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IL-1β和IL-6对椎间盘髓核细胞NGF表达的影响 被引量:3
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作者 王刚 韩敦富 +3 位作者 施彦璋 陈志维 李逸群 刘尚礼 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1265-1269,共5页
目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6对体外培养的椎间盘髓核细胞神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:分离培养人腰椎间盘髓核细胞,经过7d的预培养后,实验组分别加IL-1β(10μg/L,50μg/L)和IL-6(10μg/L,50μg/L)进行刺激,对照组加0.... 目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6对体外培养的椎间盘髓核细胞神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:分离培养人腰椎间盘髓核细胞,经过7d的预培养后,实验组分别加IL-1β(10μg/L,50μg/L)和IL-6(10μg/L,50μg/L)进行刺激,对照组加0.3%FBS,48h后应用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blotting检测NGF的表达。结果:培养的椎间盘髓核细胞经鉴定为类软骨细胞。对照组髓核细胞很少表现NGF免疫活性,IL-1β和IL-6刺激组明显上调了髓核细胞NGF mRNA及蛋白质的表达,在相同的浓度下IL-6的上调作用更明显。结论:正常情况下NGF在椎间盘髓核细胞呈低表达状态,IL-1β和IL-6能促进髓核细胞NGF的表达,相同浓度下IL-6刺激髓核细胞分泌NGF的作用更强。 展开更多
关键词 细胞介素1 细胞介素6 神经生长因子 细胞
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Nrf2过表达与敲减Hep1-6稳转细胞株的建立 被引量:1
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作者 周飞飞 杨南飞 +2 位作者 余文 张冬梅 丰秀静 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1251-1255,共5页
核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一个重要靶点分子。为了从体外研究小分子通过靶向Nrf2改善NAFLD的分子机制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至p Lenti6/V5-D-TOPO空载体得到重组载体p Lenti6/V5-Nrf2,通过测序、... 核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一个重要靶点分子。为了从体外研究小分子通过靶向Nrf2改善NAFLD的分子机制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至p Lenti6/V5-D-TOPO空载体得到重组载体p Lenti6/V5-Nrf2,通过测序、酶切鉴定正确后,扩繁质粒,制备慢病毒并将其感染Hep1-6肝癌细胞,用稻瘟醇胚素筛选、鉴定获得稳定表达Nrf2的细胞株。同时,用Nrf2干扰质粒构建慢病毒感染Hep1-6肝癌细胞,通过嘌呤霉素筛选、鉴定Nrf2敲减的细胞株。Q-PCR检测结果显示,过表达稳转株(p Lenti6/V5-Nrf2)中Nrf2基因的表达量为对照组(p Lenti6/V5-Lac Z)的4倍,敲减稳转株中Nrf2基因的表达量大幅度降低。Western blotting显示过表达稳转株的Nrf2表达量明显高于对照组,敲减稳转株的Nrf2表达量明显低于对照稳转株,此结果与Q-PCR结果一致。所克隆的Nrf2基因和敲减基因在Hep1-6小鼠肝癌细胞中得到了正确转录和翻译,稳转细胞株构建成功。 展开更多
关键词 因子NF-E2相关因子2(nrf2) Hep1-6细胞 nrf2过表达稳转株 nrf2敲减稳转株 Westernblotting 定量PCR
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NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究
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作者 魏强 魏霞飞 +3 位作者 甘春杨 张文露 黄爱龙 胡接力 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期289-295,共7页
目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海... 目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000)。NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50%(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92%(t=31.59,P=0.001)。NR6A1N(NR6A1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P>0.05)。NR6A1C(NR6A1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P>0.05)。结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子II的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制。 展开更多
关键词 乙肝病毒 受体 生殖细胞因子(nr6a1) 启动子 增强子
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牛磺酸缓解镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1途径 被引量:4
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作者 柳梦琪 张广路 +2 位作者 郭长权 杨婷宇 米玉玲 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期619-628,共10页
为探索牛磺酸对镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的缓解作用,采用18日龄鸡胚睾丸细胞培养模型,通过形态观察、细胞活力检测、生化指标检测、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入、原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP ... 为探索牛磺酸对镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的缓解作用,采用18日龄鸡胚睾丸细胞培养模型,通过形态观察、细胞活力检测、生化指标检测、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入、原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)、蛋白质印迹法、荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)和免疫荧光染色等方法,从细胞增殖、内质网应激、线粒体凋亡、核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor-erythroid 2 related factor-2/hemeoxygenase-1, Nrf2/HO-1)信号通路等方面研究其作用机制。结果显示,镉导致鸡胚精原细胞发生了氧化损伤。与对照组相比,镉处理组精原细胞出现了细胞核固缩、空泡化和染色质周缘化等变化,且镉处理后的细胞活性和精原细胞数目显著降低,过氧化氢、丙二醛和活性氧水平显著升高,超氧化物歧化酶活性显著降低,细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞显著增多,内质网应激相关基因(GRP78和XBP-1)和凋亡相关基因(Cyt C、p53和caspase 9)mRNA表达水平显著上升,Nrf2、p-Nrf2蛋白的表达和HO-1mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。然而,牛磺酸与镉联合处理后,镉引起的氧化损伤得到明显缓解,鸡胚精原细胞数目和睾丸细胞活性回升,抗氧化水平和内质网应激得到改善,凋亡细胞显著减少,Nrf2蛋白表达和细胞增殖能力趋于正常。以上结果说明,牛磺酸一方面通过恢复氧化系统与抗氧化系统平衡,另一方面通过抑制睾丸细胞凋亡和恢复睾丸细胞增殖,缓解镉引起的生殖毒性。 展开更多
关键词 牛磺酸 氧化损伤 转录因子E2相关因子2 血红素加氧酶-1 生殖细胞
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二十碳五烯酸对脂多糖诱导的人单个核细胞NF-κB活性及细胞因子分泌的影响 被引量:1
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作者 包永琴 马景学 +2 位作者 叶存喜 杜颖华 吕兰存 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第8期740-744,共5页
目的探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人单个核细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性、VEGF、IL-1α和IL-6分泌的影响。方法分离人外周血单个核细胞,将其分为空... 目的探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人单个核细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性、VEGF、IL-1α和IL-6分泌的影响。方法分离人外周血单个核细胞,将其分为空白对照组、LPS组、0.030g.L-1EPA处理组、0.050g.L-1EPA处理组。LPS组仅加入LPS进行培养(LPS终浓度为10mg.L-1),EPA处理组先加入2种浓度的EPA(EPA终浓度分别为0.030g.L-1和0.050g.L-1)培养1h,再加入LPS进行培养。LPS刺激6h、12h、24h后,收集各组上清液,ELISA检测上清液中VEGF、IL-1α和IL-6的分泌量;LPS刺激24h后的沉淀细胞用Western blot法检测人单个核细胞NF-κB活性。结果 LPS刺激6h后,空白对照组、LPS组、0.030g.L-1EPA处理组、0.050g.L-1EPA处理组VEGF含量(ng.L-1)分别为:22.57±8.86、66.49±4.21、46.18±2.35、45.49±6.61;12h后分别为:18.05±3.18、107.30±5.70、61.29±2.86、54.34±7.41;24h后分别为:20.49±5.92、157.63±5.95、59.54±4.20、53.13±11.42。LPS刺激6h后IL-1α含量(ng.L-1)分别为:15.63±2.98、75.41±4.12、53.60±4.71、31.03±8.49;12h后分别为:40.37±4.51、408.00±47.93、142.80±14.65、99.17±5.86;24h后分别为:63.37±1.99、929.73±27.97、322.03±101.80、161.23±14.59。LPS刺激6h后IL-6含量(ng.L-1)分别为:34.94±2.71、117.60±7.89、82.25±14.56、60.66±2.12;12h后分别为:51.00±6.65、183.60±8.64、127.37±11.48、71.61±8.16;24h后分别为:68.04±21.53、297.50±25.72、132.37±20.87、102.45±21.46。与空白对照组相比,LPS刺激后人单个核细胞NF-κB p65表达和VEGF、IL-1α、IL-6分泌明显升高。EPA抑制LPS诱导的人单个核细胞NF-κB p65活性;下调其VEGF、IL-1α和IL-6分泌,与LPS组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 LPS激活人单个核细胞NF-κB,促进其VEGF及细胞因子表达。EPA抑制LPS诱导的人单个核细胞NF-κB活性,下调其VEGF及细胞因子表达。这为EPA应用于各种新生血管性疾病和炎症性疾病的防治提供了理论依据。 展开更多
关键词 二十碳五烯酸 人单个细胞 转录因子KB 血管内皮生长因子 细胞介素-1a 细胞介素-6
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二十碳五烯酸对大鼠角膜新生血管核转录因子κB及细胞因子表达的抑制作用
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作者 包永琴 马景学 +3 位作者 叶存喜 吕兰存 董白霞 翟英 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期707-712,共6页
背景角膜新生血管(CNV)是炎症性角膜病变导致视力下降和角膜移植后发生排斥反应的重要原因,其发生机制和治疗一直是国内外角膜病研究的热点。目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对碱烧伤大鼠CNV核转录因子KB(NF—KB)、白细胞介素1α(IL... 背景角膜新生血管(CNV)是炎症性角膜病变导致视力下降和角膜移植后发生排斥反应的重要原因,其发生机制和治疗一直是国内外角膜病研究的热点。目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对碱烧伤大鼠CNV核转录因子KB(NF—KB)、白细胞介素1α(IL一1αt)、IL一6表达的影响及作用机制。方法用浸有1mol/LNaOH的3mm圆形滤纸贴附于72只SD大鼠的右眼角膜中央30s制作角膜碱烧伤模型,用随机数字表法将大鼠随机分为3个组,另6只匹配的正常大鼠作为正常对照组。碱烧伤0.02mgEPA治疗组和碱烧伤0.03mgEPA治疗组大鼠分别于碱烧伤后即刻结膜下注射0.04ml剂量为0.02mg或0.03mgEPA,碱烧伤模型组结膜下注射0.04ml生理盐水,正常对照组大鼠未行结膜下注射。大鼠干预后每天裂隙灯下观察CNV的生长面积和角膜水肿。分别于造模后24h,4、7、14d过量麻醉处死动物后制备角膜标本,采用苏木精一伊红染色法检测各组大鼠角膜的组织病理学变化,免疫组织化学方法检测各组大鼠角膜组织中CD34的表达以计数血管内皮细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)及蛋白印迹法分别检测各组大鼠角膜组织中IL-1α-mRNA和IL.6mRNA的表达及NF—KBp65的蛋白表达。结果裂隙灯下见造模后2~4d,CNV缓慢生长,角膜水肿,上皮缺损;造模后7~10d,CNV面积增加,角膜水肿减轻;造模后14d,CNV面积最大,血管变细。苏木精一伊红染色显示,碱烧伤后7d碱烧伤组角膜上皮部分缺损,基质层水肿明显,可见较多炎性细胞及大量CNV;碱烧伤0.03mgEPA治疗组与碱烧伤0.02mgEPA治疗组均可见角膜上皮修复,基质层水肿减轻,少量炎性细胞,未见CNV。碱烧伤后7d和14d,碱烧伤0.02mgEPA治疗组CNV相对面积分别为(15.80±6.43)%、(11.06±2.14)%,碱烧伤0.03mgEPA治疗组为(16.10±7.41)%、(11.06±2.51)%,均明显小于碱烧伤组的(84.74±7.77)%、(89.63±7.50)%,差异均有统计学意义(P〈0.05)。碱烧伤后7d,碱烧伤组CD34在CNV的内皮细胞中呈强阳性表达,而在碱烧伤0.02mgEPA治疗组、0.03mgEPA治疗组角膜中未见表达。RT—PCR检测结果表明,碱烧伤后4d,碱烧伤0.02mgEPA治疗组、0.03mgEPA治疗组IL一1α、IL一6mRNA在角膜组织中的表达量明显低于碱烧伤组,蛋白印迹检测证实NF—KBp65蛋白在角膜组织中的表达低于碱烧伤组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论EPA能够抑制NF—KB、IL一1α、IL一6的表达,从而抑制碱烧伤后CNV的生长。 展开更多
关键词 角膜新生血管 二十碳五烯酸 细胞介素一1 细胞介素一6 转录因子KB
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热射病小鼠大脑皮层组织中炎症细胞因子水平及P38MAPK/P65NF-κB信号通路变化 被引量:7
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作者 郭佳 宋思奇 王克宇 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期566-571,I0004,共7页
目的:探讨热射病小鼠大脑皮层组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)/P65核转录因子κB (P65NF-κB)信号通路的变化,并阐明其机制。方法:将60只小鼠根据随机... 目的:探讨热射病小鼠大脑皮层组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)/P65核转录因子κB (P65NF-κB)信号通路的变化,并阐明其机制。方法:将60只小鼠根据随机数字法分为对照组及热射病1、6和24h组(热射病模型小鼠出舱后1、6和24h),每组15只。观察各组小鼠体质量丢失和肛温,HE染色检测各组小鼠大脑皮层组织的形态表现,ELISA法测定各组小鼠大脑皮层组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平,Western blotting法检测各组小鼠大脑皮层组织中P38MAPK、P65NF-κB、p-P38MAPK和p-P65NF-κB蛋白表达水平。结果:与对照组比较,热射病组小鼠体质量丢失明显增加(P<0.05),热射病1和6h组小鼠肛温明显降低(P<0.05)。HE染色,对照组小鼠大脑皮层脑组织形态表现正常;热射病1h组小鼠大量脑细胞核固缩、核染色深,血管被压缩变形、管壁外大量水肿;热射病6h组小鼠核固缩细胞数量减少,血管外水肿减轻;热射病24h组小鼠核固缩脑细胞和血管外水肿少见。与对照组比较,热射病1和6h组小鼠大脑皮层组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和p-P38MAPK、p-P65NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05);热射病6h组小鼠大脑皮层组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和p-P38MAPK、p-P65NF-κB蛋白表达水平明显低于热射病1h组(P<0.05)。结论:热射病小鼠大脑皮层组织中炎症细胞因子水平升高,P38MAPK/P65NF-κB信号通路激活,这种中枢神经系统炎症反应可能与其信号通路激活有关。 展开更多
关键词 热射病 细胞介素1Β 细胞介素6 肿瘤坏死因子α 丝裂原活化蛋白激酶 转录因子ΚB
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肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1调控核因子κB信号通路在IDH野生型胶质瘤中的作用机制 被引量:3
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作者 彭一鹏 周晓飞 +5 位作者 王剑 藏春光 张悦盼 辛雪 朱春丽 付朋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第16期2002-2008,共7页
目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1(TNIP1)调控核因子κB(NF-κB)信号通路在IDH野生型胶质瘤中的作用机制。方法使用CGGA和TCGA数据库确定TNIP1在IDH野生型胶质瘤中的表达和预后价值。用特定的siRNA敲低了N33细胞中的TNIP1... 目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1(TNIP1)调控核因子κB(NF-κB)信号通路在IDH野生型胶质瘤中的作用机制。方法使用CGGA和TCGA数据库确定TNIP1在IDH野生型胶质瘤中的表达和预后价值。用特定的siRNA敲低了N33细胞中的TNIP1表达,并分析细胞的增殖和迁移能力。通过免疫沉淀分析TNIP1与TNF受体相关因子6(TRAF6)相互作用及其对TRAF6的泛素化影响。分别将空载体、oe-TNIP1或si-TNIP1转染的U87细胞注射到裸鼠的大脑中,并通过BLI方法监测肿瘤生长情况。结果TNIP1表达与IDH野生型神经胶质瘤的较高恶性等级和较差的预后有关,但与IDH突变型神经胶质瘤无关。TNIP1敲低显著减弱了N33细胞的增殖和迁移(P<0.05)。TNIP1与TRAF6相互作用,并且可以诱导TRAF6蛋白的去泛素化以激活NF-κB。与空载体的异种移植物相比,oe-TNIP1的异种移植物显示出加速肿瘤进展,而si-TNIP1的异种移植物则相反。结论TNIP1可以诱导TRAF6蛋白的去泛素化以激活NF-κB,进而促进IDH野生型胶质瘤的恶性进展。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1 因子ΚB TNF受体相关因子6 胶质瘤
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山羊NR6A1基因多态性与产羔性能的关联分析
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作者 王唯 江炎庭 +2 位作者 欧阳依娜 储明星 洪琼花 《中国草食动物科学》 CAS 2021年第6期29-32,共4页
旨在分析生殖细胞核因子(NR6A1,GCNF)的多态性与云上黑山羊产羔性能的关联性。利用Sequenom MassARRAY■SNP技术对NR6A1的3个候选位点g.95109274G>A、g.95109385G>A、g.95109400G>T进行分型,探索其在云上黑山羊(n=544)、济宁... 旨在分析生殖细胞核因子(NR6A1,GCNF)的多态性与云上黑山羊产羔性能的关联性。利用Sequenom MassARRAY■SNP技术对NR6A1的3个候选位点g.95109274G>A、g.95109385G>A、g.95109400G>T进行分型,探索其在云上黑山羊(n=544)、济宁青山羊(n=133)和辽宁绒山羊(n=91)3个群体中的遗传学特征,并分析其与云上黑山羊产羔性能(包括产羔数、初生窝重和断奶窝重)的关联性。结果表明,g.95109274G>A、g.95109385G>A两个候选位点在不同繁殖力品种(济宁青山羊和辽宁绒山羊)中的基因型分布无显著差异(P>0.05);g.95109400G>T位点在不同繁殖力品种(济宁青山羊和辽宁绒山羊)中的基因型分布呈现显著差异(P<0.05)。云上黑山羊中的关联分析表明,NR6A1基因这3个位点对产羔数、初生窝重以及断奶窝重无显著影响(P>0.05)。以上提示,NR6A1基因这3个位点不能作为云上黑山羊产羔性能选择的潜在分子标记。 展开更多
关键词 山羊 产羔数 nr6a1基因 生殖细胞因子
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水杨酸盐毒性与大鼠耳蜗核炎症因子表达 被引量:9
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作者 胡守森 梅玲 +3 位作者 陈建勇 吕静荣 黄治物 吴皓 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期136-140,共5页
目的本研究采用对大鼠急性及慢性水杨酸盐腹腔注射建立耳鸣动物模型,通过检测大鼠耳蜗核中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β),白介素6(IL-6)以及NMDA受体亚基(NR2B)m RNA及其蛋白的表达,了解慢性水杨酸盐诱导的耳鸣动物耳蜗核... 目的本研究采用对大鼠急性及慢性水杨酸盐腹腔注射建立耳鸣动物模型,通过检测大鼠耳蜗核中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β),白介素6(IL-6)以及NMDA受体亚基(NR2B)m RNA及其蛋白的表达,了解慢性水杨酸盐诱导的耳鸣动物耳蜗核中是否出现炎症因子表达的改变,以探讨炎症因子在耳鸣中的作用。方法实验动物随机分为4组,按给药时间分别为:正常对照组、急性注射2小时组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组。各组大鼠断头处死后迅速分离出耳蜗核;采用SYBR Green实时荧光定量PCR(real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)及Western blot(蛋白质印迹)方法,检测各组大鼠耳蜗核TNF-α,IL-1β,IL-6及NR2B基因m RNA及其蛋白的表达,观察各组间的差异。结果(1)在慢性注射14天组,TNF-α和NR2B m RNA及其蛋白表达水平较正常对照组、急性注射2小时组、停药后恢复14天组高,且差异有统计学意义(p<0.05);急性注射2小时组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组IL-1βm RNA水平较正常组高,慢性注射14天组、停药后恢复14天组IL-1β蛋白水平较正常组高,差异有统计学意义(p<0.05);IL-6 m RNA及其蛋白表达水平在四组之间无明显差异;(2)TNF-α和NR2B m RNA表达具有明显的正相关(p<0.01);IL-1β和NR2B m RNA表达无明显正相关(p>0.05)。结论(1)长期注射水杨酸盐可能通过上调耳蜗核中TNF-α,IL-1β和NR2B基因表达导致大鼠耳鸣;(2)TNF-α和NR2B可能在水杨酸盐诱发耳鸣的过程中起协同作用。 展开更多
关键词 水杨酸盐 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 白介素-1β(IL-1β) 白介素6(IL-6) NMDA受体亚基(nr2B) 耳蜗
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MiR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层患者外周血清和主动脉组织中的表达及其临床意义 被引量:10
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作者 李杰 周庆 +2 位作者 何孝军 程永庆 王东进 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1136-1142,共7页
目的:研究miR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层(Stanford type A aortic dissection,TAAD)患者外周血清及主动脉壁组织中的表达,探讨miR-146b在TAAD发病中的意义及机制。方法:将研究对象分为对照组(n=23)和TAAD组(n=27),收集所有研究... 目的:研究miR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层(Stanford type A aortic dissection,TAAD)患者外周血清及主动脉壁组织中的表达,探讨miR-146b在TAAD发病中的意义及机制。方法:将研究对象分为对照组(n=23)和TAAD组(n=27),收集所有研究对象的外周血清、术中主动脉壁组织和临床资料。运用实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,qRT-PCR)检测各组外周血清及主动脉壁组织中miR-146b的表达水平。比较不同主动脉夹层风险级别的miR-146b水平,对miR-146b水平与TAAD患者主动脉夹层破裂风险进行相关性分析。运用DIANA LAB-TarBase 6.0数据库及TargetScan靶基因预测软件预测miR-146b相关靶基因。结果:TAAD组外周血清和主动脉壁组织中miR-146b表达水平均较对照组增高(P<0.001);中度风险和重度高危的TAAD患者外周血清和主动脉壁组织中miR-146b的表达水平较轻度风险患者明显增高(P<0.05);TAAD外周血清和主动脉壁组织中miR-146b差异表达与主动脉夹层高危风险呈正相关(r=0.862,0.872;P<0.05)。核因子κB1(nuclear factor kappa B1,NF-κB1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)、基质金属蛋白酶-16(matrix metalloproteinase 16,MMP16)和肌动蛋白2(actin alpha 2,ACTA2)为miR-146b的靶基因。 展开更多
关键词 miR-146b 主动脉夹层 因子κB1 肿瘤坏死因子受体相关因子6 基质金属蛋白酶-16 肌动蛋白2
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黄芪注射液对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子的影响及其分子机制 被引量:6
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作者 叶泽兵 汪凡军 +3 位作者 张刚庆 杨旺民 覃海森 刘兴涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1137-1140,共4页
目的观察黄芪注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κβ(NF-κβ)激活与白介素-6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)分泌的影响,探讨其分子机制。方法体外培养的第2代HUVECs用于实... 目的观察黄芪注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κβ(NF-κβ)激活与白介素-6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)分泌的影响,探讨其分子机制。方法体外培养的第2代HUVECs用于实验,免疫组织化学分析检测细胞NF-κβ亚单位p65的表达程度,Western blot检测核内NF-κβ含量变化,ELISA法检测培养液中IL-6、ICAM-1浓度。结果TNF-α有效激活NF-κβ并诱导HUVECs分泌IL-6、sICAM-1增加;黄芪注射液预先孵育2h能抑制NF-κβ表达并减轻TNF-α诱导的上述反应。结论TNF-α可能通过激活NF-κβ使IL-6、sICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能;黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κβ途径实现血管内皮保护功能。 展开更多
关键词 黄芪注射液 肿瘤坏死因子 脐静脉内皮细胞 因子-κβ 白介素-6 细胞间黏附分子-1
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首发精神分裂症PBMC NF-κB活性及其mRNA表达与IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达的关系 被引量:4
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作者 宋学勤 赵靖平 +1 位作者 吕路线 李文强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期456-460,共5页
目的:探讨首发精神分裂症患者外周血单个核细胞(PBMC)NF-κB的活性及其mRNA表达与IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达的相互关系,为临床应用NF-κB调节剂提供理论依据。方法:应用NF-κB活性ELISA试剂盒,检测精神分裂症组和健康对照组PBMC中NF... 目的:探讨首发精神分裂症患者外周血单个核细胞(PBMC)NF-κB的活性及其mRNA表达与IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达的相互关系,为临床应用NF-κB调节剂提供理论依据。方法:应用NF-κB活性ELISA试剂盒,检测精神分裂症组和健康对照组PBMC中NF-κB活性,并采用RT-PCR方法,测定两组PBMC中NF-κB mRNA表达及IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达。结果:①精神分裂症组PBMC中NF-κB的活性及NF-κB mRNA表达量与对照组相比均明显增高,差异有显著性(P<0.05);②精神分裂症组PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达量与对照组相比均明显增高,差异有显著性(均P<0.05);③在精神分裂症组及对照组中,PBMC中NF-κB的活性与其mRNA表达量无明显相关(均P>0.05);④在精神分裂症组和对照组中,PBMC中NF-κB的活性与IL-1β、TNF-α mRNA均呈正相关(均P<0.05);无论是在精神分裂症组或对照组中,PBMC中NF-κB的活性与IL-6 mRNA均无明显相关(均P>0.05)。结论:精神分裂症患者PBMC中NF-κB mRNA表达及活性均增高,对NF-κB活性的检测更能反映NF-κB的转录调控功能情况;活化的NF-κB对IL-1β、TNF-α的基因转录起了重要的调控作用。 展开更多
关键词 精神分裂症 细胞介素1Β 细胞介素6 肿瘤坏死因子α 因子-ΚB
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沉默LncRNA MALAT1对补脾益气法调节DE大鼠海马中I-κB、IL-6和PI3K表达的影响 被引量:6
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作者 冯晓帆 王艳杰 +3 位作者 刘羽茜 王靖宇 柳春 高佳馨 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第10期151-155,共5页
目的 探讨将沉默肺腺癌转移相关转录本1 (metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)做为影响因素,中药方剂归脾汤对糖尿病脑病(diabetic encephalopathy, DE)大鼠海马相关信号转导通路中核因子-κB(NF-κB/I-κB... 目的 探讨将沉默肺腺癌转移相关转录本1 (metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)做为影响因素,中药方剂归脾汤对糖尿病脑病(diabetic encephalopathy, DE)大鼠海马相关信号转导通路中核因子-κB(NF-κB/I-κB)、炎性因子白细胞介素-6 (IL-6)以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)等相对表达的影响。方法 以高脂饲料结合STZ复制并筛选出DE大鼠模型;分为对照组、模型组,沉默LncRNA MALAT1同时应用归脾汤组(M归脾汤组),归脾汤组,西药组,并应用氧化酶法测其血糖值,采用ELISA法测其胰岛素水平后计算对应的胰岛素敏感指数,选择RT-PCR法检测其海马中I-κB和IL-6 mRNA的相对表达;选用WB法检测其海马中I-κB、IL-6、PI3K蛋白的相对表达。结果 在检测各海马样本中IL-6、I-κB和PI3K相对表达水平时发现,药物治疗4周后,模型组与对照组比较:IL-6表达水平明显上升,I-κB和PI3K表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),提示DE大鼠海马组织中的NF-κB/PI3K信号通路被激活;而在归脾汤组、M归脾汤组与模型组比较后得出:IL-6表达水平明显下降,I-κB和PI3K表达水平显著上升,差异有统计学意义(P<0.05),表明归脾汤能够调节NF-κB/PI3K信号通路,缓解DE大鼠海马组织中的炎性反应,利于改善病情。而归脾汤协同沉默MALAT1可经由进一步下调IL-6,上调IκB-和PI3K水平,更为显著抑制DE大鼠海马组织中NF-κB/PI3K通路的激活,减轻机体炎性反应。结论 中药方剂归脾汤可以调节DE大鼠模型的胰岛素抵抗状况,此效果可能是经由调节I-κB、IL-6和PI3K的表达来实现的,且沉默MALAT1后能加强归脾汤对上述指标的作用,从而为防治DE提供实验基础。 展开更多
关键词 糖尿病脑病 因子-ΚB 细胞介素-6 肺腺癌转移相关转录本1
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高脂、炎症状态下Api6在巨噬细胞中的表达研究 被引量:1
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作者 刘丹 张勇 +2 位作者 李越 龚雪 练雪梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期488-493,共6页
目的:凋亡抑制因子6(Apoptosis inhibitor 6,Api6)是清道夫受体富含半胱氨酸残基家族新成员,在免疫反应、肿瘤发生中发挥着重要的作用;但作为清道夫受体,Api6在脂质代谢中的作用尚未得到深入研究。方法:本文采用脂多糖(Lipopolysacchari... 目的:凋亡抑制因子6(Apoptosis inhibitor 6,Api6)是清道夫受体富含半胱氨酸残基家族新成员,在免疫反应、肿瘤发生中发挥着重要的作用;但作为清道夫受体,Api6在脂质代谢中的作用尚未得到深入研究。方法:本文采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)刺激细胞建立炎症和高脂模型,定量RT-PCR检测初步探讨了Api6在体外培养的2种单核/巨噬细胞株:RAW264.7细胞和THP-1细胞中的表达水平。结果:研究发现200ng/ml的LPS和100μg/ml的oxLDL处理可以导致体外培养的2种巨噬细胞出现异常的脂质蓄积,清道夫受体SRA在RAW264.7细胞和THP-1细胞中的表达分别上调了6倍、2.5倍和6倍、44倍。但同样处理条件下,Api6在RAW264.7细胞的表达没有明显上调;而炎症和高脂同时存在时,Api6在THP-1细胞中的表达却上调了2.7倍。结论:不同处理条件下,Api6的表达水平与肝核受体(Nuclearreceptor liver Xreceptor,LXR)受体α亚型的表达水平明显相关;由于缺乏LXRα受体,体外培养的小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞Api6基础表达量较低,因此可以作为载体细胞,用以建立过表达Api6的细胞模型深入研究Api6在脂质代谢中的作用。 展开更多
关键词 凋亡抑制因子6 受体LXR RAW264.7细胞 THP-1细胞
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肿瘤坏死因子受体相关因子6泛素化位点突变载体的构建及其功能位泛素化位点的鉴定 被引量:5
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作者 王琴 林春霖 +5 位作者 程志彬 何若凡 林鹏航 陈辉 叶建新 朱广伟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期551-558,共8页
目的:预测人肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因上的泛素化位点,并构建泛素化位点突变质粒,探讨突变质粒对人结直肠癌HCT116和SW480细胞中核因子κB(NF-κB)和激活蛋白1(AP-1)相对荧光素酶活性的影响。方法:采用UbPred、UbiSite和BDM... 目的:预测人肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因上的泛素化位点,并构建泛素化位点突变质粒,探讨突变质粒对人结直肠癌HCT116和SW480细胞中核因子κB(NF-κB)和激活蛋白1(AP-1)相对荧光素酶活性的影响。方法:采用UbPred、UbiSite和BDM-PUB软件预测TRAF6基因的泛素化位点,采用CE Design V1.04软件设计突变引物,采用突变试剂盒进行定点突变,采用PCR法扩增获得突变后的目的片段,扩增产物经Dpnl酶消化,去除甲基化模板质粒,消化产物在ExnaseⅡ催化作用下发生同源重组获得重组质粒;将重组质粒转化至DH5α大肠杆菌感受态细胞,对重组质粒进行DNA测序。采用双荧光素酶报告基因系统检测转染突变质粒后HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性。结果:经过DNA测序,泛素化突变位点已经成功突变,泛素化突变质粒构建成功。与TRAF6野生型基因比较,转染第124、319和331位突变质粒后,结直肠癌HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性降低(P<0.05或P<0.01),其中转染第124位突变质粒后,结直肠癌HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性降低最明显(P<0.01)。结论:成功构建人TRAF6基因的泛素化突变质粒,TRAF6的第124位氨基酸是其最重要的泛素化位点,可能影响下游信号通路中NF-κB和AP-1的活性。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子6 突变质粒构建 泛素化 荧光素酶报告系统 因子κB 激活蛋白1
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6-姜烯酚对急性肺损伤小鼠肺水肿的治疗作用及机制研究 被引量:1
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作者 王心威 李军梅 +2 位作者 彭勍 朱萱萱 刘建勋 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第8期1078-1084,共7页
目的:观察6-姜烯酚(6-SH)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺水肿的治疗作用,探究可能的作用机制。方法:采用随机数字表法将40只无特定病原体(SPF)级Balb/c小鼠分为对照组、模型组、6-姜烯酚组、地塞米松组,每组10只。鼻腔滴注LP... 目的:观察6-姜烯酚(6-SH)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺水肿的治疗作用,探究可能的作用机制。方法:采用随机数字表法将40只无特定病原体(SPF)级Balb/c小鼠分为对照组、模型组、6-姜烯酚组、地塞米松组,每组10只。鼻腔滴注LPS构建ALI模型,对照组滴注等量生理盐水。30 min后,给予6-姜烯酚组灌胃(100 mg/kg);地塞米松组给予腹腔注射(5 mg/kg);对照组和模型组给予灌胃等量生理盐水,24 h后结束实验,收集样本。测定肺组织湿/干重比(W/D)和肺系数;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定白细胞计数和总蛋白浓度;观察肺组织病理学改变、计算病理评分;测定BALF上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及白细胞介素-6(IL-6)水平;检测肺组织中Toll样受体4/核因子κB/水通道蛋白(TLR4/NF-κB/AQPs)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组肺组织损伤明显,病理评分、肺系数、W/D增加(P<0.01),白细胞计数、总蛋白浓度及TNF-α、IL-1β、IL-6的水平升高(P<0.01);与模型组比较,6-姜烯酚组的肺系数和W/D降低(P<0.01或P<0.05),白细胞计数、总蛋白浓度以及TNF-α、IL-1β、IL-6的水平降低(P<0.01或P<0.05),AQP1和AQP5的蛋白表达水平升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65以及p-NF-κB p65的表达水平降低(P<0.01或P<0.05)。结论:6-姜烯酚可能通过调控TLR4/NF-κB/AQPs信号通路发挥其抗炎作用和改善肺组织水液代谢与转运,有效缓解ALI小鼠的肺组织水肿。 展开更多
关键词 6-姜烯酚 脂多糖 急性肺损伤 炎症反应 肺水肿 Toll样受体4/因子κB/水通道蛋白通路 水通道蛋白1 水通道蛋白5
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NALP6信号转导通路在痛风性关节炎发病过程中的作用机制 被引量:11
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作者 隋方宇 姜德友 +3 位作者 韩洁茹 周雪明 赵铭宇 解颖 《世界中医药》 CAS 2019年第9期2276-2279,共4页
目的:探讨NALP6信号转导通路在痛风性关节炎(GA)发病过程中的作用机制。方法:选取慢病毒转染技术干扰NALP6蛋白的基因表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting)、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)等技术检测细胞中NA... 目的:探讨NALP6信号转导通路在痛风性关节炎(GA)发病过程中的作用机制。方法:选取慢病毒转染技术干扰NALP6蛋白的基因表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting)、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)等技术检测细胞中NALP6蛋白、caspase-1、IL-1β、核因子-κB的表达情况;结果:干扰成纤维滑膜细胞中NALP6基因的表达,能减低痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞中NALP6蛋白的表达、降低caspase-1和核因子-κB的活性,降低IL-1β含量;结论:NALP6炎性反应信号转导通路参与了大鼠痛风性关节炎的发病过程,通过能够干扰NALP6基因表达的慢病毒转染技术能保护痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞的炎性损伤。 展开更多
关键词 痛风性关节炎 NALP6信号转导通路 CASPASE-1 细胞介素-1β 因子-κB 慢病毒转染 成纤维样滑膜细胞 靶点
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水飞蓟素抑制大鼠酒精性脂肪肝库普弗细胞NF-κB活性的研究 被引量:5
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作者 高学梅 洪汝涛 +1 位作者 李俊 胡奇珍 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第9期1242-1245,共4页
目的探讨水飞蓟素抑制酒精性脂肪肝库普弗细胞(KCs)核转录因子-κB(NF-κB)活性及与酒精性脂肪肝的关系。方法 45只大鼠随机分为4组:正常组9只,模型组12只,水飞蓟素低、高剂量组各12只,采用酒精灌胃8周制造酒精性脂肪肝模型,HE染色观察... 目的探讨水飞蓟素抑制酒精性脂肪肝库普弗细胞(KCs)核转录因子-κB(NF-κB)活性及与酒精性脂肪肝的关系。方法 45只大鼠随机分为4组:正常组9只,模型组12只,水飞蓟素低、高剂量组各12只,采用酒精灌胃8周制造酒精性脂肪肝模型,HE染色观察肝脏病理组织学改变,联合酶离体灌注消化,Nycodenz密度梯度离心提取肝脏KCs,ELISA法检测其培养上清液白介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量,RT-PCR法检测各组大鼠肝脏KCs NF-κB p65 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组肝细胞可见明显脂肪变性,肝细胞肿胀明显(P<0.01)。与模型组比较,水飞蓟素各组肝组织病理变化程度均明显减轻(P<0.01)。ELISA法显示低、高剂量水飞蓟素组IL-6水平显著低于模型组(P<0.01),ICAM-1水平在低、高剂量组也低于模型组(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR显示低、高剂量水飞蓟素组NF-κB p65 mRNA表达显著低于模型组(P<0.01)。结论水飞蓟素抑制肝脏KCs NF-κB及其基因产物的表达,提示水飞蓟素抑制酒精性脂肪肝进展可能与此有关。 展开更多
关键词 转录因子KB 水飞蓟素 脂肪肝 酒精性 细胞间黏附分子-1 白介素-6
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RANK信号调控破骨细胞分化与成熟的研究进展 被引量:14
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作者 梅良伟 桑文华 +5 位作者 陈富春 李晓春 王登峰 吴卓 穆佐洲 邵海龙 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1652-1656,共5页
破骨细胞来源于微环境造血前体细胞,它的生存、增殖、分化和激活需要巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)参与。RANKL与相应的RANK受体结合,从而刺激破骨前体细胞分化成为破骨细胞。这一过程由不同的调节蛋... 破骨细胞来源于微环境造血前体细胞,它的生存、增殖、分化和激活需要巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)参与。RANKL与相应的RANK受体结合,从而刺激破骨前体细胞分化成为破骨细胞。这一过程由不同的调节蛋白和激酶来调控,并且依赖于RANKL-RANK信号。本文中,笔者总结了目前已知的在破骨细胞发生过程中调节RANK信号的机制。在早期阶段,RANK信号的调节通过募集调节蛋白如肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6, TRAF6),引起丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)以及转录因子核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)和激活蛋白-1(activator protein-1, AP-1)的活化。活化的NF-κB进一步激活调节破骨细胞生成的重要因子-T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1, NFATc1)。在信号传递的中间阶段,共刺激信号通过激活磷脂酶Cγ2(phospholipase Cγ2, PLCγ2)连同c-Fos/AP-1引起钙离子(Ca^(2+))振荡,同时Ca^(2+)信号促进NFATc1的产生。在破骨细胞生成的晚期阶段,NFATc1入核诱导大量的破骨细胞特异性靶基因的表达,从而使细胞融合并发挥其功能。 展开更多
关键词 破骨细胞 因子ΚB受体活化因子 肿瘤坏死因子受体相关因子6 NF-κB激活T细胞因子1
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