应用生物素标记的重组质粒作为探针的杂交条件及敏感性研究 被引量：3

1

作者 童光志 白丽萍 +3 位作者 宁希德 赵永军 赵奕 殷震 《中国畜禽传染病》 CSCD 1990年第4期49-51,共3页

貂肠炎细小病毒复制中间型 DNA(MEV-RF-DNA)的 HindⅢ-C 片段被克隆到 pBR322中形成重组质粒pBM。用光生物素(photo biotin)标记 pBM 和 HindⅣ酶切片段的 pBM 作为探针分别与貂,太细小病毒感染的细胞培养物人工感染细小病毒的貂和犬粪... 貂肠炎细小病毒复制中间型 DNA(MEV-RF-DNA)的 HindⅢ-C 片段被克隆到 pBR322中形成重组质粒pBM。用光生物素(photo biotin)标记 pBM 和 HindⅣ酶切片段的 pBM 作为探针分别与貂,太细小病毒感染的细胞培养物人工感染细小病毒的貂和犬粪便进行斑点杂交试验,结果发现两种探针检测的敏感性相差10倍以上.光生物素标记的完整重组质粒探针具有放大作用,酶切后的 pBM 敏感性不如前者.另外,本实验还证明在用生物素标记的探针杂交时,被检样品用热变性处理比碱变性处理效果更佳,而且简便。 展开更多

关键词 生物素标记 探针 敏感性

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生物素标记IBDV─RNA探针的制备及其对IBDV─RNA检测的初步研究 被引量：1

2

作者 董志珍 胡永浩 +1 位作者 王蒲 沈正达 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第3期279-282,共4页

以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提取病毒。纯化的病毒ＲＮＡ在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９０ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两条带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探... 以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提取病毒。纯化的病毒ＲＮＡ在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９０ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两条带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良好的特异性。它不与其它３种禽类病毒（ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＶ）的核酸抽提物发生交叉反应。此试验是快速、敏感、可重复的。其敏感度达０．５ｐｇ。 展开更多

关键词 IBD 病毒 鸡病 生物素标记

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生物素标记DNA探针制备及其在口腔致龋菌检测中的应用 被引量：1

3

作者 杜民权 《国外医学（口腔医学分册）》 北大核心 1994年第2期65-69,共5页

随着分子生物学技术的发展,DNA探针技术已广泛用于病原微生物的检测,它能从DNA分子水平鉴定细菌,具有快速、准确、灵敏度高、特异性强等优点。其标记技术已从同位素标记发展到非同位素标记。本文拟对DNA探针的制备、生物素标记、杂交检... 随着分子生物学技术的发展,DNA探针技术已广泛用于病原微生物的检测,它能从DNA分子水平鉴定细菌,具有快速、准确、灵敏度高、特异性强等优点。其标记技术已从同位素标记发展到非同位素标记。本文拟对DNA探针的制备、生物素标记、杂交检测及其在口腔致龋菌研究中的应用作一综述。 展开更多

关键词 变形链球菌 生物素标记 检测 口腔

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三种PCR引物法制备生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针检测效果的比较

4

作者 韩盛 刘升学 +1 位作者 向本春 曹连莆 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第4期415-418,共4页

采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明,三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10pg/μL,对目标基因DNA的检测灵敏度可达90pg/μL,但反义引物PCR法标记探... 采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明,三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10pg/μL,对目标基因DNA的检测灵敏度可达90pg/μL,但反义引物PCR法标记探针的检测效果要好于正义和反义引物双链PCR法制备的探针;在目标基因DNA浓度一定的情况下,探针的浓度对检测效果的影响并不大;正义、反义引物PCR法制备的探针可不经煮沸变性处理直接使用;用50ng/mL浓度的反义引物PCR法制备的生物素标记cDNA探针可检测到带毒啤酒花叶片和花瓣中的啤酒花潜隐病毒RNA。 展开更多

关键词 HpLV 核酸杂交 生物素标记探针 cDNA检测效果

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用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫kDNA探针的研究

5

作者 王云飞 钟淑梅 周勇志 《中国动物传染病学报》 CAS 1995年第1期16-17,共2页

用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫ｋＤＮＡ探针的研究王云飞，钟淑梅，周勇志（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）前言动基体ＤＮＡ（ｋＤＮＡ）是伊氏锥虫重要特征之一。应用同位素标记ｋＤＮＡ探针来检测伊氏锥虫，灵敏度高ｔ‘］。然... 用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫ｋＤＮＡ探针的研究王云飞，钟淑梅，周勇志（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）前言动基体ＤＮＡ（ｋＤＮＡ）是伊氏锥虫重要特征之一。应用同位素标记ｋＤＮＡ探针来检测伊氏锥虫，灵敏度高ｔ‘］。然而，同位素标记受实验条件限制，对于... 展开更多

关键词 长臂光敏生物素 伊氏锥虫 kDNA探针 同位素标记 光敏生物素标记 动基体 仲丁醇 寄生虫病研究所 鼠血细胞 亲和素

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生物素标记口蹄疫cDNA探针的研制与应用 被引量：1

6

作者 杨永钦 《畜牧兽医科技信息》 1997年第20期3-3,共1页

口蹄疫是害危严重的传染病,特别是在国际国内的畜产品贸易中,带毒动物和畜产品带毒的检测一直是难解决的问题。本研究是用乳兔繁殖的Asia-Ⅰ型病毒,经氯仿—异戍醇—PEG—DEAE纤维素层析的程序纯化病毒,并在纯化的病毒液中加入RNase和DN... 口蹄疫是害危严重的传染病,特别是在国际国内的畜产品贸易中,带毒动物和畜产品带毒的检测一直是难解决的问题。本研究是用乳兔繁殖的Asia-Ⅰ型病毒,经氯仿—异戍醇—PEG—DEAE纤维素层析的程序纯化病毒,并在纯化的病毒液中加入RNase和DNase水解宿主细胞核酸。用熏蒸饱和酚提取病毒核酸,同时加入氧化钒核苷复合物和RNasin,经无水乙醇和醋酸钠沉淀核酸,并用d(T)-纤维素进一步层析纯化FMDV-RNA。用提纯的RNA作为模板,oligo(dT)12—18作为引物,在反转录酶,dNTPs等成份存在的反转录体系中合成与该RNA互补的DNA,碱水解去除杂交链中的RNA。 展开更多

关键词 CDNA探针 口蹄疫 光敏生物素标记 研制与应用 DEAE纤维素 畜产品贸易 病毒核酸 氧化钒 醋酸钠 传染病

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生物素标记DNA探针测定人性别 被引量：1

7

作者 王申五 赵艳君 +4 位作者 张萍 沈岩 姜先华 阮幼林 孙念怙 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第6期433-437,共5页

白细胞或胎儿绒毛组织染色体DNA经限制酶Hae (?)消化后,用光生物素(photo-biotin)标记人Y染色体特异的3.4 kb DNA片段作探针,进行Southern印迹杂交,并以生物素结合蛋白-碱性磷酸酶体系显示生物素探针杂交信号。结果表明,0.1μg男性DNA... 白细胞或胎儿绒毛组织染色体DNA经限制酶Hae (?)消化后,用光生物素(photo-biotin)标记人Y染色体特异的3.4 kb DNA片段作探针,进行Southern印迹杂交,并以生物素结合蛋白-碱性磷酸酶体系显示生物素探针杂交信号。结果表明,0.1μg男性DNA可显示清晰的信号,而5μg女性DNA则无信号出现;平行试验证明生物素探针测定人性别的结果与32P标记探针完全一致。提示生物素探针可用于X连锁遗传病、性异常,运动员体检,法医学及异性别骨髓移植方面的性别分析。 展开更多

关键词 生物素标记 DNA探针 性别测定

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利用邻近生物素标记技术结合质谱分析鉴定核仁相关蛋白 被引量：1

8

作者 臧春燕 姚礼萍 +1 位作者 邢鸣 张军 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1750-1755,共6页

目的:在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)中,基于抗坏血酸过氧化物酶(engineered ascorbate peroxidase,APEX2)的邻近标记技术和质谱鉴定核仁相关蛋白。方法:构建稳定过表达APEX2-FBL细胞系,通过APEX2邻近标记技术获得... 目的:在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)中,基于抗坏血酸过氧化物酶(engineered ascorbate peroxidase,APEX2)的邻近标记技术和质谱鉴定核仁相关蛋白。方法:构建稳定过表达APEX2-FBL细胞系,通过APEX2邻近标记技术获得生物素标记蛋白,用链酶亲和素包裹的磁珠对生物素标记的蛋白进行富集,随后运用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定,并对数据进行生物信息学分析,筛选差异蛋白。结果:成功构建稳定高表达APEX2-FBL细胞系;Western blot结果显示,通过APEX2邻近标记技术获得大量生物素标记蛋白;质谱鉴定出837个差异蛋白,且生物学过程多与核仁相关。结论:利用邻近生物素标记技术结合质谱分析是一种可行的鉴定核仁相关蛋白的方法。 展开更多

关键词 邻近生物素标记 核仁蛋白 核仁纤维蛋白

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N-(4-羟苯基)维甲酰胺的生物素标记衍生物的合成

9

作者 时彦华 郑友广 吉民 《东南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期385-387,共3页

为了研究抗肿瘤药物N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)的作用机理和其生物学作用靶点,合成了4-HPR的生物素衍生物.采用全反式维甲酸与草酰氯反应生成酰氯,再与三乙胺成盐,然后将得到的酰基铵盐,与对氨基苯酚发生酰胺化反应,制得4-HPR.4-HPR... 为了研究抗肿瘤药物N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)的作用机理和其生物学作用靶点,合成了4-HPR的生物素衍生物.采用全反式维甲酸与草酰氯反应生成酰氯,再与三乙胺成盐,然后将得到的酰基铵盐,与对氨基苯酚发生酰胺化反应,制得4-HPR.4-HPR与3-溴-1-丙醇烷基化反应得到含羟基链化合物,4-氨基丁酸与生物素发生酰胺化反应得到羧酸化合物.最后通过酯化反应将4-HPR与生物素连接得到目标化合物.该方法具有操作简单、反应条件温和以及产率较高等特点. 展开更多

关键词 4-HPR 生物素标记物 合成

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与视皮层脑片膜片钳全细胞记录相结合的生物素标记技术 被引量：5

10

作者 涂娅莉 刘应兵 +1 位作者 阴正勤 胡志安 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期75-76,共2页

目的　在视皮层脑片膜片钳全细胞记录的同时 ,建立神经元的生物胞素标记技术。方法　利用盲法获得视皮层脑片膜片钳全细胞记录 ,在电生理记录的同时 ,Biocytin通过记录电极尖端灌注到所记录的细胞内 ,标记成功后再进行组织学染色。结果... 目的　在视皮层脑片膜片钳全细胞记录的同时 ,建立神经元的生物胞素标记技术。方法　利用盲法获得视皮层脑片膜片钳全细胞记录 ,在电生理记录的同时 ,Biocytin通过记录电极尖端灌注到所记录的细胞内 ,标记成功后再进行组织学染色。结果　能观察视皮层同一细胞的电生理和形态学特性及神经元之间的染色耦合。结论　本法操作简便 ,细胞标记成功率高 ,易于推广使用。 展开更多

关键词 视皮层脑片膜片钳全细胞记录 生物胞素标记技术 神经元 电生理学 组织学染色

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生物素标记的甾体化合物探针的合成及抗肿瘤活性 被引量：3

11

作者 刘钦洲 陈华龙 +3 位作者 刘晓兰 黄晓彤 黄燕敏 甘春芳 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1896-1903,共8页

分别以去氢表雄酮和孕烯醇酮为原料,通过保护3-位羟基,对甾核支链上的的羰基进行肟化,胺化,将D-生物素酰氯与胺反应,合成了新型生物素探针标记的甾体衍生物,采用红外,核磁和高分辨质谱对化合物的结构进行表征。采用MTT法,对化合物进行... 分别以去氢表雄酮和孕烯醇酮为原料,通过保护3-位羟基,对甾核支链上的的羰基进行肟化,胺化,将D-生物素酰氯与胺反应,合成了新型生物素探针标记的甾体衍生物,采用红外,核磁和高分辨质谱对化合物的结构进行表征。采用MTT法,对化合物进行体外抗肿瘤活性测试,结果表明化合物8、13和14对某些肿瘤细胞株有较好的抗肿瘤活性,且对正常细胞株(HEK293T)没有明显的毒害作用。 展开更多

关键词 去氢表雄酮 孕烯醇酮 生物素标记 探针 抗肿瘤活性

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生物素标记大肠杆菌STII基因探针的研制及应用

12

作者 曹岩娜 李辉 +1 位作者 马大龙 黄培堂 《中国畜禽传染病》 CSCD 1989年第1期45-47,共3页

采用平板改良法提取了含 STⅡ基因的 pUC9-STⅡ重组质粒,以 Ps酶切,琼脂糖凝胶电泳后,垂直电泳洗脱,从凝胶中回收 STⅡ基因。用生物素-11-dUTP 通过缺口平移法制得生物素标记的STⅡ基因探针。点斑法杂交结果表明:该探针只与含 STⅡ基因... 采用平板改良法提取了含 STⅡ基因的 pUC9-STⅡ重组质粒,以 Ps酶切,琼脂糖凝胶电泳后,垂直电泳洗脱,从凝胶中回收 STⅡ基因。用生物素-11-dUTP 通过缺口平移法制得生物素标记的STⅡ基因探针。点斑法杂交结果表明:该探针只与含 STⅡ基因的标准对照菌株质粒杂交阳性,与 STⅡ基因没有交叉,探针特异性好。通过对118株待检菌质粒杂交鉴定,发现其中45%的菌株带有 STⅡ基因。由于生物素标记探针易于制备,便于操作,可长期保存,因而适于一般实验室应用。 展开更多

关键词 生物素标记 大肠杆菌 STII基因探针

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用光生物素标记DNA探针鉴定军团菌种 被引量：1

13

作者 唐英春 张扣兴 +2 位作者 龙伟潮 张天托 廖适生 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 1993年第3期238-239,共2页

DNA探针过去多用同位索标记．但半衰期短。价格昂贵。且防护和操作困难，故应用受限。近年来非同位素标记探针大量应用．结果十分理想。作者用光生物索标记DNA探针的方法，对本室保存的标准军团菌种进行了鉴定。对从环境中分离培养到的... DNA探针过去多用同位索标记．但半衰期短。价格昂贵。且防护和操作困难，故应用受限。近年来非同位素标记探针大量应用．结果十分理想。作者用光生物索标记DNA探针的方法，对本室保存的标准军团菌种进行了鉴定。对从环境中分离培养到的形态疑似军团菌的菌落亦进行了鉴定。 展开更多

关键词 军团菌 DNA探针 鉴定 同位素标记 菌落 生物素标记 操作困难 菌种 形态 半衰期

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光生物素标记探针检测乙型肝炎病毒DNA

14

作者 陆珍凤 周晓军 周金宝 《医学研究生学报》 CAS 1991年第3期243-244,共2页

近年来,生物素的应用越来越广泛,它不但用于病理技术,而且在临床检验和生物学领域内的用途也日益广泛。目前,进行的斑点杂交法,大多用同位素标记探针,由于同位素对人体有损伤,故生物素的利用日趋兴旺,而光生物素标记探针,既简便、省时,... 近年来,生物素的应用越来越广泛,它不但用于病理技术,而且在临床检验和生物学领域内的用途也日益广泛。目前,进行的斑点杂交法,大多用同位素标记探针,由于同位素对人体有损伤,故生物素的利用日趋兴旺,而光生物素标记探针,既简便、省时,又快速、安全,是检验系统检测液状物质内核酸的最佳选择。有关这方面的文献,国内报道甚少。本文应用光生物素标记探针检测血清中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA,获得了满意的结果。现介绍如下:(一)材料1.HBV DNA:带有 HBV:DNA 展开更多

关键词 生物素标记探针 乙型肝炎病毒 DNA 斑点杂交 病理技术 同位素标记 阴性对照 预杂交 特异性 甲酞胺

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动物蓝舌病病毒非放射性基因探针研究——全核酸生物素化学标记光生物素标记初报

15

作者 彭克高 李志华 李根 《云南畜牧兽医》 1989年第4期37-38,共2页

基因探针是一种重要的分子生物学技术,目前已应用于病毒基因的检测,由于具有高度特异性及敏感性,用于检测感染材料中的微量病毒更为合适,但因传统的基因探针是用放射性同位素标记,需要复杂的仪器设备及技术,加之对人体危害,受半衰期限制... 基因探针是一种重要的分子生物学技术,目前已应用于病毒基因的检测,由于具有高度特异性及敏感性,用于检测感染材料中的微量病毒更为合适,但因传统的基因探针是用放射性同位素标记,需要复杂的仪器设备及技术,加之对人体危害,受半衰期限制,难于推广。生物素标记探针的问世。 展开更多

关键词 基因探针 化学标记 病毒基因 生物素标记 蓝舌病病毒 高度特异性 杂交反应 人体危害 碱性磷酸酶 型特异性

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使用生物素标记cDNA探针对RP和PPR进行鉴别诊断

16

作者 K.D.Pandey M.D.Baron +1 位作者 T.Barrett 李春华 《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第12期8-9,共2页

在东南亚的大反刍动物中,牛瘟(RP)仍然是一个主要问题。1986年以来在印度一些州 RP 的发病记录一直呈上升趋势,它也是引起牛死亡的第三大地方病。山羊与绵羊的 RP 发病率也不断增加。而这些小反刍动物通常是牛的传染源。1980年在印度 Ta... 在东南亚的大反刍动物中,牛瘟(RP)仍然是一个主要问题。1986年以来在印度一些州 RP 的发病记录一直呈上升趋势,它也是引起牛死亡的第三大地方病。山羊与绵羊的 RP 发病率也不断增加。而这些小反刍动物通常是牛的传染源。1980年在印度 Tamilnadu 地区,首次报道在绵羊中发生一种类似 RP 的病,"小反刍动物兽疫" (PP8)。该病的发病区似乎限制在西非和中东。PPR 引起坏死性口炎及牙龈和舌背面损害,鼻眼有卡他性的分泌物和腹泻,可导致死亡。 展开更多

关键词 坏死性口炎 CDNA探针 生物素标记 鉴别诊断 RP PPR 卡他性 发病区 临床样品 分子诊断技术

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用光生物素标记的核酸探针对犬细小病毒病原的监测

17

作者 庞淑英 段印祥 《天津畜牧兽医》 1993年第1期20-20,共1页

关键词 光生物素标记 核酸探针 犬 细小病毒

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桥式生物素-亲合素标记提高藻胆蛋白免疫荧光法灵敏度的研究 被引量：2

18

作者 吴萍 顾铭 +1 位作者 戚艺华 欧阳藩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期321-323,共3页

目的提高藻胆蛋白免疫荧光法检测的灵敏度。方法在藻胆蛋白免疫荧光法(PBPIFA)的检测流程中，引入桥式亲合素－生物素系统(BRAB)，称为BRAB-PBPIFA,用ELISA法与藻胆蛋白免疫荧光直接法和桥式BAS法，对定值的标准质控抗原HBsAg样品及500... 目的提高藻胆蛋白免疫荧光法检测的灵敏度。方法在藻胆蛋白免疫荧光法(PBPIFA)的检测流程中，引入桥式亲合素－生物素系统(BRAB)，称为BRAB-PBPIFA,用ELISA法与藻胆蛋白免疫荧光直接法和桥式BAS法，对定值的标准质控抗原HBsAg样品及500份血清样品同时进行测定。结果BRAB应用于藻胆蛋白免疫荧光法中，能显著提高该法对低抗原含量样品的检出，对弱阳性血清的检出率可提高1.5倍。无蛋白封闭试剂Tween 20在BRAB-PBPIFA中具有较好的封闭效果。结论BRAB标记可提高藻胆蛋白免疫荧光法检测的灵敏度。 展开更多

关键词 桥式亲合素-生物素标记技术 荧光标记 藻胆蛋白免疫荧光 灵敏度

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荧光标记生物素法评价大鼠肠黏膜屏障损伤

19

作者 张强 李秋荣 +5 位作者 王晨阳 顾立立 曲林林 李宁 刘晓祥 黎介寿 《肠外与肠内营养》 CAS 北大核心 2010年第3期153-155,159,共4页

目的:利用荧光标记生物素检测大鼠缺血-再灌注肠黏膜屏障损伤。方法:将20只大鼠随机分为对照(假手术)组、缺血-再灌注后1、3和5h组,共四组,每组5只。利用动脉夹夹闭肠系膜上动脉1h后放开,建立大鼠缺血-再灌注模型。观察缺血-再灌注损伤... 目的:利用荧光标记生物素检测大鼠缺血-再灌注肠黏膜屏障损伤。方法:将20只大鼠随机分为对照(假手术)组、缺血-再灌注后1、3和5h组,共四组,每组5只。利用动脉夹夹闭肠系膜上动脉1h后放开,建立大鼠缺血-再灌注模型。观察缺血-再灌注损伤后肠组织形态学改变,并用荧光标记生物素作为探针,应用激光共聚焦显微镜,检测大鼠缺血-再灌注肠黏膜屏障损伤。结果:大鼠缺血-再灌注损伤后,肠黏膜明显受损,病理表现为肠黏膜水肿和炎性细胞浸润。损伤程度随缺血后再灌注时间的延长而增加。激光共聚焦显微镜观察发现,荧光标记生物素穿透缺血-再灌注肠上皮进入黏膜下层,表明肠上皮屏障受到破坏。结论:缺血-再灌注可损伤大鼠肠屏障功能。荧光标记生物素法是一种适合评价实验动物肠黏膜屏障损伤的方法。 展开更多

关键词 缺血-再灌注 荧光标记生物素 肠黏膜屏障损伤

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H5亚型禽流感病毒单抗——生物素捕获ELISA的建立 被引量：16

20

作者 王传彬 田新生 +5 位作者 曹振 遇秀玲 孙明 陈西钊 王宏伟 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期204-207,共4页

目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生... 目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系。用该方法检测H1—H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性。结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1∶5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为025个血凝单位。该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应。结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗—生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础。 展开更多

关键词 单抗 ELISA 亲和素 H5亚型禽流感病毒 血凝素 单克隆抗体 AIV H9亚型 分离株 生物素标记

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