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pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体的构建及在PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体介导下转染肝癌细胞
被引量：
4
1
作者
贾萌
彭健
+4 位作者
周健
陈伟
赵劲风
潘一峰
张阳德
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2008年第3期473-477,共5页
目的:构建甲胎蛋白(AFP)启动子介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组真核表达载体,并检测其在AFP阳性肝癌细胞株的特异性表达。方法:PCR扩增AFP基因启动子、HSV-TK基因,将上述片段插入EGFP-N1载体的多克隆位点,构建pEGFP-AFP-TK重组...
目的:构建甲胎蛋白(AFP)启动子介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组真核表达载体,并检测其在AFP阳性肝癌细胞株的特异性表达。方法:PCR扩增AFP基因启动子、HSV-TK基因,将上述片段插入EGFP-N1载体的多克隆位点,构建pEGFP-AFP-TK重组表达载体,通过包裹PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体,经其介导,转染AFP阳性肝癌细胞株HepG2和AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721,利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法检测目的基因在2种细胞系中的表达。结果与结论:肝癌特异性真核表达载体pEGFP-AFP-TK构建成功。利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法可以检测到嵌合AFP启动子的pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体能够特异性在AFP阳性的肝癌细胞株表达,而在AFP阴性的肝癌细胞株中基本不表达。
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关键词
甲胎蛋白启动子
单纯疱疹病毒胸苷激酶
自杀基因
PEG—PEI/Fe3O4纳米磁流体
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职称材料
载TK基因PEG-PEI Fe_3O_4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制的研究
被引量：
3
2
作者
薛敦
何剪太
+2 位作者
彭健
赵劲风
张阳德
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期332-334,共3页
目的:研究载TK基因PEG-PEIFe3O4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制特性。方法:以RT-PCR方法鉴定其在各细胞系中mRNA水平上的表达状况。采用MTT法研究载TK基因纳米颗粒体外抑制肿瘤细胞的生长作用。结果:PEG-PEIFe3O4纳米磁流体能有效的转染pAF...
目的:研究载TK基因PEG-PEIFe3O4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制特性。方法:以RT-PCR方法鉴定其在各细胞系中mRNA水平上的表达状况。采用MTT法研究载TK基因纳米颗粒体外抑制肿瘤细胞的生长作用。结果:PEG-PEIFe3O4纳米磁流体能有效的转染pAFP-TK进入AFP阳性的HepG2细胞,并在细胞内得以正常表达。MTT法显示,AFP阳性的细胞在转染pAFP-TK后对GCV的敏感性大大提高,细胞存活率明显下降。结论:PEG-PEIFe3O4纳米磁流体能高效转染pAFP-TK质粒进入细胞,并在AFP阳性肝癌细胞中获得特异性表达,加用GCV后,还可高效杀伤AFP阳性肝癌细胞。
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关键词
PEG—PEI
Fe3O4纳米磁流体
甲胎蛋白启动子
单纯疱疹病毒胸苷激酶
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职称材料
肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用
3
作者
傅强
王慧萍
+4 位作者
韦芳
李慧明
陈霞芳
王煜非
黄倩
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期113-119,共7页
目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强...
目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。
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关键词
肝肿瘤
条件复制型腺病毒载体
HSV-1TK基因
甲
胎
蛋白
基因
启动子
甲
胎
蛋白
基因增强子
病毒-基因治疗
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职称材料
题名
pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体的构建及在PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体介导下转染肝癌细胞
被引量：
4
1
作者
贾萌
彭健
周健
陈伟
赵劲风
潘一峰
张阳德
机构
中南大学湘雅医院卫生部纳米生物技术重点实验室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2008年第3期473-477,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目30672047
中国博士后科学基金资助项目20060390884
湖南省博士后科学基金资助项目2006FJ4240
文摘
目的:构建甲胎蛋白(AFP)启动子介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组真核表达载体,并检测其在AFP阳性肝癌细胞株的特异性表达。方法:PCR扩增AFP基因启动子、HSV-TK基因,将上述片段插入EGFP-N1载体的多克隆位点,构建pEGFP-AFP-TK重组表达载体,通过包裹PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体,经其介导,转染AFP阳性肝癌细胞株HepG2和AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721,利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法检测目的基因在2种细胞系中的表达。结果与结论:肝癌特异性真核表达载体pEGFP-AFP-TK构建成功。利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法可以检测到嵌合AFP启动子的pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体能够特异性在AFP阳性的肝癌细胞株表达,而在AFP阴性的肝癌细胞株中基本不表达。
关键词
甲胎蛋白启动子
单纯疱疹病毒胸苷激酶
自杀基因
PEG—PEI/Fe3O4纳米磁流体
Keywords
AFP-promoter
HSV-TK
suicide gene
PEG-PEI/Fe3O4 magnetic nanopartieles
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
载TK基因PEG-PEI Fe_3O_4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制的研究
被引量：
3
2
作者
薛敦
何剪太
彭健
赵劲风
张阳德
机构
中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期332-334,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30672047)
文摘
目的:研究载TK基因PEG-PEIFe3O4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制特性。方法:以RT-PCR方法鉴定其在各细胞系中mRNA水平上的表达状况。采用MTT法研究载TK基因纳米颗粒体外抑制肿瘤细胞的生长作用。结果:PEG-PEIFe3O4纳米磁流体能有效的转染pAFP-TK进入AFP阳性的HepG2细胞,并在细胞内得以正常表达。MTT法显示,AFP阳性的细胞在转染pAFP-TK后对GCV的敏感性大大提高,细胞存活率明显下降。结论:PEG-PEIFe3O4纳米磁流体能高效转染pAFP-TK质粒进入细胞,并在AFP阳性肝癌细胞中获得特异性表达,加用GCV后,还可高效杀伤AFP阳性肝癌细胞。
关键词
PEG—PEI
Fe3O4纳米磁流体
甲胎蛋白启动子
单纯疱疹病毒胸苷激酶
Keywords
PEG-PEI Fe3O4 nano-magnetic fluid
AFP- promoter
HSV-TK
分类号
R730.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用
3
作者
傅强
王慧萍
韦芳
李慧明
陈霞芳
王煜非
黄倩
机构
上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院中心实验室
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期113-119,共7页
基金
国家重点基础研究计划(973)资助项目(No.2004CB518804)
国家自然科学基金杰出青年项目(No.30325043)~~
文摘
目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。
关键词
肝肿瘤
条件复制型腺病毒载体
HSV-1TK基因
甲
胎
蛋白
基因
启动子
甲
胎
蛋白
基因增强子
病毒-基因治疗
Keywords
liver neoplasms
conditional duplicate adenoviral vector
HSV-1/TK gene
AFP promoter
AFP enhancer
gene-viral therapy
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
R730.54 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体的构建及在PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体介导下转染肝癌细胞
贾萌
彭健
周健
陈伟
赵劲风
潘一峰
张阳德
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2008
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
载TK基因PEG-PEI Fe_3O_4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制的研究
薛敦
何剪太
彭健
赵劲风
张阳德
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用
傅强
王慧萍
韦芳
李慧明
陈霞芳
王煜非
黄倩
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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