随机扩增多态性DNA技术检测不同地区田鼠型鼠疫耶尔森氏菌基因结构 被引量：5

1

作者 崔百忠 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期344-345,共2页

目的　了解不同地区田鼠型鼠疫耶尔森氏菌 (以下简称鼠疫菌 )之间的亲缘关系和基因类型。方法　随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果　扩增的 13株田鼠型鼠疫耶尔森氏菌在凝胶电泳所显示的条带 ,除 3株菌缺少部分条带外 ,其余菌株基本相... 目的　了解不同地区田鼠型鼠疫耶尔森氏菌 (以下简称鼠疫菌 )之间的亲缘关系和基因类型。方法　随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果　扩增的 13株田鼠型鼠疫耶尔森氏菌在凝胶电泳所显示的条带 ,除 3株菌缺少部分条带外 ,其余菌株基本相同。结论　青海田鼠型鼠疫耶尔森氏菌和布氏田鼠型鼠疫耶尔森氏菌具有相似性 ,在遗传学上属于同源。 展开更多

关键词 检测 田鼠型鼠疫耶尔森氏菌 随机扩增多态性DNA技术 基因型

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假结核耶尔森氏菌T6SS效应蛋白TepC功能研究

2

作者 瞿熠晨 郭呈昊 +5 位作者 赵依昕 史圆 邢照岩 宋莉 潘君风 沈锡辉 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期47-55,共9页

【目的】研究模式病原细菌假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)Ⅵ型分泌系统T6SS效应蛋白TepC对细菌生物膜形成的影响及其自身杀虫活性,为该效应蛋白的开发应用奠定基础。【方法】采用结晶紫染色法,观察假结核耶尔森氏菌野生... 【目的】研究模式病原细菌假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)Ⅵ型分泌系统T6SS效应蛋白TepC对细菌生物膜形成的影响及其自身杀虫活性,为该效应蛋白的开发应用奠定基础。【方法】采用结晶紫染色法,观察假结核耶尔森氏菌野生型(WT)、ΔtepC突变体和ΔtepC(tepC)回补菌株的非生物表面生物膜形成情况,并对其进行定量和定性分析;以线虫模型进行生物表面的生物膜形成试验,研究TepC对假结核耶尔森氏菌生物膜形成能力的影响;以大蜡螟为模型,研究假结核耶尔森氏菌野生型和突变体对大蜡螟致病性的影响;以大蜡螟和棉铃虫为模型,研究纯化TepC蛋白的毒性作用;对大蜡螟脂肪体进行组织切片HE染色,研究TepC处理对大蜡螟脂肪体的影响;利用定量PCR方法研究假结核耶尔森氏菌野生型和tepC突变体感染对大蜡螟抗菌肽基因表达的影响;构建tepC转基因拟南芥,检测转基因拟南芥对甜菜夜蛾幼虫的毒性。【结果】TepC在假结核耶尔森氏菌生物膜形成过程中发挥重要作用,基因tepC的缺失导致假结核耶尔森氏菌在非生物表面和生物表面(线虫)的生物膜形成能力显著降低;TepC能影响假结核耶尔森氏菌对大蜡螟的致病性,注射假结核耶尔森氏菌野生型的大蜡螟存活率仅为36.7%,而注射ΔtepC突变体的大蜡螟存活率为70.0%,另外TepC蛋白对大蜡螟和棉铃虫均有毒性作用,具有广谱杀虫性;TepC处理导致大蜡螟脂肪体遭到破坏,其通过影响大蜡螟脂肪体发挥毒性作用;与接种假结核耶尔森氏菌ΔtepC突变体菌株相比,接种假结核耶尔森氏菌WT菌株的大蜡螟抗菌肽在6 h显著上调,表明TepC影响了大蜡螟的免疫防御功能,喂食tepC转基因拟南芥可以显著降低甜菜夜蛾幼虫的存活率。【结论】假结核耶尔森氏菌T6SS效应蛋白TepC不仅在细菌竞争中发挥作用,还具有杀虫功能,并能影响细菌生物膜的形成。 展开更多

关键词 假结核耶尔森氏菌 Ⅵ型分泌系统 杀虫蛋白 生物膜

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鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型——田鼠型的提出 被引量：25

3

作者 周冬生 童宗中 +16 位作者 宋亚军 张玲 裴德翠 庞昕 韩延平 李敏 崔百忠 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期211-215,共5页

目的　探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法　通过全基因组序列的比较分析 ,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变 ,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法 ,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果　田鼠鼠疫自然疫源... 目的　探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法　通过全基因组序列的比较分析 ,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变 ,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法 ,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果　田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大。所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变 ,所有甘油利用阴性菌株的 glpD基因发生了突变 ,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变。结论　提出了一个新的生物型———田鼠型 ;相应糖醇代谢相关基因发生突变是 4个生物型变异的遗传基础。 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 生物型 突变

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多重PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌 被引量：19

4

作者 于学东 裴德翠 +4 位作者 宋亚军 郭兆彪 王津 李永勤 杨瑞馥 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期98-100,107,共4页

目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列... 目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 。 展开更多

关键词 多重PCR 快速鉴定 鼠疫耶尔森氏菌 鼠疫

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对1株疑似鼠疫耶尔森氏菌的系统鉴定 被引量：4

5

作者 何建 李艳君 +8 位作者 祁芝珍 崔玉军 任玲玲 代瑞霞 王效义 崔百忠 张青雯 杨瑞馥 宋亚军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期355-358,共4页

目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)。方法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体... 目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)。方法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体完全裂解;主要生化特性为阿胶糖(+)、鼠李糖(-)、麦芽糖(+)、蜜二糖(-)、甘油(+)、脱氮(+),与典型鼠疫菌一致。毒力因子检查结果为均为阴性;对实验动物小白鼠完全无致死能力。全基因组芯片杂交实验和PCR扩增表明55023菌株没有鼠疫菌的三个质粒;也不具鼠疫标识基因;pgm位点代表性基因YPO1954扩增阳性,YPO1908扩增阴性,表明其pgm位点不完整;差异片段(DFR)分型结果表明该菌株缺失了14个DFR,不符合鼠疫菌的特征;多位点序列分型(MLST)分析结果表明该菌株与鼠疫存在16个碱基的差异,而与血清Ⅲ型假结核耶尔森氏菌仅相差两个碱基。结论尽管55023菌株具备鼠疫菌的一些表型特征,但基因组特征表明其不是鼠疫菌,而可能是血清III型的假结核耶尔森氏菌;噬菌体裂解结果等表型不能作为鼠疫菌鉴定的最终标准。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 假结核耶尔森氏菌 表型鉴定 基因型鉴定

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荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究 被引量：13

6

作者 张玲 翟俊辉 +4 位作者 周冬生 郭兆彪 毕玉晶 王津 杨瑞馥 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期206-209,共4页

目的　利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。 方法　采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶... 目的　利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。 方法　采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物 ,检测其灵敏度和特异性 ,以盲测试验进行验证 ;在此基础上鉴定 2 75株鼠疫耶尔森氏菌 ,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度。结果　建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系 ;EV76的检测灵敏度可达每反应体系 1.6个菌 ;检测我国 18个生态型共计 2 75株鼠疫耶尔森氏菌及 2 8株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明 ,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果 ,2 8株对照菌株均为阴性 ;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系 4 0 0 0个菌。结论　该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点 。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 荧光定量PCR 标识序列 LightCycler

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鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：3

7

作者 杜春红 王鹏 +2 位作者 张建中 唐雪 宋志忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期985-988,共4页

目的:利用原核表达的鼠疫耶尔森氏菌P la蛋白(rP la),通过杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(mAb),为相关研究工作奠定基础。方法:大肠杆菌表达的P la蛋白,包涵体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB/c小鼠,取血清抗体效价高的小鼠脾细胞与Sp2/0... 目的:利用原核表达的鼠疫耶尔森氏菌P la蛋白(rP la),通过杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(mAb),为相关研究工作奠定基础。方法:大肠杆菌表达的P la蛋白,包涵体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB/c小鼠,取血清抗体效价高的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,以表达Pla、表达GST、天然提取Pla 3种蛋白为抗原物,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,并结合Western blot对所获取mAb的特异性进行鉴定。结果:经间接ELISA筛选,获得3株能稳定分泌抗天然Pla蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为15B8、14H4、19A4,亚类测定分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ链;腹水经间接ELISA法检测效价可达1∶106;Westernblot实验证实该3株mAb能特异性识别天然Pla蛋白。结论:成功获得了抗鼠疫耶尔森氏菌天然Pla抗原的特异性mAb,为进一步研究Pla蛋白及研发诊断试剂奠定了基础。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 Pla蛋白 单克隆抗体

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基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌 被引量：2

8

作者 谢辉 周蕾 +1 位作者 祁芝珍 邵高祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期783-787,共5页

目的实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、... 目的实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、鼠疫减毒菌株、耶尔森菌属近缘菌株假结核菌及小肠结肠炎菌进行荧光定量PCR检测。结果55株鼠疫耶尔森氏菌及鼠疫减毒菌株扩增阳性,假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌无阳性扩增,冻干试剂在室温25℃和37℃条件下可保存6个月,敏感性与冷冻保存无差异,核酸扩增诊断可在1 h内完成。结论应用基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法对我国各鼠疫疫源地55株鼠疫耶尔森氏菌检测呈现高度特异性,本试验冻干试剂具有可室温保存、便于运输、检测结果精准、快速等特点,具有较好的鼠疫现场应用前景。 展开更多

关键词 室温储运 荧光定量PCR 鼠疫耶尔森氏菌 冻干试剂

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鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆与表达研究 被引量：1

9

作者 王忠泽 荫俊 +4 位作者 王威 白洁 侯晓军 宋伟 张松乐 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期12-15,共4页

目的　研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法　采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重... 目的　研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法　采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组质粒 pBV/LcrV ,进行温控诱导表达。 结果　 ( 1)获得长约 980bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知LcrV序列相同。( 2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 3 8× 10 3处有表达条带。 ( 3 )经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 3 8.4 %。 ( 4 )表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于上清中。结论　获得了LcrV基因 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达产物主要以可溶状态存在。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 基因克隆 测序 基因表达 LcrV基因

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一种选择敏感培养基对腐败材料检测鼠疫耶尔森氏菌检测的应用效果 被引量：1

10

作者 谢辉 刘中凯 +3 位作者 耿永强 冯建萍 多杰昂欠 金星 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期906-909,930,共5页

目的研制并筛选适合从腐败材料分离鼠疫菌的选择敏感培养基,对其性能进行评价。方法以自制赫氏消化液为基础,加入刺激鼠疫菌和抑制杂菌生长的生化试剂配制成2种选择敏感培养基,以常见致病菌株、耶尔森氏菌属中与鼠疫菌近源的假结核耶尔... 目的研制并筛选适合从腐败材料分离鼠疫菌的选择敏感培养基,对其性能进行评价。方法以自制赫氏消化液为基础,加入刺激鼠疫菌和抑制杂菌生长的生化试剂配制成2种选择敏感培养基,以常见致病菌株、耶尔森氏菌属中与鼠疫菌近源的假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌评估2种培养基的敏感性和特异性;应用以上培养基分离野外腐败动物材料的鼠疫菌,评价几种选择培养基的应用效果。结果1号培养基(4%十二烷基硫酸钠选择培养基)对鼠疫菌检测的特异性高、敏感性强,培养24 h鼠疫菌发育为典型成熟菌落,应用该培养基从腐败动物材料中分离鼠疫菌阳性检出率与龙胆紫选择培养基一致。结论4%十二烷基硫酸钠选择培养基分离鼠疫菌效果优于龙胆紫选择培养基,可用于野外腐败动物材料的鼠疫菌快速检验。 展开更多

关键词 选择敏感培养基 腐败材料 鼠疫耶尔森氏菌 快速检测 现场应用

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鼠疫耶尔森氏菌YscF的表达及免疫原性分析 被引量：1

11

作者 崔萍 于三科 罗德炎 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第12期68-72,共5页

【目的】研究重组鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)YscF蛋白的免疫原性。【方法】将含重组质粒YscF的E.coliBL21-YscF阳性克隆接种于LB液体培养基进行诱导表达;采用Ni2+亲和层析法对表达产物进行纯化;以蛋白体为佐剂吸附重组YscF蛋白,对Balb/... 【目的】研究重组鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)YscF蛋白的免疫原性。【方法】将含重组质粒YscF的E.coliBL21-YscF阳性克隆接种于LB液体培养基进行诱导表达;采用Ni2+亲和层析法对表达产物进行纯化;以蛋白体为佐剂吸附重组YscF蛋白,对Balb/c小鼠滴鼻免疫后,采用间接ELISA法检测血清中抗YscF的IgG和鼻、肺、小肠冲洗液中sIgA的抗体效价。【结果】重组YscF蛋白获得了高效表达,并以可溶性蛋白形式存在于上清中;滴鼻免疫小鼠后不但可以提高血清中总IgG效价,还可以诱导呼吸道分泌IgA型抗体;对腹腔注射100LD50强毒鼠疫菌攻击有一定保护效力,存活率为60%。【结论】YscF是鼠疫菌的一个有免疫原性的蛋白,能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫;重组鼠疫菌YscF抗原可以作为改进的F1+V亚单位疫苗的辅助成分。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 Ⅲ型分泌系统 YscF蛋白 免疫原性

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类Orientalis鼠疫耶尔森氏菌的基因分型及鼠疫大流行

12

《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期i001-i001,共1页

在过去的1500年中，共发生过三次鼠疫大流行，鼠疫耶尔森氏菌引起了其中的第三次大流行。鼠疫耶尔森氏菌的DNA也在第二次大流行中人类的遗骸中发现。鼠疫耶尔森氏菌的Antiqua生物型可能引起了第一次大流行，其他的2种生物型，即Medieva... 在过去的1500年中，共发生过三次鼠疫大流行，鼠疫耶尔森氏菌引起了其中的第三次大流行。鼠疫耶尔森氏菌的DNA也在第二次大流行中人类的遗骸中发现。鼠疫耶尔森氏菌的Antiqua生物型可能引起了第一次大流行，其他的2种生物型，即Medievalis和Orientalis可能分别引起第二次和第三次大流行。为了验证这种假说，我们设计了一种称作“多间隔区(指基因组内已知基因间的DNA序列)分型法”的原始基因分型系统，该系统的原理是测量基因间间隔区的DNA序列。 展开更多

关键词 类Orientalis鼠疫耶尔森氏菌 基因分型 鼠疫 流行病学

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自然疫源地中鼠疫耶尔森氏菌的保存问题 被引量：5

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作者 王梦迪 尹家祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1036-1040,共5页

鼠疫的发生得益于鼠疫菌能够在自然界长期存在。无论是鼠疫流行期还是间歇期,鼠疫菌在自然界中究竟存在于何地,以何种方式保存,又以什么机制造成流行是鼠疫发生的神秘之处。因此,研究鼠疫菌在自然疫源地各生态要素中的保存状况及生存能... 鼠疫的发生得益于鼠疫菌能够在自然界长期存在。无论是鼠疫流行期还是间歇期,鼠疫菌在自然界中究竟存在于何地,以何种方式保存,又以什么机制造成流行是鼠疫发生的神秘之处。因此,研究鼠疫菌在自然疫源地各生态要素中的保存状况及生存能力,有助于揭示鼠疫的发生及传播规律。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 自然疫源地 保存

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基于CRISPR/Cas12a的室温稳定鼠疫耶尔森氏菌检测体系的建立 被引量：2

14

作者 任一帆 吴耿珊 +6 位作者 王桐 张源 曹诗洋 谭亚芳 陈红艳 郭晓 杜宗敏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期419-425,共7页

目的筛选并优化冻干保护剂组合,建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系,为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础。方法以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因,选择9种常用冻干保护剂加入核酸检... 目的筛选并优化冻干保护剂组合,建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系,为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础。方法以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因,选择9种常用冻干保护剂加入核酸检测试剂中,筛选有明显保护效果的4种保护剂进行优化。按照正交实验设计原则设计保护剂组合,通过37℃加速破坏实验及26℃室温稳定性实验对复合保护剂进行保护效果和灵敏度评价。结果加入蔗糖、山梨醇和海藻糖3种保护剂的冻干检测体系可在37℃稳定存放2周。室温下存放3个月后体系检测信号强度与37℃加速破坏1周时基本相当,同时检测方法的灵敏度依然能达到10-5 ng/μL,说明Cas12a检测试剂加入筛选得到的保护剂冻干后,可在室温下稳定保存至少6个月。结论本研究构建的室温稳定CRISPR/Cas12a鼠疫菌检测体系可在室温下稳定存放至少半年,能够满足鼠疫菌现场快速检测中对试剂稳定性的需求。同时,本研究获得的复合保护剂组分对构建其它室温稳定CRISPR/Cas12a核酸检测体系具有重要参考价值。 展开更多

关键词 稳定性 鼠疫耶尔森氏菌 Cas12a 冻干保护剂 核酸检测

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鼠疫耶尔森菌基因组进化与生态位适应研究 被引量：77

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作者 周冬生 韩延平 +18 位作者 宋亚军 童宗中 裴德翠 戴二黑 张玲 包静月 李敏 崔百忠 张秀清 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期204-210,共7页

目的　探索鼠疫耶尔森菌基因组进化的基本规律及其与该菌在自然界适应性演化之间的内在联系。方法　对 36株鼠疫耶尔森菌和 7株假结核耶尔森菌进行芯片比较基因组分析 ,鉴定差异区段 (DFR) ,并对 2 6 0株鼠疫耶尔森菌进行PCR验证 ,分析... 目的　探索鼠疫耶尔森菌基因组进化的基本规律及其与该菌在自然界适应性演化之间的内在联系。方法　对 36株鼠疫耶尔森菌和 7株假结核耶尔森菌进行芯片比较基因组分析 ,鉴定差异区段 (DFR) ,并对 2 6 0株鼠疫耶尔森菌进行PCR验证 ,分析各DFR在这些鼠疫耶尔森菌中的分布 ,同时进行基因组岛分析。结果　在鼠疫耶尔森菌基因组中鉴定出 2 2个DFR ,基于DFR图谱 ,将鼠疫耶尔森菌中国分离株分成 14个基因组型。鼠疫耶尔森菌共有 2 1个基因组岛 ,其中 18个已存在于假结核杆菌中 ,余下 3个为鼠疫耶尔森菌独有。结论　探明了各基因组岛在鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌间的差异分布 ,探究了鼠疫耶尔森菌的起源进化 ;建立了鼠疫耶尔森菌基因组分型系统 ;建立了各基因组型别间的系统发育关系 ,初步揭示了鼠疫耶尔森菌基因组的进化规律及其与鼠疫耶尔森菌生态位适应和鼠疫疫源地扩展之间的关系 。 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 DNA芯片 基因组进化 生态位适应

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鼠疫耶尔森菌菌株91001全基因组序列测定及初步分析 被引量：40

16

作者 宋亚军 童宗中 +26 位作者 王津 郭兆彪 汪莉 韩延平 张建国 裴德翠 周冬生 秦海鸥 庞昕 韩玉军 翟俊辉 李敏 祁芝珍 金丽霞 戴瑞霞 崔百忠 陈峰 李胜霆 叶辰 杜宗敏 王效义 王俊 于军 杨焕明 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期192-199,共8页

目的　测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株 910 0 1的全基因组序列 ,并通过比较基因组学研究 ,探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线。方法　采用全基因组鸟枪法测定 910 0 1菌株的全基因组序列 ,利用比较基因组... 目的　测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株 910 0 1的全基因组序列 ,并通过比较基因组学研究 ,探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线。方法　采用全基因组鸟枪法测定 910 0 1菌株的全基因组序列 ,利用比较基因组方法对 910 0 1与另外 2株鼠疫耶尔森菌(CO92和KIM)的全基因组进行比较研究。结果　910 0 1菌株的基因组包括 1条染色体和 4个质粒 (pPCP1、pCD1、pMT1和pCRY)。pPCP1质粒长度为 96 0 9bp,与参考菌株基本一致 ;pCD1质粒是编码Ⅲ型分泌系统的质粒 ,长度为70 15 9bp,编码情况与参考菌株基本相同 ,但重排导致了质粒的结构与参考菌株存在差异 ;pMT1质粒长度为10 6 6 4 2bp,保留了较多的原始质粒片段 ,毒力相关基因与参考菌株没有差异 ;pCRY质粒是本研究中新发现的质粒 ,在国内外研究中未曾报道 ,这一质粒长度为2 174 2bp ,具有独立复制能力 ,有一群编码Ⅳ型分泌系统的基因。 910 0 1菌株的染色体长度为4 5 95 0 6 5bp,有 4 0 37个编码序列 (CDS) ,其中 14 1个是假基因 ;染色体中存在着非常丰富的插入序列 ,由于存在IS序列介导的基因组重排 ,910 0 1菌株染色体的结构与参考菌株存在较大差异。通过比较基因组学分析 ,初步确定了910 0 1菌株甘油降解阳性、硝酸盐还原阴性、阿拉? 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 基因组 进化 序列分析 DNA

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鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片的研制及用于比较基因组学分析 被引量：21

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作者 周冬生 韩延平 +17 位作者 戴二黑 宋亚军 包静月 裴德翠 李敏 崔百忠 张秀清 童宗中 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期200-203,共4页

目的　研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片 ,并将其用于比较基因组分析。方法　挑选出 4 0 0 5条鼠疫耶尔森菌基因 ,PCR扩增各基因 ,以纯化的PCR产物点样制备芯片 ,采用双色荧光杂交策略 ,进行芯片比较基因组杂交。结果　设计了若干质控... 目的　研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片 ,并将其用于比较基因组分析。方法　挑选出 4 0 0 5条鼠疫耶尔森菌基因 ,PCR扩增各基因 ,以纯化的PCR产物点样制备芯片 ,采用双色荧光杂交策略 ,进行芯片比较基因组杂交。结果　设计了若干质控杂交组合 ,芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致。 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 DNA芯片 比较基因组学

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鼠疫耶尔森菌DNA标识序列的鉴定及其应用研究 被引量：16

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作者 韩延平 周冬生 +16 位作者 宋亚军 裴德翠 李敏 崔百忠 包静月 张秀清 童宗中 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期307-309,共3页

目的　确定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列 ,以用于鼠疫耶尔森菌的快速检测和鉴定。方法　通过芯片比较基因组杂交和PCR验证 ,鉴定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列 ,针对标识序列设计特定的PCR引物。结果　鼠疫耶尔森菌基因组中存在 3个区段 ,共 2 8... 目的　确定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列 ,以用于鼠疫耶尔森菌的快速检测和鉴定。方法　通过芯片比较基因组杂交和PCR验证 ,鉴定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列 ,针对标识序列设计特定的PCR引物。结果　鼠疫耶尔森菌基因组中存在 3个区段 ,共 2 8条基因 ,均是鼠疫耶尔森菌DNA标识序列。针对其中 3条基因设计PCR引物 ,能特异性扩增出鼠疫耶尔森菌 ,与来自其他非鼠疫耶尔森菌的DNA无交叉反应。结论　鼠疫耶尔森菌存在DNA标识序列 ,并能用于鼠疫耶尔森菌的快速检测与鉴定。 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 DNA芯片 标识序列

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鼠疫耶尔森菌比较和进化基因组学研究 被引量：11

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作者 杨瑞馥 黄培堂 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期189-191,共3页

鼠疫菌是鼠疫的病原体 ,曾经引起 3次世界范围的鼠疫大流行。从基因组角度认识鼠疫菌在不同疫源地的演化对鼠疫的检验、鉴定和防治具有重要意义。本文论述了目前对鼠疫菌基因组进化的认识 。

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 基因组 进化

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鼠疫耶尔森菌活疫苗株的比较基因组学研究 被引量：1

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作者 周冬生 韩延平 +18 位作者 戴二黑 王津 宋亚军 童宗中 裴德翠 张玲 包静月 李敏 崔百忠 张秀清 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期310-314,共5页

目的　揭示不同来源的鼠疫活疫苗株在基因组组成上的差异。方法　以芯片比较基因组杂交为主要研究手段 ,结合PCR验证 ,对 19株鼠疫活疫苗株进行比较基因组分析。结果　鼠疫活疫苗株基因组中缺失了大量基因 ,但也有某些大片段基因的拷贝... 目的　揭示不同来源的鼠疫活疫苗株在基因组组成上的差异。方法　以芯片比较基因组杂交为主要研究手段 ,结合PCR验证 ,对 19株鼠疫活疫苗株进行比较基因组分析。结果　鼠疫活疫苗株基因组中缺失了大量基因 ,但也有某些大片段基因的拷贝增多。结论　不同来源的疫苗株在基因组组成上存在差异 ,构成了不同疫苗株的表型与使用效果具有差异性的遗传基础。 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 鼠疫活疫苗 DNA芯片 比较基因组学

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