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基于己烯雌酚-生物素双功能配体的己烯雌酚化学发光酶联免疫吸附检测技术研究 被引量:4
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作者 陈宗粉 王新阳 +1 位作者 宁保安 邵长利 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第6期1826-1833,共8页
目的基于己烯雌酚-生物素双功能配体和生物素-亲和素信号放大系统建立生物素-亲和素化学发光酶联免疫吸附试验(biotin-avidin-amplified chemiluminescent immunosorbent assay,BA-CLIA)法检测牛奶中的己烯雌酚的方法。方法采用1-乙基-... 目的基于己烯雌酚-生物素双功能配体和生物素-亲和素信号放大系统建立生物素-亲和素化学发光酶联免疫吸附试验(biotin-avidin-amplified chemiluminescent immunosorbent assay,BA-CLIA)法检测牛奶中的己烯雌酚的方法。方法采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺法[N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride/N-hydroxysuccinimide,EDC/NHS]制备己烯雌酚-生物素双功能配体;棋盘滴定法优化己烯雌酚-生物素双功能配体与抗己烯雌酚单克隆抗体的最佳稀释比例;对有机溶剂、离子强度、pH等影响因素进行优化后建立基于直接竞争化学发光免疫吸附试验检测己烯雌酚的标准曲线;通过特异性试验测定该方法与己烯雌酚结构类似物的交叉反应率;最后选取牛奶进行加标回收试验验证该方法在实际样品中检测的可行性。结果BA-CLIA法对己烯雌酚的半数抑制浓度为3.45 ng/mL,检出限为0.020 ng/mL,与传统竞争酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较,检测灵敏度提高了6.22倍;BA-CLIA法与己烯雌酚类似物(双烯雌酚、雌二醇、雌三醇和双酚A)的交叉反应性较低,显示了较好的特异性;采用该方法检测牛奶中的己烯雌酚,平均加标回收率为92.80%~95.74%,变异系数小于等于8.05%。结论该方法灵敏度高、特异性好,适用于牛奶中的己烯雌酚的测定。 展开更多
关键词 双功能配体 生物素-亲和素化学发光酶联免疫吸附试验 己烯雌酚检测 化学发光免疫分析
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生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定呋喃西林代谢物 被引量:10
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作者 黄登宇 冯敏 +3 位作者 李亚楠 高丽霞 高文静 杨秀松 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第2期394-401,共8页
目的建立竞争生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法(biotin-avidin enzyme linked immumosobent assay,BA-ELISA)检测呋喃西林代谢物。方法采用棋盘法确定单克隆抗体和包被原的最佳稀释倍数,通过单因素试验优化辣根过氧化物酶标记的链... 目的建立竞争生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法(biotin-avidin enzyme linked immumosobent assay,BA-ELISA)检测呋喃西林代谢物。方法采用棋盘法确定单克隆抗体和包被原的最佳稀释倍数,通过单因素试验优化辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase,SA-HRP)稀释倍数、封闭液浓度、竞争反应时间、生物素标记羊抗鼠二抗(biotinylated goat anti-mouse Immunoglobulin G,Biotin-IgG)孵育时间、SA-HRP孵育时间和显色时间,建立标准曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果最佳实验条件为:包被原稀释倍数为1:800,单克隆抗体稀释倍数为1:12800,SA-HRP稀释倍数为1:8000,封闭液为1%的脱脂乳,竞争反应时间为30 min,Biotin-IgG孵育时间为30 min,SA-HRP孵育时间为60 min,显色时间为15 min;在优化条件下,线性方程为Y=-0.3299X+0.4272(r^2=0.990),IC_(50)为0.601ng/m L,线性范围为0.074~4.883 ng/m L;加标回收率为88.8%~98.5%,批内变异系数(coefficient of variation,CV)和批间CV分别为1.2%~3.6%和2.5%~5.1%,建立的方法与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率(cross reactivity,CR)均小于0.1%。BA-ELISA与高效液相色谱-串联质谱法的回收率均在85%~115%范围内。结论 BA-ELISA法灵敏度高、特异性好、重现性好,可适用于动物组织中呋喃西林代谢物的快速筛查。 展开更多
关键词 兽药 呋喃西林 氨基脲 生物-亲和放大免疫吸附
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血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立 被引量:3
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作者 孙颖 李会强 +2 位作者 陈寅 仁杰 李婵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期615-617,共3页
目的建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb)。方法用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO... 目的建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb)。方法用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。结果本法抗原包被量为0.083μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数(CV)为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%~104.0%;包被板37℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数(r)为0.985(P<0.01)。结论间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。 展开更多
关键词 抗甲状腺过氧化物自身抗体 免疫吸附试验 生物-亲合系统
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水产品中孔雀石绿BA-ELISA检测方法的建立及应用 被引量:6
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作者 杨光昕 苏悦 +5 位作者 李冰莲 孔聪 黄宣运 张璇 于慧娟 韩峰 《中国渔业质量与标准》 2019年第4期30-35,共6页
建立了基于生物素-链霉亲合素放大的酶联免疫吸附法(BA-ELISA)检测水产品中的孔雀石绿(MG)含量的方法。优化了包被原和生物素化抗体的工作浓度,以及封闭液、温育时间、pH值和盐离子强度等实验条件。结果显示,最佳实验条件为:包被原和生... 建立了基于生物素-链霉亲合素放大的酶联免疫吸附法(BA-ELISA)检测水产品中的孔雀石绿(MG)含量的方法。优化了包被原和生物素化抗体的工作浓度,以及封闭液、温育时间、pH值和盐离子强度等实验条件。结果显示,最佳实验条件为:包被原和生物素化抗体的稀释倍数均为1∶ 2 000,封闭液为1%明胶,抗原抗体反应时间为 60 min ,缓冲液的pH值为7.0,盐离子强度为0.1 mol/L。在此条件下,该方法的线性范围为0.05~20.00 ng/mL,检出限(LOD)为0.037 μg/kg,回收率为83.5%~115.0%,变异系数( CV )为4.53%~13.80%。将该方法用于实际样品的分析检测,检测结果与LC/MS相比,具有较好的相关性。上述结果表明,本实验建立的方法灵敏度高,特异性和稳定性较好,可用于水产品中MG的分析筛查。 展开更多
关键词 孔雀石绿 水产品 生物-链霉亲和 免疫吸附
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