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毕赤酵母Sut2对甲醇代谢的调控研究
被引量:
1
1
作者
郑雅婷
李翔
+2 位作者
王鹏程
杨艳坤
白仲虎
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期29-33,共5页
根据毕赤酵母Sut2基因表达在甲醇培养基中显著升高的特性,进一步探究该基因的功能及其与甲醇代谢的关系。在毕赤酵母基因组中,利用同源重组原理,分别通过双交换和单交换构建Sut2敲除菌株与Sut2过表达菌株。同时培养GS115-ΔSut2、GS115-...
根据毕赤酵母Sut2基因表达在甲醇培养基中显著升高的特性,进一步探究该基因的功能及其与甲醇代谢的关系。在毕赤酵母基因组中,利用同源重组原理,分别通过双交换和单交换构建Sut2敲除菌株与Sut2过表达菌株。同时培养GS115-ΔSut2、GS115-Sut2和GS115野生型菌株,检测并比较Aox1基因的转录和翻译水平。以甲醇和甲醛分别作碳源培养菌株,检测Sut2的转录水平,从而鉴定该基因的诱导剂。用高效液相色谱法(HPLC)检测毕赤酵母菌株细胞内外麦角固醇含量。结果显示:Sut2主要由甲醇所诱导,对Aox1有一定程度的正调控作用,但两个基因可能参与复杂的调控网络和反馈回路,因而间接相互作用;HPLC结果表明,Sut2基因可能与麦角固醇合成有关。探究Sut2对甲醇代谢的调控机理,进一步丰富了巴斯德毕赤酵母甲醇代谢通路。
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关键词
毕赤酵母
Sut2基因
Aox1基因
甲醇代谢
麦角固醇
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职称材料
施用甲醇刺激矮牵牛的生长效应与其代谢关系初探
2
作者
邓永利
唐丽娟
+2 位作者
张韦
王莎莎
陈丽梅
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期99-105,共7页
大量研究表明施用甲醇能够促进多种植物的生长,在甲醇刺激植物生长的机理中,支持碳源假说的证据最多。该研究通过考察矮牵牛甲醇代谢与甲醇刺激其生长的相关性,对碳源假说进行验证。结果表明:(1)在MS固体培养基上添加2和6mmol/L CH3OH...
大量研究表明施用甲醇能够促进多种植物的生长,在甲醇刺激植物生长的机理中,支持碳源假说的证据最多。该研究通过考察矮牵牛甲醇代谢与甲醇刺激其生长的相关性,对碳源假说进行验证。结果表明:(1)在MS固体培养基上添加2和6mmol/L CH3OH均可促进矮牵牛的生长和叶绿素含量增加,但2mmol/L CH3OH(低浓度)效果好于6mmol/L(高浓度),而且添加6mmol/L CH3OH会诱发较强的氧化胁迫。(2)进一步用13 C-NMR分析矮牵牛对不同浓度13 CH3OH的代谢作用发现,6mmol/L 13 CH3OH处理矮牵牛中[U-13 C]Fruc和[U-13 C]Gluc的生成量显著大于2mmol/L 13 CH3OH处理,即来自甲醇的碳源在代谢过程中虽被卡尔文循环同化为糖类物质,但这部分碳源对甲醇刺激矮牵牛的生长贡献不大。这些证据表明CH3OH代谢与其刺激矮牵牛生长的效果没有关联性,该实验结果不支持碳源假说。
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关键词
甲醇
应用
矮牵牛
促进生长
甲醇代谢
碳源假说
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职称材料
高等植物中一碳化合物代谢研究进展
被引量:
10
3
作者
徐迪
陈丽梅
+1 位作者
年洪娟
梅岩
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期1284-1289,共6页
高等植物中一碳(C1)化合物的代谢主要包括甲醇代谢、甲醛代谢和甲酸代谢等,它们是高等植物一碳单位代谢的重要组成部分.由于C1化合物的代谢机制复杂、代谢规模非常小、参与代谢反应的酶和中间产物的含量低且不稳定等特点,相关研究报道...
高等植物中一碳(C1)化合物的代谢主要包括甲醇代谢、甲醛代谢和甲酸代谢等,它们是高等植物一碳单位代谢的重要组成部分.由于C1化合物的代谢机制复杂、代谢规模非常小、参与代谢反应的酶和中间产物的含量低且不稳定等特点,相关研究报道很有限.现代生化和分子遗传学方法的综合使用使得人们对参与植物中C1化合物代谢的酶和基因有了一定程度的了解,该文主要综述了近年来有关高等植物中内源和外源C1化合物甲醇、甲醛和甲酸的来源和代谢途径方面的研究进展,并提出了该研究领域目前存在的问题和今后的研究方向.
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关键词
高等植物
一碳化合物
甲醇代谢
甲醛
代谢
甲酸
代谢
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职称材料
利用SpyTag/SpyCatcher体系提高毕赤酵母重组蛋白生产能力
被引量:
1
4
作者
韩双艳
李静文
王媛媛
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期143-154,共12页
毕赤酵母是一种甲基营养型酵母,可以利用甲醇作为唯一的碳源和能源,是应用最为广泛的真核外源蛋白表达系统之一。毕赤酵母的甲醇利用率和同化效率较低,高浓度甲醇对细胞有毒性,其中间代谢产物甲醛、甲酸等毒性物质的积累会严重抑制细胞...
毕赤酵母是一种甲基营养型酵母,可以利用甲醇作为唯一的碳源和能源,是应用最为广泛的真核外源蛋白表达系统之一。毕赤酵母的甲醇利用率和同化效率较低,高浓度甲醇对细胞有毒性,其中间代谢产物甲醛、甲酸等毒性物质的积累会严重抑制细胞生长,限制目的蛋白的产量。本研究拟在毕赤酵母过氧化物酶体中,利用多酶组装技术在甲醇代谢关键酶之间构建底物通道,减少甲醛积累,增大同化途径通量,提高甲醇耐受性,提高毕赤酵母表达外源蛋白能力,获得高效利用甲醇的毕赤酵母人工细胞。研究首先采用双分子荧光互补(BiFC)分析技术验证了多酶组装技术—SpyTag/SpyCatcher体系在毕赤酵母中自组装的可行性,随后利用SpyTag和SpyCatcher成功实现了甲醇氧化酶(AOX)和二羟丙酮合酶(DAS)在胞内自组装形成双酶复合体;在此基础上,引入绿色荧光蛋白EGFP作为报告蛋白,考察表达自组装双酶复合体的重组毕赤酵母利用甲醇进行细胞生长和重组蛋白合成的能力。结果显示,在2%(体积分数)甲醇培养基中,相比原始菌株,表达双酶组装体系的重组菌株的生物量提高了2.3倍,单位D(600)细胞表达的EGFP荧光强度提高了4.51倍,是未组装菌株的2.76倍,EGFP产量约为1.52 mg/mL。
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关键词
毕赤酵母
甲醇代谢
双酶组装
SpyTag/SpyCatcher
双分子荧光互补
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职称材料
题名
毕赤酵母Sut2对甲醇代谢的调控研究
被引量:
1
1
作者
郑雅婷
李翔
王鹏程
杨艳坤
白仲虎
机构
江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期29-33,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31570034)
江苏省第十五批六大人才高峰项目(SWYY-180)。
文摘
根据毕赤酵母Sut2基因表达在甲醇培养基中显著升高的特性,进一步探究该基因的功能及其与甲醇代谢的关系。在毕赤酵母基因组中,利用同源重组原理,分别通过双交换和单交换构建Sut2敲除菌株与Sut2过表达菌株。同时培养GS115-ΔSut2、GS115-Sut2和GS115野生型菌株,检测并比较Aox1基因的转录和翻译水平。以甲醇和甲醛分别作碳源培养菌株,检测Sut2的转录水平,从而鉴定该基因的诱导剂。用高效液相色谱法(HPLC)检测毕赤酵母菌株细胞内外麦角固醇含量。结果显示:Sut2主要由甲醇所诱导,对Aox1有一定程度的正调控作用,但两个基因可能参与复杂的调控网络和反馈回路,因而间接相互作用;HPLC结果表明,Sut2基因可能与麦角固醇合成有关。探究Sut2对甲醇代谢的调控机理,进一步丰富了巴斯德毕赤酵母甲醇代谢通路。
关键词
毕赤酵母
Sut2基因
Aox1基因
甲醇代谢
麦角固醇
Keywords
Pichia pastoris
Sut2
Aox1
methanol metabolism
ergosterol
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q493 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
施用甲醇刺激矮牵牛的生长效应与其代谢关系初探
2
作者
邓永利
唐丽娟
张韦
王莎莎
陈丽梅
机构
昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期99-105,共7页
基金
国家自然科学基金(30970263)
文摘
大量研究表明施用甲醇能够促进多种植物的生长,在甲醇刺激植物生长的机理中,支持碳源假说的证据最多。该研究通过考察矮牵牛甲醇代谢与甲醇刺激其生长的相关性,对碳源假说进行验证。结果表明:(1)在MS固体培养基上添加2和6mmol/L CH3OH均可促进矮牵牛的生长和叶绿素含量增加,但2mmol/L CH3OH(低浓度)效果好于6mmol/L(高浓度),而且添加6mmol/L CH3OH会诱发较强的氧化胁迫。(2)进一步用13 C-NMR分析矮牵牛对不同浓度13 CH3OH的代谢作用发现,6mmol/L 13 CH3OH处理矮牵牛中[U-13 C]Fruc和[U-13 C]Gluc的生成量显著大于2mmol/L 13 CH3OH处理,即来自甲醇的碳源在代谢过程中虽被卡尔文循环同化为糖类物质,但这部分碳源对甲醇刺激矮牵牛的生长贡献不大。这些证据表明CH3OH代谢与其刺激矮牵牛生长的效果没有关联性,该实验结果不支持碳源假说。
关键词
甲醇
应用
矮牵牛
促进生长
甲醇代谢
碳源假说
Keywords
methanol application
Petunia hybrida
growth promotion
methanol metabolism
carbon source hypothesis
分类号
Q945.18 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
高等植物中一碳化合物代谢研究进展
被引量:
10
3
作者
徐迪
陈丽梅
年洪娟
梅岩
机构
昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期1284-1289,共6页
基金
国家自然科学基金(30670163)
云南省中青年学术与技术带头人培养费和昆明理工大学人才培养费(2004PY01-5)
文摘
高等植物中一碳(C1)化合物的代谢主要包括甲醇代谢、甲醛代谢和甲酸代谢等,它们是高等植物一碳单位代谢的重要组成部分.由于C1化合物的代谢机制复杂、代谢规模非常小、参与代谢反应的酶和中间产物的含量低且不稳定等特点,相关研究报道很有限.现代生化和分子遗传学方法的综合使用使得人们对参与植物中C1化合物代谢的酶和基因有了一定程度的了解,该文主要综述了近年来有关高等植物中内源和外源C1化合物甲醇、甲醛和甲酸的来源和代谢途径方面的研究进展,并提出了该研究领域目前存在的问题和今后的研究方向.
关键词
高等植物
一碳化合物
甲醇代谢
甲醛
代谢
甲酸
代谢
Keywords
higher plants
C1 compounds
methanol metabolism
formaldehyde metabolism
formic acid metabolism
分类号
Q945.18 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
利用SpyTag/SpyCatcher体系提高毕赤酵母重组蛋白生产能力
被引量:
1
4
作者
韩双艳
李静文
王媛媛
机构
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期143-154,共12页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFA0901500)。
文摘
毕赤酵母是一种甲基营养型酵母,可以利用甲醇作为唯一的碳源和能源,是应用最为广泛的真核外源蛋白表达系统之一。毕赤酵母的甲醇利用率和同化效率较低,高浓度甲醇对细胞有毒性,其中间代谢产物甲醛、甲酸等毒性物质的积累会严重抑制细胞生长,限制目的蛋白的产量。本研究拟在毕赤酵母过氧化物酶体中,利用多酶组装技术在甲醇代谢关键酶之间构建底物通道,减少甲醛积累,增大同化途径通量,提高甲醇耐受性,提高毕赤酵母表达外源蛋白能力,获得高效利用甲醇的毕赤酵母人工细胞。研究首先采用双分子荧光互补(BiFC)分析技术验证了多酶组装技术—SpyTag/SpyCatcher体系在毕赤酵母中自组装的可行性,随后利用SpyTag和SpyCatcher成功实现了甲醇氧化酶(AOX)和二羟丙酮合酶(DAS)在胞内自组装形成双酶复合体;在此基础上,引入绿色荧光蛋白EGFP作为报告蛋白,考察表达自组装双酶复合体的重组毕赤酵母利用甲醇进行细胞生长和重组蛋白合成的能力。结果显示,在2%(体积分数)甲醇培养基中,相比原始菌株,表达双酶组装体系的重组菌株的生物量提高了2.3倍,单位D(600)细胞表达的EGFP荧光强度提高了4.51倍,是未组装菌株的2.76倍,EGFP产量约为1.52 mg/mL。
关键词
毕赤酵母
甲醇代谢
双酶组装
SpyTag/SpyCatcher
双分子荧光互补
Keywords
Pichia pastoris
methanol metabolism
double-enzyme assembly
SpyTag/SpyCatcher
bimolecular fluorescence complementation
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
毕赤酵母Sut2对甲醇代谢的调控研究
郑雅婷
李翔
王鹏程
杨艳坤
白仲虎
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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职称材料
2
施用甲醇刺激矮牵牛的生长效应与其代谢关系初探
邓永利
唐丽娟
张韦
王莎莎
陈丽梅
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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下载PDF
职称材料
3
高等植物中一碳化合物代谢研究进展
徐迪
陈丽梅
年洪娟
梅岩
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
10
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
利用SpyTag/SpyCatcher体系提高毕赤酵母重组蛋白生产能力
韩双艳
李静文
王媛媛
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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