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一种S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶活性的检测方法 被引量:3
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作者 谷劲松 谭晓军 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期521-525,共5页
通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依... 通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依赖的甲基转移酶活性的检测方法.甲基转移酶的共同产物S-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)首先被SAHN酶水解生成腺嘌呤和S-核苷高半胱氨酸,后者进一步被SRHH酶裂解生成高半胱氨酸,最后高半胱氨酸与Ellman’s试剂反应生成5-硫代-2-硝基苯甲酸(TNB).实验结果表明,重组表达获取的2种酶蛋白均具有良好的催化活性,酶偶联反应生成的TNB与初始AdoHcy浓度呈现显著的线性正相关.该检测方法克服了S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶的共同产物AdoHcy的反馈抑制,使甲基化反应进行完全,从而保证了对甲基转移酶活性准确有效的定量分析. 展开更多
关键词 S-腺苷-L-高半胱氨酸 S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶 S-核糖基高半胱氨酸酶 S-腺苷甲硫氨酸依赖甲基转移酶 酶偶联分析
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肿瘤甲硫氨酸依赖性分子机制的研究进展
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作者 李强 曹伟新 《肠外与肠内营养》 CAS 2006年第1期55-57,共3页
甲硫氨酸(M et)依赖性是肿瘤代谢缺陷的重要特征之一。近年来,从分子水平对肿瘤细胞的M et依赖性进行一系列研究,发现了M et代谢的关键酶功能异常(如M et合成酶单核苷酸多态性,甲基硫腺苷磷酸酶基因缺失,胸苷合成酶蛋白表达下降,甲叉四... 甲硫氨酸(M et)依赖性是肿瘤代谢缺陷的重要特征之一。近年来,从分子水平对肿瘤细胞的M et依赖性进行一系列研究,发现了M et代谢的关键酶功能异常(如M et合成酶单核苷酸多态性,甲基硫腺苷磷酸酶基因缺失,胸苷合成酶蛋白表达下降,甲叉四氢叶酸还原酶基因表达上调)。细胞内信号转导障碍是M et限制导致肿瘤细胞凋亡的另一分子机制。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 甲硫氨酸依赖 分子事件
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肿瘤细胞对甲硫氨酸依赖性的研究进展
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作者 徐宁 《肠外与肠内营养》 CAS 1999年第2期112-116,共5页
甲硫氨酸(methionine,Met)又称蛋氨酸,是体内必需氨基酸之一,也是体内物质代谢主要的甲基供体,参与多种活性物质的甲基化反应,如DNA、tRNA、mRNA、多胺、肌酸、肾上腺素、乙酰胆碱等。因此,Met具有... 甲硫氨酸(methionine,Met)又称蛋氨酸,是体内必需氨基酸之一,也是体内物质代谢主要的甲基供体,参与多种活性物质的甲基化反应,如DNA、tRNA、mRNA、多胺、肌酸、肾上腺素、乙酰胆碱等。因此,Met具有重要的生理意义。⒇多年研究发现,正... 展开更多
关键词 肿瘤细胞 甲硫氨酸依赖 氨基酸代谢
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去甲硫氨酸环境加化疗药物对人胃癌原代细胞生长的阻抑 被引量:4
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作者 欧敬民 曹伟新 +2 位作者 朱正纲 尹浩然 纪玉宝 《肠外与肠内营养》 CAS 2001年第2期80-83,共4页
目的 :探索人胃癌原代细胞在体外去除甲硫氨酸 (Met)但含同型半胱氨酸 (Hcy)的培养基 (Met-Hcy+)中能否正常生长和去Met状态是否增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :将 40例新鲜人胃癌组织制成单细胞悬液 ,分别置于Met-Hcy+和Me... 目的 :探索人胃癌原代细胞在体外去除甲硫氨酸 (Met)但含同型半胱氨酸 (Hcy)的培养基 (Met-Hcy+)中能否正常生长和去Met状态是否增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :将 40例新鲜人胃癌组织制成单细胞悬液 ,分别置于Met-Hcy+和Met+Hcy-(含Met不含Hcy)的培养基中培养 48h ,利用MTT等方法检测各组细胞增殖情况以及在不同培养基中分别加入ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX化疗药物后对各组细胞增殖的抑制程度。 结果 :①人胃癌原代细胞在Met-Hcy+培养基中表现为细胞总数减少 ;②Met-Hcy+培养基分别与ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX联合时 ,可显著提高各化疗药物对胃癌原代细胞的杀伤作用。 结论 :①人胃癌原代细胞在体外培养中表现出对Met的依赖性 ;②Met-Hcy+培养环境联合应用各化疗药物 ,可提高对人胃癌原代细胞的杀伤作用 ;③MTT法是检测“Met饥饿法”联合个体化化疗药物敏感性的有效手段。 展开更多
关键词 甲硫氨酸依赖 胃癌原代细胞 细胞培养
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植物中SAM Mtases基因研究进展 被引量:4
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作者 穆红梅 夏冰 +4 位作者 高俊平 张秀省 汪仁 彭峰 何树兰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期1062-1066,共5页
SAM Mtases是从多种植物中分离到的一类S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因,该基因对植物体内木质素、类苯基丙烷、类黄酮类、生物碱和脂肪族化合物等许多次生代谢产物合成有直接的影响,并且在植物抗病、抗紫外线、杀虫、抗菌... SAM Mtases是从多种植物中分离到的一类S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因,该基因对植物体内木质素、类苯基丙烷、类黄酮类、生物碱和脂肪族化合物等许多次生代谢产物合成有直接的影响,并且在植物抗病、抗紫外线、杀虫、抗菌、植物激素生长和信号调节、植物共生、花粉管伸长和花粉生长等生理过程中起重要作用.该文总结了国内外已经克隆到的SAM Mtases同源基因的分离、分类及其功能,为进一步研究SAM Mtases基因在植物生理代谢调控中的地位及在植物抗性及药用成分育种上的应用提供参考. 展开更多
关键词 S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因(SAM Mtases) 次生代谢 表达 功能 应用
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