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甲基营养型酵母系统表达的重组人表皮生长因子的纯化及其性质 被引量:15
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作者 黄秉仁 蔡良婉 +11 位作者 王欣 马雪梅 马晓骊 李旌军 李红卓 韦忠明 梁青 郑华军 唐琪浩 唐申秀 廖洪涛 向绪传 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期106-110,共5页
目的 获得可用于动物试验和临床试验的人表皮生长因子原料药。方法 化学合成的人表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中表达并分泌到培养基中的人表皮生长因子蛋白经 Phenysepharose 6 Fast Flow( high sub)柱、 Q-sepharose High Perfo... 目的 获得可用于动物试验和临床试验的人表皮生长因子原料药。方法 化学合成的人表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中表达并分泌到培养基中的人表皮生长因子蛋白经 Phenysepharose 6 Fast Flow( high sub)柱、 Q-sepharose High Performance柱、 Superdex 30柱纯化后进行生物学性质检测。结果 纯化后的蛋白产物纯度达 98%,是无热源、无内毒素、无甲基营养型酵母染色体 DNA污染的,有正确的分子量、等电点、氨基末端氨基酸顺序、肽图、紫外光谱、及生物活性性质的重组蛋白。结论 纯化蛋白符合动物试验和临床试验的要求,为制备多种人表皮生长因子制剂进行动物实验和临床试验打下了基础。 展开更多
关键词 重组人表皮生长因子 纯化 化学性质研究 生物活性 甲基营养型酵母系统
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人工合成表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中的高效表达 被引量:12
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作者 黄秉仁 蔡良琬 +2 位作者 廖洪涛 唐申秀 周海涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期512-517,共6页
选用酵母菌偏爱密码子人工合成了编码51个氨基酸的人表皮生长因子(hEGF)基因.将合成基因与编码酵母α因子前导肽85个氨基酸的DNA片段融合后克隆到醇氧化酶基因启动子下游,并构建出多拷贝表达载体.此载体转化甲基营养型... 选用酵母菌偏爱密码子人工合成了编码51个氨基酸的人表皮生长因子(hEGF)基因.将合成基因与编码酵母α因子前导肽85个氨基酸的DNA片段融合后克隆到醇氧化酶基因启动子下游,并构建出多拷贝表达载体.此载体转化甲基营养型酵母株GS115后筛选出整合型MutSHis+基因型菌株.高密度培养及诱导表达后该株可分泌具完好生物活性和正确物理化学性质的人表皮生长因子,产量达100mg/L,经3次柱层析纯度达95%以上。 展开更多
关键词 人表皮生长因子 甲基营养型酵母 高效表达
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一株嗜甲醇的甲基营养型酵母的筛选与鉴定
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作者 缑仲轩 叶立生 +3 位作者 朱芮 王露璇 陆华建 薛冰斌 《化学与生物工程》 CAS 2018年第12期30-33,共4页
从东经119°2′16″、北纬33°32′47″的湖泊岸边土壤中筛选到一株理想的甲基营养型酵母。该菌呈长圆形,直径3μm,长可以达到5μm,经18SrDNA分析鉴定其为赭色掷孢酵母(Sporobolomyces carnicolor);该菌除可利用甲烷外,亦可利... 从东经119°2′16″、北纬33°32′47″的湖泊岸边土壤中筛选到一株理想的甲基营养型酵母。该菌呈长圆形,直径3μm,长可以达到5μm,经18SrDNA分析鉴定其为赭色掷孢酵母(Sporobolomyces carnicolor);该菌除可利用甲烷外,亦可利用甲醇、乙醇、葡萄糖、甘油、淀粉等,甲醇是其最佳碳源,最佳浓度为2.0%;采用甲醇-甲烷两段法培养,该菌的OD600值可达到2.1。 展开更多
关键词 甲醇 甲烷 单细胞蛋白 甲基营养型酵母 赭色掷孢酵母
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毕赤酵母作为基础研究的新兴模式生物研究进展 被引量:2
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作者 艾聪聪 龚国利 +4 位作者 焦小雨 田露 盖中朝 缑敬轩 李慧 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第3期17-26,共10页
毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业,近年来,其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前,酿酒酵母是最常用酵母模型,毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化,相比酿酒酵母,毕赤酵母进化速度较慢,更多保留了古代酵母祖... 毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业,近年来,其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前,酿酒酵母是最常用酵母模型,毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化,相比酿酒酵母,毕赤酵母进化速度较慢,更多保留了古代酵母祖先的特征,还具有利用甲醇作为唯一碳源生长的能力,这些特征使其成为研究真核生物分子细胞生物学的有价值模式生物。本文总结了毕赤酵母基础生物学方面的研究成果,包括甲醇同化、过氧化物酶体生成、交配与产孢行为,以及蛋白质分泌、脂质合成和细胞壁形成等过程,旨在全面且系统地综述毕赤酵母作为模式生物的研究进展。 展开更多
关键词 毕赤酵母 甲基营养型酵母 真核生物 重组表达 模式生物
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巴斯德毕赤酵母底盘细胞的工程化改造及应用 被引量:6
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作者 刘启 钱芷兰 +4 位作者 宋丽丽 要超颖 徐名强 任燕娜 蔡孟浩 《合成生物学》 CSCD 2022年第6期1150-1173,共24页
优质的微生物底盘宿主是实现绿色、可持续生物制造的重要平台。巴斯德毕赤酵母底盘宿主因其在蛋白表达和发酵生产中的诸多优势受到了广泛的关注和应用。而作为一种工业甲基营养酵母,其可以有效地利用来源广泛的甲醇作为唯一碳源,使其成... 优质的微生物底盘宿主是实现绿色、可持续生物制造的重要平台。巴斯德毕赤酵母底盘宿主因其在蛋白表达和发酵生产中的诸多优势受到了广泛的关注和应用。而作为一种工业甲基营养酵母,其可以有效地利用来源广泛的甲醇作为唯一碳源,使其成为碳一化合物潜在的生物转化平台。近年来,随着合成生物技术和生物制药技术的快速发展,围绕毕赤酵母底盘的工程化改造研究逐渐增多,并取得了卓有成效的进展,促进了毕赤酵母底盘的发展和升级。本文简述了毕赤酵母底盘细胞的发展和应用现状,从基因操纵技术、基因表达调控、代谢工程改造等方面介绍了毕赤酵母的工程化改造策略及应用效果,总结了毕赤酵母中合成生物技术、调控元器件、新型表达平台和生物转化体系的建立与开发情况。在此基础上,进一步强调了毕赤酵母中CRISPR介导的基因编辑及调控、转录系统的重构及人工设计,介绍了其在蛋白表达和化合物合成方面的应用,并分析了其在实际应用中的优势和问题。最后,对毕赤酵母在后续研究中的底盘升级方向和应用场景进行了展望。 展开更多
关键词 毕赤酵母 底盘细胞 甲基营养型酵母 细胞工厂 合成生物系统
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