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柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1 E基因的表达及其产物的生物活性分析 被引量:2
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作者 翟军军 窦永喜 +5 位作者 林青 于三科 景志忠 闫鸿斌 田广孚 才学鹏 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第8期56-60,共5页
【目的】探讨原核表达的柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E蛋白的生物学活性。【方法】将含有3-1E基因的pGEX-3-1E重组质粒转化大肠杆菌BL21,进行表达并对表达条件进行优化,表达产物纯化后进行Western-blot-ting分析。【结果】表达的3-1E重组蛋... 【目的】探讨原核表达的柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E蛋白的生物学活性。【方法】将含有3-1E基因的pGEX-3-1E重组质粒转化大肠杆菌BL21,进行表达并对表达条件进行优化,表达产物纯化后进行Western-blot-ting分析。【结果】表达的3-1E重组蛋白相对分子质量为44.7 ku,与推导结果一致。在28℃、IPTG诱导浓度为0.5mmol/L的条件下诱导6 h,可溶性3-1E重组蛋白表达量最高。Western-blotting结果表明,3-1E重组蛋白可与兔抗鸡E.tenellaYL阳性血清发生反应。【结论】3-1E重组蛋白表达成功,表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 3-1E基因 柔嫩艾美耳球虫 基因表达 生物活性分析
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猪α干扰素在BHK-21细胞中的表达与生物活性分析 被引量:2
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作者 肖红冉 王大伟 +4 位作者 贺志锐 王鹏雁 倪伟 胡圣伟 陈创夫 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第2期182-186,共5页
为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-tim... 为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性。结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-αmRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍。MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础。 展开更多
关键词 猪Α干扰素 BHK-21细胞 生物活性分析
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抗人DR5单克隆抗体的制备及其生物活性分析 被引量:1
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作者 刘英杰 马远方 +3 位作者 张军 赵粤萍 白慧玲 李淑莲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期355-356,共2页
关键词 抗人DR5单克隆抗体 生物活性分析 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 apoptosis RECEPTOR TRAIL 制备 LIGAND
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鸡源IL-21基因的密码子优化、表达及生物活性分析初探
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作者 朱爱臣 朱凯晴 +3 位作者 孙鹏 张建楼 李妍 霍书英 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期89-95,共7页
本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/... 本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/MH,根据人偏爱密码子对鸡IL-21基因进行密码子优化,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-opt/MH。测序正确后转染HEK293T细胞进行表达,经His标签纯化后,通过脾脏淋巴细胞增殖实验鉴定纯化后的IL-21蛋白生物活性。结果显示,扩增的鸡IL-21序列与Genbank中的IL-21序列相对比有2个碱基发生突变(141C→141T,312C→312T),但不影响氨基酸序列;生物信息学分析表明,鸡IL-21基因含有信号肽序列可介导其分泌表达,同时含有1个潜在的N-糖基化位点;Western blot在培养基和细胞内均检测到鸡IL-21蛋白的表达;密码子优化后IL-21表达水平与野生型相比显著升高(P<0.0001);MTT法检测发现,纯化后的IL-21具有增强淋巴细胞增殖的功能。综上所述,本试验成功构建了鸡IL-21的真核表达载体,通过密码子优化提高了IL-21在真核细胞中的表达且表达的蛋白具有良好的生物活性,为进一步探索IL-21蛋白功能奠定一定的基础。 展开更多
关键词 IL-21基因 真核表达 密码子优化 生物活性分析
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基于整体观的中药药效物质基础的生物活性筛选/化学在线分析研究新进展 被引量:41
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作者 吴茜 毕志明 +1 位作者 李萍 齐炼文 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期289-293,共5页
中药及其复方发挥疗效具有整体性、多靶点和多成分协同作用的特点。中药药效物质基础的阐明是中药质量控制的基础,是诠释中药作用奥秘的关键。生物活性筛选/化学在线分析技术是由生命科学与色谱、质谱分离鉴定技术交叉形成的一种综合技... 中药及其复方发挥疗效具有整体性、多靶点和多成分协同作用的特点。中药药效物质基础的阐明是中药质量控制的基础,是诠释中药作用奥秘的关键。生物活性筛选/化学在线分析技术是由生命科学与色谱、质谱分离鉴定技术交叉形成的一种综合技术,在国内外取得了瞩目的进展,当前已逐渐发展成为中药活性成分筛选和药效物质基础研究的重要手段之一。本文对近年来生物活性筛选/化学在线分析技术的发展做了简要综述,主要介绍了生物色谱法、脂质体平衡透析/液相色谱-质谱联用方法、细胞固相萃取/液相色谱-质谱联用法和微透析生物取样/液相色谱-质谱联用法的原理及其在中药活性成分筛选和药效物质基础研究中的应用。 展开更多
关键词 中药药效物质基础 生物活性筛选/化学在线分析 生物色谱 脂质体平衡透析 细胞固相萃取 微透析
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内皮细胞抑制素在毕节酵母中的表达与活性分析 被引量:2
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作者 吴江雪 符武钊 +2 位作者 张添元 罗进贤 吴群悦 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期83-86,共4页
采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K_EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K_EDN)。SDS_P... 采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K_EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K_EDN)。SDS_PAGE分析结果显示:人内皮细胞抑制素在重组酵母GS115(pPIC9K_EDN)中获得高效表达。用30L发酵罐构对建的工程菌进行高密度发酵,经甲醇诱导48h,生物量达到250OD,分泌量为150mg L,发酵液经SPStreamline,SPSepharoseFF阳离子交换柱和SepharoseHeparinHiTrap柱纯化,产物纯度达到98%。纯化产物具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。 展开更多
关键词 人内皮细胞抑制素 基因表达 毕节酵母 高密度发酵 纯化 生物活性分析 肿瘤
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重组红火蚁毒素致敏原Sol i1的表达及活性分析 被引量:1
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作者 韩雪清 林祥梅 +6 位作者 张永国 陈岩 冶贵生 杨伟东 夏巧钰 杨泽晓 王建峰 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期655-661,共7页
目的为研究红火蚁Solenopsis invicta Buren毒素蛋白致病分子机理,制备用于红火蚁蜇伤防治的制剂。方法本研究采用反转录PCR(RT-PCR)与套式PCR(nPCR)扩增出红火蚁体内毒素蛋白Sol i1全基因及其活性基因片段Sol i1a,进行测序与序列分析,... 目的为研究红火蚁Solenopsis invicta Buren毒素蛋白致病分子机理,制备用于红火蚁蜇伤防治的制剂。方法本研究采用反转录PCR(RT-PCR)与套式PCR(nPCR)扩增出红火蚁体内毒素蛋白Sol i1全基因及其活性基因片段Sol i1a,进行测序与序列分析,构建重组质粒Sol i1-pET43.1a和Sol i1a-pET43.1a,经PCR、酶切和测序鉴定后转化BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot检测后,用亲合层析法纯化,并将纯化的重组蛋白通过动物试验进行了致敏活性分析以及过敏体质治疗研究。结果本研究克隆的Sol i1基因序列与GenBank中红火蚁序列同源性为99 %,原核表达预期大小的2种重组蛋白能与组氨酸单抗发生特异性反应,且具有较高的致敏活性和良好的免疫治疗效果。结论原核表达的2种重组蛋白Sol i1和Sol i1a具有良好的生物活性,为红火蚁蜇伤的致病机理和防治研究奠定了基础。 展开更多
关键词 红火蚁 基因 致敏原蛋白 表达 生物活性分析
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鱿鱼(Squid)肝脏蛋白酶解物中ACE活性抑制肽的分离纯化及活性分析 被引量:5
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作者 梁佳 谢超 +3 位作者 林琳 黄菊 王婷 俞群娣 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1175-1179,共5页
为提高鱿鱼加工下脚料的利用率,以秘鲁鱿鱼肝脏为研究对象,采用生物酶解技术和凝胶蛋白分离技术等对其进行研究。研究结果表明:鱿鱼肝脏蛋白酶解液经过超滤处理后(分子质量为20k Da),用Sephadex G-100初步分离,得到五个组分,对分离的组... 为提高鱿鱼加工下脚料的利用率,以秘鲁鱿鱼肝脏为研究对象,采用生物酶解技术和凝胶蛋白分离技术等对其进行研究。研究结果表明:鱿鱼肝脏蛋白酶解液经过超滤处理后(分子质量为20k Da),用Sephadex G-100初步分离,得到五个组分,对分离的组分进行研究,结果表明降血压活性能力最强的是组分二,测定其半抑制浓度(IC50)为1.8mg/m L。对组分二进行活性条件分析,结构表明其ACE抑制活性在温度0—100°C、p H 1—12之间基本没有变化。最后用DEAE阴离子交换柱和Sephadex LH-20对组分二继续分离纯化,得到组分六和组分七,测定其半抑制浓度(IC50)分别达到1.52 mg/m L和2.16 mg/m L。本研究可为利用鱿鱼加工下脚料开发降血压活性肽产品提供理论基础。 展开更多
关键词 鱿鱼肝脏 ACE活性抑制肽 分离纯化 生物活性分析
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