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转基因锦橙中甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因的遗传和表达稳定性研究 被引量：1
1
作者 彭爱红 雷天刚 +4 位作者 许兰珍 刘小丰 何永睿 姚利晓 陈善春 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期31-35,共5页
为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2... 为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2个转基因锦橙株系在无性繁殖过程中,甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因都能稳定遗传;甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系JTH1及其无性繁殖后代之间能够稳定的表达,而在转基因锦橙株系JTH2及其无性繁殖后代之间不能稳定的表达,T0代中目的基因的相对表达量显著高于T2代. 展开更多
关键词 转基因锦橙 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 遗传稳定性 表达稳定性
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甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建与遗传转化柑橘的研究(英文) 被引量：4
2
作者 胡蓉 魏泓 +1 位作者 陈善春 何永睿 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期425-431,共7页
基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体 pCDNAⅡA16为模板 ,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增 ,得到全长 2 .2kb衣壳蛋白融合基因序... 基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体 pCDNAⅡA16为模板 ,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增 ,得到全长 2 .2kb衣壳蛋白融合基因序列。经测序鉴定后正向克隆于植物表达载体 pBI12 1中 ,衣壳蛋白融合基因位于pBI12 1质粒T DNA左右边界区间内 ,处于CaMV35S启动子控制之下。经限制性内切酶分析和PCR鉴定后利用冻融法将重组质粒 pBI12 1 A导入根癌农杆菌LBA4 4 0 4。以锦橙 (Citrus.SinensisOsbeck)上胚轴为转化材料 ,通过根癌农杆菌介导法将衣壳蛋白融合基因转化到植物基因组中。 12 0株转化外植体经卡那霉素 5 0mg/L筛选 ,其中 13株生长状况良好未出现白化现象的拟转化芽微嫁接到实生砧木继续培养。PCR分析证明 ,13株拟转化植株中有 5株植物基因组中已导入甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 ,转化率为 4 1%。此研究是对遗传转化柑桔表达外源蛋白的初步探讨 。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 柑橘 植物表达载体 遗传转化 食用疫苗
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兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因克隆与序列分析 被引量：20
3
作者 刘怀然 陈洪岩 +4 位作者 关云涛 王云峰 李昌文 夏长友 张立成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期321-324,共4页
自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒 ,提取病毒总RNA ,以RT_PCR方法扩增得到RHDVVP6 0基因全长片段 ,克隆到T载体中 ,经酶切分析及PCR鉴定后进行序列测定。同一毒株不同克隆产物进行 3次测序 ,测序结果已输送到GeenBank中 (注册号为A... 自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒 ,提取病毒总RNA ,以RT_PCR方法扩增得到RHDVVP6 0基因全长片段 ,克隆到T载体中 ,经酶切分析及PCR鉴定后进行序列测定。同一毒株不同克隆产物进行 3次测序 ,测序结果已输送到GeenBank中 (注册号为AF45 376 1)。将测得序列与GeneBank中记录的RHDV不同分离株进行比较。比较结果表明 :各毒株间核苷酸的同源性为 91%～ 98% ,氨基酸同源性为 94%～ 99% ,氨基酸变异多发生在高变区 ,进一步证明了毒株的高度保守性 ,为明确我国RHDV地方株VP6 0蛋白的分子特征。 展开更多
关键词 兔 出血症 病毒 衣壳蛋白 VP60 基因克隆 序列分析
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鸭病毒性肠炎病毒基因文库的构建及其核衣壳蛋白基因的发现、克隆与鉴定 被引量：22
4
作者 程安春 汪铭书 +6 位作者 文明 周伟光 郭宇飞 贾仁勇 徐超 袁桂萍 刘一尘 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期948-953,共6页
提取鸭病毒性肠炎病毒（DEV）基因组DNA,超声波处理使其片段化,经补平末端后,分级分离并收集各部分DNA片段,与质粒pBluescript Ⅱ SK（＋）连接,转化大肠杆菌DH5α,成功构建了DEV基因文库.随机选取文库中的重组质粒测序分析,DNA序列拼... 提取鸭病毒性肠炎病毒（DEV）基因组DNA,超声波处理使其片段化,经补平末端后,分级分离并收集各部分DNA片段,与质粒pBluescript Ⅱ SK（＋）连接,转化大肠杆菌DH5α,成功构建了DEV基因文库.随机选取文库中的重组质粒测序分析,DNA序列拼接后获得大于100bp以上ORF共187个,将其中一个含完整ORF的DNA片段,以BLASTX软件与Genbank上相应基因进行比对分析,初步确定为一种核衣壳蛋白基因.根据该基因片段序列,设计引物对DEV DNA进行PCR扩增,并克隆到pGEM-T载体上,转化宿主菌JM109,提取阳性重组质粒,经PCR检测、酶切鉴定、测序和生物信息学分析,确定该基因片段为DEV核衣壳蛋白基因. 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒 基因文库 核衣壳蛋白基因
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猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达 被引量：6
5
作者 唐丽杰 李一经 +2 位作者 贾永清 王君伟 刘宝全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期611-614,共4页
以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 ... 以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明 。 展开更多
关键词 猪 传染性胃肠炎病毒 核衣壳 克隆 蛋白基因 基因表达
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一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 被引量：10
6
作者 田浪 王红宁 +4 位作者 李建文 廖娟 张夏兰 周万蓉 王鸿宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1078-1083,共6页
从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成... 从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线；电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序，序列分析表明VP60基因序列全长1740bp，编码579个氨基酸，测序结果提交GenBank（注册号为DQ069280），并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较，结果表明核苷酸同源性为90．0％～98．0％，氨基酸同源性为94．1％～99．0％，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区；同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株，丰富了地方毒株资源，为明确我国地方株的分子流行病学，以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 无血凝性 衣壳蛋白 VP60基因 序列分析 RT—PCR
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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达 被引量：9
7
作者 李炯 刘艳红 +4 位作者 安芳兰 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期376-382,共7页
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病... 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 口蹄疫病毒 衣壳前体基因 绿色荧光蛋白基因 BHK-21细胞
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达 被引量：6
8
作者 吴兴安 胡刚 +6 位作者 李继业 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期78-80,65,共4页
淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV... 淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白 基因片段 原核载体 虹彩病毒 诱导表达
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非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达 被引量：5
9
作者 毕振威 王永山 +5 位作者 范红结 王智群 吴晓悠 马金荣 欧阳伟 张海彬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期625-629,共5页
为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与... 为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96.6%～99.2%和97.9%～99.4%之间,与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93.2%～93.6%和96.4%～97.5%之间;在N基因系统发育进化树上,非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群,而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku,主要以包涵体的形式存在;用western blot分析,重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 非典型 核衣壳蛋白基因 序列分析 原核表达
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犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析 被引量：11
10
作者 鞠会艳 乔军 +2 位作者 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期112-120,共9页
根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白... 根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白基因全长1989bp,预测编码662个氨基酸,F蛋白氨基酸序列中含有5个潜在的N-联糖基化位点。聚类分析提示,CDVLP株是一株与CDV强毒株亲源关系很近的毒株。用DNAstar软件对CDVLP株和Onderstepoort弱毒株N蛋白和F蛋白进行了疏水性及抗原表位预测分析。抗原表位差异提示CDVLP毒株N和F蛋白的免疫原性可能要优于Onderstepoort弱毒株。在分子水平上阐明了CDVLP株的N和F蛋白基因更适合作为构建基因疫苗和重组活载体疫苗的目的基因。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒小熊猫株 核蛋白和融合蛋白基因 克隆 序列分析
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传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达 被引量：6
11
作者 周继勇 丁红梅 +1 位作者 程丽琴 沈行燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期450-455,共6页
核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片... 核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4 展开更多
关键词 禽病毒 传染性支气管炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 E.COLI 表达
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兔病毒性出血症病毒YL株衣壳蛋白(VP60)基因的克隆和生物信息学分析 被引量：5
12
作者 李传山 杨颖 +2 位作者 张守涛 杨增岐 郭蔼光 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期700-707,共8页
应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL株中克隆出衣壳蛋白VP60基因并测序,YL株是中国西北地区首株被测序的RHDV,测序结果显示VP60基因全长1 740 bp,编码579个氨基酸,测序结果在GenBank中注册(登录号为DQ530363)。从GenBank... 应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL株中克隆出衣壳蛋白VP60基因并测序,YL株是中国西北地区首株被测序的RHDV,测序结果显示VP60基因全长1 740 bp,编码579个氨基酸,测序结果在GenBank中注册(登录号为DQ530363)。从GenBank下载全部已发表的40株RHDV序列,运用生物信息学软件分析,构建系统进化树和氨基酸序列同源性表,结果表明,世界不同地区RHDV分离株基因序列虽然非常保守,达到90%以上,但可以分为5个基因群,并且基因型和地域性没有必然联系,中国的分离株除了WX84株外,其它均处于第V基因群,该基因群内近年分离出的中国4个不同大地区(西北、华东、东北、西南)的RHDV毒株与NJ85株遗传距离很近,很可能都来自同一毒株NJ85。同时,对4个不同大地区的近年的4个代表性分离株的二级结构、抗原性进行了预测分析,结果显示二级结构有一定差异,但抗原性相同,这与RHDV只有一个血清型的看法相一致。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白(VP60)基因 RT-PCR 生物信息 序列分析
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犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因片段的克隆和表达 被引量：4
13
作者 杨敬 范薇 +4 位作者 隋丽华 李俊梅 刘永梅 李文龙 陈振文 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第3期165-168,共4页
目的　构建pMal N重组表达载体 ,转化E .coliDH5α ,诱导表达犬瘟热病毒 (CDV)重组核衣壳 (N)蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从CDVRNA中扩增编码N蛋白的基因片段 ,通过连接反应 ,构建重组克隆载体和重组表达载体 ,转化感受态。E .coliDH... 目的　构建pMal N重组表达载体 ,转化E .coliDH5α ,诱导表达犬瘟热病毒 (CDV)重组核衣壳 (N)蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从CDVRNA中扩增编码N蛋白的基因片段 ,通过连接反应 ,构建重组克隆载体和重组表达载体 ,转化感受态。E .coliDH5α细胞。通过IPTG诱导表达CDV重组N蛋白。结果　扩增出约 1 7kbCDV全长的主要结构蛋白N蛋白基因 ,通过PCR获得 5 36bpN蛋白基因片段。将N蛋白基因片段克隆入原核表达载体pMal C2 ,表达产物麦芽糖结合蛋白 (MAP)与N蛋白的融合蛋白的相对分子质量约 6 0× 10 3,与预期大小一致。结论　构建的pMal N重组载体所表达的CDVN蛋白为进一步研究CDV的特异。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 核衣壳蛋白 基因片段 克隆 表达
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新城疫病毒F_(48)E_(8)株融合蛋白基因的克隆 被引量：4
14
作者 吴艳涛 刘秀梵 +1 位作者 张如宽 刘伟忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期176-180,共5页
以提纯的我国标准ＮＤＶＦ４８Ｅ８强毒株基因组ＲＮＡ为模板、化学合成的融合蛋白（Ｆ）基因特异寡核苷酸为引物，反转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ，并采用同聚物加尾的方法克隆到细菌质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）。经ＡＩＸ平板筛选和酶切分析... 以提纯的我国标准ＮＤＶＦ４８Ｅ８强毒株基因组ＲＮＡ为模板、化学合成的融合蛋白（Ｆ）基因特异寡核苷酸为引物，反转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ，并采用同聚物加尾的方法克隆到细菌质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）。经ＡＩＸ平板筛选和酶切分析，并用Ｆ基因片段核酸探针作ｄｏｔ－ｂｌｏｔ检测，共获得插入片段长度在０．６～２．８ｋｂ之间的阳性克隆３４个，其中插入片段大于１．５ｋｂ的阳性克隆８个。用多种限制性内切酶对阳性克隆ｐＦ７（１．８ｋｂ）作酶切分析，其结果与国外报道的几株Ｆ基因相符。 展开更多
关键词 新城疫 病毒 融合蛋白 基因克隆
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猪瘟病毒E2蛋白抗原单表位基因的融合表达及其免疫活性的研究 被引量：5
15
作者 刘思国 涂长春 +3 位作者 余兴龙 张茂林 刘伯华 吴健敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期530-535,共6页
利用基因搭桥技术,在KlenowDNA聚合酶作用下,分别合成猪瘟病毒E2蛋白的3个抗原表位基因,并与原核表达载体pGEX-3X进行连接、转化和筛选鉴定,构建了3个重组质粒pGEX-C、pGEX-D和pGEX-E。在IPTG的诱导下,实现了可溶性蛋白的融合表达(GST-C... 利用基因搭桥技术,在KlenowDNA聚合酶作用下,分别合成猪瘟病毒E2蛋白的3个抗原表位基因,并与原核表达载体pGEX-3X进行连接、转化和筛选鉴定,构建了3个重组质粒pGEX-C、pGEX-D和pGEX-E。在IPTG的诱导下,实现了可溶性蛋白的融合表达(GST-C、GST-D、GST-E),以GST亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。应用ELISA和Western-blot检测证实:E抗原表位基因表达的融合蛋白GST-E具有免疫学活性,而C和D的抗原表位基因虽然都表达了融合蛋白GST-C和GST-D,但未检测到免疫学活性。免疫攻毒保护试验表明:融合蛋白GST-E具有一定的免疫保护功能,为多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 基因表达 融合表达 免疫学活性
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新城疫病毒鹌鹑分离株融合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：4
16
作者 郭鑫 曹殿军 +4 位作者 闵平 闫丽辉 刘培欣 房海 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第6期430-435,共6页
本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒（QNDV／89）为研究对象，用反转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）对QNDV／89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后，采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷... 本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒（QNDV／89）为研究对象，用反转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）对QNDV／89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后，采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列，并推导出相应氨基酸序列。QNDV／89株F基因全长1662bp，单一的开放阅读框编码553个氨基酸的多肽，其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117，是NDV强毒株所特有的序列结构，这与其生物学特性及致病性实验结果是相一致的。序列分析结果表明，QNDV／89株与F48E9株的核苷酸同源率高达99.22％，氨基酸的同源率为98.37％;而与弱毒株LaSota的核苷酸同源率为88.93％，氨基酸的同源率为90.42％。本研究首次报道了流行于我国鹌鹑中的新城疫强毒融合蛋白基因序列，并与其它新城疫病毒进行了同源性比较，证明QNDV／89株核苷酸的变异引起了其蛋白质二级结构的部分改变。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鹌鹑 分离株 融合蛋白基因 克隆
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马动脉炎病毒N蛋白基因GST融合表达载体的构建及表达 被引量：4
17
作者 杜建 王志亮 +2 位作者 宋厚辉 金宁一 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2005年第9期50-54,共5页
采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因ORF7,并将其克隆到pMD18-T载体,构建成重组质粒pMD18-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAV NC-002532株的同源性为99%。表明ORF7是EAV基因组内的保守序... 采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因ORF7,并将其克隆到pMD18-T载体,构建成重组质粒pMD18-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAV NC-002532株的同源性为99%。表明ORF7是EAV基因组内的保守序列,将ORF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21(DE3),诱导表达后SDS-PAGE和Western blotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶(GST)下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40 ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 马动脉炎病毒 核衣壳蛋白基因 克隆 原核表达
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段在真核细胞中的初步表达 被引量：5
18
作者 吴兴安 李继业 +6 位作者 胡刚 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《科学技术与工程》 2003年第3期234-236,共3页
将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N_2,得到阳性重组质粒pEGFP-N_2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显... 将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N_2,得到阳性重组质粒pEGFP-N_2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明:已成功将目的片断LCDV MCP 0.6kb转染到CHO细胞,并得到了初步表达。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白基因 真核细胞 基因克隆 基因表达 鱼类病毒
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兔出血症病毒YL株衣壳蛋白VP60基因在原核系统中的高效表达 被引量：3
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作者 李传山 任力刚 +2 位作者 李维英 杨增岐 郭蔼光 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第11期24-28,共5页
为了在原核系统中高效表达兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60,应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL中克隆出了衣壳蛋白VP60基因并测序,结果显示,YL株VP60基因全长1740 bp,GC含量为55.3%,已在GenBank中注册(登录号为DQ530363),... 为了在原核系统中高效表达兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60,应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL中克隆出了衣壳蛋白VP60基因并测序,结果显示,YL株VP60基因全长1740 bp,GC含量为55.3%,已在GenBank中注册(登录号为DQ530363),VP60基因与中国RHDV最早期分离株WX84的VP60基因核苷酸序列同源性为93.0%,氨基酸序列同源性为95.8%。构建成功YL株VP60基因原核表达载体VP60-pET32a,转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中。1 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,VP60融合蛋白分子质量约为75 ku,其表达量占总菌体蛋白的39.8%。Western blot检测结果表明,VP60融合蛋白可以和RHDV抗血清发生特异反应。本研究结果显示,兔出血症病毒在干旱半干旱条件下的遗传变异和免疫学特征无较大变化。 展开更多
关键词 兔出血症病毒(RHDV) 衣壳蛋白(VP60)基因 原核表达 WESTERN BLOT
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新城疫病毒F48E9株融合蛋白基因核苷酸序列分析 被引量：5
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作者 曹殿军 苑纯秀 +3 位作者 郭鑫 闵平 孔宪刚 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期103-106,共4页
通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列... 通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。Ｆ基因全长为１６６２个ｂｐ，单一的开放阅读框编码５５３个氨基酸的多肽。Ｆ蛋白的疏水构型有三个强疏水区；其裂解位点的氨基酸序列为１１２Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｒ－１１６Ｒ－１１７Ｆ；Ｆ蛋白上共有１２个Ｃｙｓ残基位点和五个潜在糖基化位点。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 核苷酸序列
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