氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增效率、灵敏度和特异性的影响

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作者 蒋城 杨中柱 +1 位作者 赵美莲 宋瑱 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期724-729,共6页

以人类基因组DNA和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板,扩增115 bp的Alu基因片段和402 bp的ipaH基因片段.通过设置氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)和模板的浓度为变量,分别研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩... 以人类基因组DNA和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板,扩增115 bp的Alu基因片段和402 bp的ipaH基因片段.通过设置氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)和模板的浓度为变量,分别研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增效率和灵敏度的影响;运用多轮PCR扩增方法研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增特异性的影响.结果显示,氧化石墨烯有效提高PCR扩增效率的范围为9—14倍,提高PCR灵敏度一个数量级以及增加多轮PCR扩增中的两轮扩增反应.从原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)的结果可以看出,本文制备的氧化石墨烯片层厚度主要集中在0.5—0.8 nm,少数大于1 nm,总体具有较大的比表面积.除此之外,本文还发现当氧化石墨烯浓度到达μg·μL^(-1)后,引物二聚体与氧化石墨烯的浓度呈正比,说明氧化石墨烯优化PCR的主要影响因素是其与引物的相互作用. 展开更多

关键词 氧化石墨烯 聚合酶链式反应 扩增效率 灵敏度 特异性

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蜡样芽孢杆菌特异性基因筛选及聚合酶链式反应检测方法的建立 被引量：4

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作者 赵岩岩 王书彦 +7 位作者 赵琳琳 赵璐 周威 崔震昆 张浩 王淼焱 王书贤 赵圣明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期271-277,共7页

该研究以蜡样芽孢杆菌ATCC 14579的基因组为模板,利用比较基因组学方法筛选并通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证获得3个蜡样芽孢杆菌的特异性基因,用于食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测,并对引物的特异性、灵敏度、... 该研究以蜡样芽孢杆菌ATCC 14579的基因组为模板,利用比较基因组学方法筛选并通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证获得3个蜡样芽孢杆菌的特异性基因,用于食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测,并对引物的特异性、灵敏度、抗干扰能力和人工污染检测限等进行评价。结果表明,筛选获得的3个基因片段特异性较好。其中以gene2626设计的引物gFA2特异性最好,检测灵敏度可达359. 5 fg/μL。抗干扰评价结果表明在牛肉背景菌群浓度5. 28×10^7CFU/m L和猪肉背景菌群浓度7. 75×10^6CFU/m L的干扰下,蜡样芽孢杆菌的最低检出限为3. 74×10^3CFU/m L。人工污染试验结果表明,蜡样芽孢杆菌经增菌培养10 h后,人工污染的牛肉和猪肉样品中蜡样芽孢杆菌的检出限分别为4. 62和8. 38 CFU/g。因此该研究筛选的特异性基因及建立的PCR检测方法在食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测方面具有一定的应用潜力。 展开更多

关键词 蜡样芽孢杆菌 特异性基因 筛选 聚合酶链式反应

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金纳米粒子对聚合酶链式反应体系中长链DNA特异性扩增的效应

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作者 刘美荣 朱树华 周杰 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第3期391-395,共5页

以乙烯受体基因ETR1（2500bp）和山梨醇脱氢酶基因（SDH）（1100bp）为材料，研究了不同浓度金纳米粒子对聚合酶链式反应（PCR）体系中大于1000bp的长链DNA特异性扩增的效应。结果表明，金纳米粒子显著增强了ETR1和SDH在PCR时的特异性... 以乙烯受体基因ETR1（2500bp）和山梨醇脱氢酶基因（SDH）（1100bp）为材料，研究了不同浓度金纳米粒子对聚合酶链式反应（PCR）体系中大于1000bp的长链DNA特异性扩增的效应。结果表明，金纳米粒子显著增强了ETR1和SDH在PCR时的特异性扩增，有效降低了非特异性扩增。在ETR1和SDH的PCR中，金纳米粒子适宜浓度为0．4nmol·L^-1。在50℃-62℃的退火温度范围内，金纳米粒子均能够显著增强ETR1和SDH的特异性扩增。因此，金纳米粒子不仅提高了1000bp以上的长链DNA在PCR扩增的特异性，而且拓宽了PCR的退火温度范围。 展开更多

关键词 金纳米粒子 聚合酶链式反应 特异性扩增 非特异性扩增 长链DNA

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棉花甲基化酶基因COMT和CCoAOMT的组织特异性表达分析 被引量：11

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作者 吕萌 倪志勇 +3 位作者 王娟 李波 罗淑萍 范玲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期713-719,共7页

本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(... 本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(根、茎、叶、子叶、花瓣、雄蕊、胚珠)中都有表达,其中COMT1和CCoAOMT1在各组织中的表达趋势类似,COMT2,COMT3和CCoAOMT2表达趋势各异。在5～25d的棉纤维发育过程中,COMT1和COMT3表达稳定,COMT2表达量逐渐增加。而CCoAOMT基因家族的2个基因的表达量变化相对明显,CCoAOMT1在25d出现表达高峰,CCoAOMT2则在10d和15d呈现高表达量。本研究表明甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在棉花的根,茎等维管组织中具有相对一致的高表达量,而在其他组织和发育纤维中则呈现出明显的组织特异性和纤维发育时期特异性。 展开更多

关键词 陆地棉 咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT) 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 组织特异性表达

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新西兰柔鱼与北太平洋柔鱼的品种特异性聚合酶链式反应鉴定

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作者 衣洁菡 赵爱华 +3 位作者 王金荣 郭德慧 李燕青 仲米存 《肉类研究》 北大核心 2020年第6期80-84,共5页

利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增新西兰柔鱼和北太平洋柔鱼的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因,通过多重序列比对检测2种鱿鱼之间的多态性位点。根据2种鱿鱼的特异性... 利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增新西兰柔鱼和北太平洋柔鱼的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因,通过多重序列比对检测2种鱿鱼之间的多态性位点。根据2种鱿鱼的特异性位点分别设计2种鱿鱼的品种特异性引物,并利用多重PCR实现2种鱿鱼品种的特异性鉴定和区分。结果表明:建立的品种特异性PCR鉴别体系对新西兰柔鱼和北太平洋柔鱼分别扩增出214 bp和339 bp的品种特异性条带,该方法的检测限低至0.1 ng,且能检测出新西兰柔鱼中1%的北太平洋柔鱼掺入,并能有效检测市场上2种鱿鱼及其复配鱼糜制品的原料来源。 展开更多

关键词 鱿鱼 新西兰柔鱼 北太平洋柔鱼 多态性位点 品种特异性聚合酶链式反应

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聚合酶链式反应检测猪细小病毒方法的研究 被引量：7

6

作者 戎伟 杨润德 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期465-467,共3页

本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩... 本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性。经敏感性试验测定,PCR的最低检出量为0 008病毒血凝(HA)单位。这些结果表明本试验建立的PCR对PPV的检测人有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 特异性 PCR 病毒核酸 血凝 HA 感染 猪细小病毒 PPV 扩增片段

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甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义 被引量：1

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作者 杨丽萍 刘旺根 +1 位作者 王雪萍 张舒林 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期441-443,共3页

目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specificPCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病。... 目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specificPCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病。标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察。结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在。24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术。 展开更多

关键词 肺癌 P16基因 甲基化特异性 聚合酶链反应

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卵巢癌HOXA10基因启动子区低甲基化改变与其临床病理特征的关系 被引量：1

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作者 姜旖 徐蕾 +2 位作者 葛瑜 汤伟伟 程文俊 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期354-357,共4页

目的:探讨HOXA10基因启动子区甲基化与卵巢上皮性癌(卵巢癌)的关系。方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测29例卵巢癌标本及对照组16例正常卵巢组织中HOXA10基因启动子甲基化状态,并分析HOXA10基因甲基化状态与不同临床病理特... 目的:探讨HOXA10基因启动子区甲基化与卵巢上皮性癌(卵巢癌)的关系。方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测29例卵巢癌标本及对照组16例正常卵巢组织中HOXA10基因启动子甲基化状态,并分析HOXA10基因甲基化状态与不同临床病理特征的联系。结果:检测到17例(58.62%)卵巢癌组织HOXA10基因启动子区发生低甲基化改变,另外4例甚至为完全去甲基化改变;而仅有4例(25.00%)正常卵巢组织HOXA10基因启动子区发生低甲基化(P<0.05)。HOXA10低甲基化阳性率随淋巴转移而增高(P<0.05)。不同年龄、瘤体大小、WHO病理分级、FIGO临床分期和HOXA10基因低甲基化未见明显相关性(P>0.05)。结论:HOXA10基因启动子区低甲基化为频发事件,提示与卵巢癌患者的不良预后相关,可作为卵巢癌判断预后的生物学标志物。 展开更多

关键词 卵巢上皮性癌 同源盒基因 低甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应

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27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)及其修饰酶在小鼠不同组织中分布 被引量：1

9

作者 王钰莹 王新力 +10 位作者 张冉 张之岩 汪钰 杨博 王冠杰 张鑫 马福浩 许宏业 武晓慧 张丰 李青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1491-1497,共7页

目的研究出生后7日龄和2月龄小鼠各组织器官中27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)的水平及其修饰酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3)和赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)的表达。方法免疫组织... 目的研究出生后7日龄和2月龄小鼠各组织器官中27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)的水平及其修饰酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3)和赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)的表达。方法免疫组织化学染色法检测7日龄和2月龄小鼠脑、涎腺、背部脂肪、胸腺、肺、心脏、胃、肠、肝、睾丸、皮肤组织中H3K27me3、EZH2、JMJD3和UTX表达,实时定量PCR验证,统计分析H3K27me3水平与EZH2、JMJD3和UTX表达之间的关系。结果 H3K27me3在7日龄和2月龄小鼠被检测组织中均持续存在;EZH2在7日龄和2月龄小鼠脑、心肌、肝及皮肤中表达,但仅在2月龄小鼠涎腺、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胸腺中持续表达;JMJD3在7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胃中表达,但在2月龄小鼠的肺、脂肪组织、胃中不再表达;UTX在7日龄小鼠的脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺及脂肪组织中表达,但仅在2月龄小鼠睾丸中表达;大部分免疫组织化学染色阳性的H3K27甲基调节酶相应的mRNA呈中等或较高水平表达。结论 H3K27me3在小鼠不同时期各组织中均持续存在;EZH2多存在于2月龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、肝、胸腺;JMJD3、UTX多存在于7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺、脂肪组织;H3K27me3分布与EZH2的表达之间无明显一致关系,与JMJD3或UTX不存在明显反向分布关系,EZH2与JMJD3或UTX的表达分布也不存在反向关系。提示EZH2、JMJD3和UTX在小鼠出生后多种组织中可能起重要作用;在体内H3K27me3水平及其修饰酶可能受多因素控制,以完成复杂的生理功能。 展开更多

关键词 27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3) 修饰酶 Zeste基因增强子同源物2(EZH2) 赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3) 赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)

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基于甲基化核酸内切酶的甲基转移酶活性的电化学检测研究 被引量：1

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作者 白雪娇 鲁理平 康天放 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1079-1085,共7页

由DNA甲基转移酶(DNMT1)催化的DNA甲基化在许多生物过程中起重要作用,包括基因转录,基因组印记和细胞分化[1]。本文利用特异性酶切法成功开发了一种有效的测定DNMT1的电化学方法。首先,将硫醇修饰的双链DNA(dsDNA)自组装固定在金电极上... 由DNA甲基转移酶(DNMT1)催化的DNA甲基化在许多生物过程中起重要作用,包括基因转录,基因组印记和细胞分化[1]。本文利用特异性酶切法成功开发了一种有效的测定DNMT1的电化学方法。首先,将硫醇修饰的双链DNA(dsDNA)自组装固定在金电极上,随后DNMT1识别dsDNA半甲基化序列并实现完全甲基化,最后通过甲基化特异性限制酶(BSSHⅡ)剪切,未发生完全甲基化的碱基序列将被剪切并移除电极表面。利用差分脉冲伏安法(DPV)分别测定剪切前后的亚甲基蓝(MB)还原电流。在最佳优化条件下,该方法线性范围为0.5 nM^50 nM,检测限为0.5 nM。这种方法可以简单有效地检测DNA甲基化和DNMT1活性,在DNA甲基化快速检测和基因毒理分析方面具有一定的实际意义。 展开更多

关键词 DNA甲基化 甲基转移酶活性 特异性酶切法 亚甲基蓝

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胰腺癌中人RUNT相关转录因子3基因启动子区甲基化及其临床意义 被引量：2

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作者 林志川 陈谭根 李建国 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1034-1037,共4页

目的检测胰腺癌人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子的甲基化情况并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例胰腺癌组织及癌旁组织、14例正常胰腺组织、3株人胰腺癌细胞株(PANC1、CFPAC-1、SW1990)、1株正... 目的检测胰腺癌人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子的甲基化情况并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例胰腺癌组织及癌旁组织、14例正常胰腺组织、3株人胰腺癌细胞株(PANC1、CFPAC-1、SW1990)、1株正常肝细胞株(HL-7702)中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。检测用甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)处理前后胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA的表达。分析RUNX3异常甲基化与胰腺癌临床特征的关系。结果56例胰腺癌组织中,51.79%(29/56)存在RUNX3基因启动子区CpG岛的异常甲基化,癌旁胰腺组织有10.7%(6/56)存在异常甲基化,而正常胰腺组织中未检测到RUNX3基因异常甲基化。RUNX3基因异常甲基化与患者病理分化程度(r=0.314,P=0.018)、淋巴结转移(r=0.370,P=0.005)显著相关。在5-Aza-cdR处理前,胰腺癌细胞株PANC1、CFPAC-1、SW1990的RUNX3 mRNA无表达或低表达,经5-Aza-cdR处理后各胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA恢复表达。结论胰腺癌组织及胰腺癌细胞株均存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化;RUNX3启动子的高甲基化与其基因表达降低有关,与胰腺癌组织分化程度、淋巴结转移相关。 展开更多

关键词 胰腺癌 RUNX3基因 甲基化 甲基化特异性聚合酶链式反应

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转基因玉米59122品系的特异性检测 被引量：8

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作者 许文涛 杨蓉 +4 位作者 陆姣 张南 罗云波 何景 黄昆仑 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期139-142,共4页

使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终... 使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。 展开更多

关键词 转基因作物 品系特异性检测 半巢式聚合酶链式反应 反向聚合酶链式反应 二重聚合酶链式反应

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巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究 被引量：13

13

作者 周华蓉 沈建箴 +3 位作者 付海英 叶宝国 范丽萍 林福安 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期375-378,共4页

本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种... 本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰,再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增,分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态。结果表明:CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化,而Molt4、K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化。结论:用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态,方法简单,灵敏且重复性强,可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断。 展开更多

关键词 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 P16基因 基因甲基化

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类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞IL-10基因启动子甲基化状态研究 被引量：12

14

作者 付丽红 丛斌 +6 位作者 甄艳凤 李淑瑾 马春玲 倪志宇 张国忠 左敏 姚玉霞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1357-1361,共5页

白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是在类风湿性关节炎中发挥重要免疫调节作用的细胞因子,其基因失活与已分化的Th1和Th2细胞染色质结构重塑有关。为了探讨IL-10基因启动子甲基化及基因失活在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA... 白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是在类风湿性关节炎中发挥重要免疫调节作用的细胞因子,其基因失活与已分化的Th1和Th2细胞染色质结构重塑有关。为了探讨IL-10基因启动子甲基化及基因失活在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)发病和进展中的作用,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),分别检测34例类风湿性关节炎患者和30例健康人外周血单个核细胞IL-10mRNA、蛋白表达水平及基因启动子甲基化状态。结果显示,病例组IL-10mRNA及蛋白表达均低于健康对照组,无统计学差异(P>0.05)。病例组甲基化率(85.29%)高于健康对照组(43.33%),具有统计学差异(χ2=12.439,P=0.000)。IL-10基因启动子甲基化状态与其mRNA表达呈显著负相关(r=?0.579,P=0.001),与所累关节数显著相关,但与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、年龄均无相关性(P>0.05)。IL-10mRNA表达与年龄、所累关节数、ESR、CRP及RF均无相关性(P>0.05)。上述结果提示,启动子甲基化可能是IL-10基因失活的重要机制,IL-10基因异常高甲基化状态可能参与了RA的发生发展。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 白细胞介素-10 甲基化特异性聚合酶链反应

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LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系 被引量：5

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作者 徐周敏 于力 +6 位作者 楼方定 卢学春 窦立平 杨龙 陈焱 吕鸣 崔杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期188-191,共4页

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化... 为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动 子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态, 并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态.并诱导该基 因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区 高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一 定的价值。 展开更多

关键词 LRP15基因 启动子 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应

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NSCLC患者血清中p16、DAP基因甲基化的研究 被引量：4

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作者 伍俊 梁标 +2 位作者 何建猷 张海涛 王志刚 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第3期188-190,共3页

目的　探讨p16、死亡相关蛋白激酶 (death associatedproteinkinase ,DAP)基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌 (NSCLC)患者诊断的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测 3 0例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DA... 目的　探讨p16、死亡相关蛋白激酶 (death associatedproteinkinase ,DAP)基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌 (NSCLC)患者诊断的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测 3 0例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DAP基因的异常甲基化。结果　NCSLC肿瘤组织中 60 .0 % (18/3 0 )检测出至少一个基因启动子呈甲基化改变 ,在 18例肿瘤组织检测到异常甲基化的患者中 ,5 0 .0 %的患者 (9/18)在血清中检测到相应的改变 ,所有的癌旁组织、健康对照组的血清中及正常肺组织均未检测到p16、DAP的甲基化。结论　检测NCSLC患者血清中p16。 展开更多

关键词 P16基因 DAP基因 甲基化 NSCLC 非小细胞肺癌 甲基化特异性聚合酶链反应 诊断 肿瘤标志物

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非小细胞肺癌患者血浆TIMP-3、p16基因甲基化的检测及其临床意义 被引量：4

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作者 李超 宋超 +3 位作者 胡海亮 于在诚 金永堂 薛绍礼 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第9期1088-1091,共4页

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)、p16基因甲基化状态,研究血浆中两种基因的检测及联合检测在NSCLC筛查和鉴别诊断中的意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测110例NSCL... 目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)、p16基因甲基化状态,研究血浆中两种基因的检测及联合检测在NSCLC筛查和鉴别诊断中的意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测110例NSCLC患者癌组织、癌旁组织和外周血血浆TIMP-3、p16基因的甲基化状态,并对110例正常对照组血浆样品进行同样检测,比较各组检测结果。结果患者癌组织中TIMP-3、p16、联合检测的基因甲基化率分别高于癌旁组织(P<0.01);外周血血浆中TIMP-3、p16、联合检测基因甲基化率分别高于正常对照组血浆(P<0.01);血浆中TIMP-3、p16和联合检测的基因甲基化检出率与NSCLC临床分期、临床分类以及病理类型的对比差异均无统计学意义。结论对患者外周血浆TIMP-3、p16基因甲基化的联合检测可提高肺癌的检出率,为肺癌的筛查和鉴别诊断提供有价值的参考信息。 展开更多

关键词 TIMP-3 P16 非小细胞肺癌 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应

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肠炎沙门氏菌种特异性FQ-PCR快速检测方法的建立 被引量：4

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作者 邓树轩 程安春 +5 位作者 汪铭书 曹平 尹念春 曹省艳 张振华 颜彬 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期537-542,共6页

根据肠炎沙门氏菌（SE）种特异性DNA序列，设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针，首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）诊断方法。该法在SEDNA含量为9×10^8-9X104拷贝有较好的线性关系；检... 根据肠炎沙门氏菌（SE）种特异性DNA序列，设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针，首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）诊断方法。该法在SEDNA含量为9×10^8-9X104拷贝有较好的线性关系；检测SEDNA模板的灵敏度为4拷贝／μL，检测SE细菌数的灵敏度为6CFU／mL；特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应。分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便，结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100％，而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著（P〈0．01）高于细菌分离。研究结果表明，该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测，可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查。 展开更多

关键词 肠炎沙门氏菌(SE) 荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR) 种特异性

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子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA表达和E-cad甲基化检测 被引量：6

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作者 赵先兰 张会利 饶燕玲 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第3期558-561,共4页

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cadherin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系。方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例)和40... 目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cadherin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系。方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析宫颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性。结果:DNMT1 mRNA在正常宫颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05)。结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。 展开更多

关键词 宫颈鳞状细胞癌 DNA甲基化转移酶1 上皮钙粘附素 甲基化 甲基化特异性PCR

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血浆p16基因甲基化在原发性肝细胞癌诊断中的作用 被引量：3

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作者 罗速 张逢春 +3 位作者 刘成柏 王潇 庄江兴 张今 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期298-301,共4页

用甲基化特异性-多聚酶链反应(MSP)方法,检测原发性肝细胞癌(HCC)、肝硬化、慢性肝炎病人及健康人各30例的血浆DNA甲基化的p16基因.结果显示,HCC病人血浆p16基因甲基化率为67%,慢性肝炎、肝硬化及健康者未发生甲基化.

关键词 血浆 P16基因 原发性肝细胞癌 诊断 甲基化特异性-多聚酶链反应

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