
关键词 核因子ΚB 染色质免疫共沉淀 电泳迁移率实验 双萤光素酶报告基因检测系统 铁调素
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玉米转录因子zmCBF1的凝胶阻滞分析 被引量:3
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作者 杨红梅 王磊 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第6期81-83,共3页
凝胶阻滞试验是分析核酸与蛋白质相互作用的有效方法,在转录因子的功能分析中得到了广泛应用。以玉米转录因子zmCBF1与顺式元件CRT的结合为例,建立了用于转录因子分析的GRA/EMSA实验体系,并对其在应用中可能出现的问题进行了分析。
关键词 凝胶阻滞实验 电泳迁移变动实验 转录因子 顺式元件
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转录因子Ets-1与β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析(英文)
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作者 仇灏 徐正荣 +3 位作者 邵雪君 周迎会 徐岚 吴士良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期61-65,共5页
β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8(β3GnT-2,β3GnT-8)共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖([Galβ1→4GlcNAcβ1→3]n)的合成,从而使得细胞表面的相应糖链结构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株HL-6... β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8(β3GnT-2,β3GnT-8)共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖([Galβ1→4GlcNAcβ1→3]n)的合成,从而使得细胞表面的相应糖链结构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8的表达上调,但其分子机制不明.本文旨在探讨ATRA诱导HL-60分化过程中,转录因子Ets-1对β3GnT-2,-8表达调控的分子机制.采用10-6mol/L ATRA诱导人白血病细胞株HL-60向粒系分化,RT-PCR检测到细胞中Ets-1的表达明显增加;进一步采用染色质免疫沉淀(ChIP)结合电泳迁移率变动实验(EMSA)检测证实,有活化的Ets-1结合至β3GnT-2/-8基因调控区.以上结果表明,转录因子Ets-1对人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8基因有表达调控作用. 展开更多
关键词 转录因子ETS-1 β1 3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 HL-60细胞系 全反式维甲酸(ATRA) 染色质免疫沉淀(ChIP) 电泳迁移变动实验(EMSA)
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