甜蛋白Brazzein基因在番茄果实中的特异表达 被引量：4

1

作者 尹涛 卢虹玉 +2 位作者 张上隆 刘敬梅 陈大明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期663-667,共5页

西瓜(Citrullus vulgaris S.)来源的AGPL1启动子在番茄(Lycopersicon esculentum L.)果实中具有较强的特异性驱动功能。将该启动子与甜味蛋白基因Brazzein融合构建植物表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法成功地... 西瓜(Citrullus vulgaris S.)来源的AGPL1启动子在番茄(Lycopersicon esculentum L.)果实中具有较强的特异性驱动功能。将该启动子与甜味蛋白基因Brazzein融合构建植物表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法成功地进行了对番茄的遗传转化,获得转化植株。组织化学法、PCR特异扩增、Southern杂交分析及RT-PCR检测,表明Brazzein基因已整合到转基因番茄植株基因组中并且稳定表达。通过AGPL1果实特异启动子的调控,在不改变果实其他性状的前提下提高了番茄果实甜味品质,并为甜蛋白的生产提供经验。 展开更多

关键词 番茄 甜蛋白基因brazzein 遗传转化 果实特异 AGPL1启动子

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植物甜蛋白brazzein基因的克隆与表达 被引量：6

2

作者 李广林 郭蔼光 范三红 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第7期1271-1274,共4页

根据大肠杆菌偏爱的密码子,利用PCR技术体外人工合成brazzeincDNA序列,并将其克隆至原核高效表达载体pET30a(+)中。重组载体pET30a(+)-brazzein转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果证明pET30a(+)-brazzein在大肠杆菌... 根据大肠杆菌偏爱的密码子,利用PCR技术体外人工合成brazzeincDNA序列,并将其克隆至原核高效表达载体pET30a(+)中。重组载体pET30a(+)-brazzein转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果证明pET30a(+)-brazzein在大肠杆菌中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白25%左右。 展开更多

关键词 甜蛋白 brazzein 基因克隆 基因表达

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甜味蛋白Brazzein及其基因工程 被引量：2

3

作者 郑伟伟 赵萌 刘波 《中国调味品》 CAS 北大核心 2018年第3期181-184,共4页

Brazzein是一种天然植物甜味蛋白,具有甜度高、能量低、稳定性好等优点。文章综述了其来源、生化特性和其甜味决定因素,并对它在基因工程方面的研究进展进行了综述。

关键词 brazzein 甜味蛋白 生化特性 基因工程

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小麦类甜蛋白基因的转化及转基因植株的抗病性分析 被引量：18

4

作者 邢莉萍 王华忠 +4 位作者 蒋正宁 倪金龙 曹爱忠 于玲 陈佩度 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期349-354,共6页

目前已克隆出许多类甜蛋白基因并成功转化马铃薯、水稻和小麦等植物,均可引起植株抗病性的提高。在以往的研究中我们从小麦中克隆了一个类甜蛋白基因(Ta-Tlp),该基因在高抗白粉病的小麦6VS/6AL易位系中能够高水平表达,推测它与白粉病抗... 目前已克隆出许多类甜蛋白基因并成功转化马铃薯、水稻和小麦等植物,均可引起植株抗病性的提高。在以往的研究中我们从小麦中克隆了一个类甜蛋白基因(Ta-Tlp),该基因在高抗白粉病的小麦6VS/6AL易位系中能够高水平表达,推测它与白粉病抗性密切相关。为进一步研究该基因的功能,本研究构建了包含在ubi强启动子控制下的Ta-Tlp基因的表达载体pAHC-TlP,用基因枪将其导入小麦品种扬麦158的幼胚愈伤组织,在含除草剂的选择培养基上经两轮筛选和分化,获得再生抗性植株。对T0、T1和T2代植株进行PCR、Southern杂交与RT-PCR分析,结果表明Ta-Tlp基因已整合进受体基因组并且能够表达。对T0代及其衍生的T1代(来自6个T0代阳性株系的183个单株)和T2代(来自6个T0代阳性株系的241个单株)转化植株进行白粉病抗性鉴定,Ta-Tlp基因超量表达的转基因植株,能延缓白粉病发病进程,其白粉病抗性有一定提高。对T2代阳性转化植株进行赤霉病抗性鉴定表明,其抗性与受体对照相比无显著差异。 展开更多

关键词 小麦类甜蛋白基因 基因枪 遗传转化 白粉病 抗性鉴定

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植物类甜蛋白基因家族研究进展 被引量：14

5

作者 刘潮 韩利红 +2 位作者 王海波 高永 唐利洲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期9-17,共9页

类甜蛋白(Thaumatin-like proteins,TLPs)在植物对抗胁迫过程中发挥重要作用。该家族属多基因家族,蛋白分子量较小,具有典型的thaumatin结构域,且高度保守;典型的TLP蛋白由16个半胱氨酸残基对形成8个二硫键,三维解析结构具有功能域Ⅰ、... 类甜蛋白(Thaumatin-like proteins,TLPs)在植物对抗胁迫过程中发挥重要作用。该家族属多基因家族,蛋白分子量较小,具有典型的thaumatin结构域,且高度保守;典型的TLP蛋白由16个半胱氨酸残基对形成8个二硫键,三维解析结构具有功能域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 3个保守功能域,表面具有"V"形酸性裂缝,保证了蛋白的催化功能;多数物种TLP蛋白归为10个聚类组,各组发生了不均衡扩增;TLP蛋白具有抗真菌、葡聚糖酶、过敏原等活性,能被激素、逆境胁迫等多种信号诱导表达,能被生物或非生物因子诱导表达,广泛参与了植物生长发育、抵御胁迫等多项生命进程,在植物先天免疫中发挥作用。通过基因工程手段,越来越多具有抗真菌潜力的TLP家族基因被用于提高植物抗病性。从类甜蛋白结构、进化、生物学功能及其应用等方面对近期研究成果进行了综述,以期为后续研究提供参考。 展开更多

关键词 类甜蛋白 抗真菌活性 转基因 植物胁迫

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甜蛋白基因MBLII对番茄的遗传转化 被引量：9

6

作者 李晓东 刘敬梅 +2 位作者 陈杭 程智慧 柴敏 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第5期808-811,共4页

以5～7d龄的 丽春 番茄无菌苗子叶作为外植体,研究了子叶外植体对抗生素卡那霉素的敏感性,抗生素卡那霉素对番茄筛选的适宜浓度为70mg/L.通过根癌农杆菌 Agrobacteriumtumefaciens 介导,成功地进行了马槟榔甜蛋白基因MBLII对番茄的遗传... 以5～7d龄的 丽春 番茄无菌苗子叶作为外植体,研究了子叶外植体对抗生素卡那霉素的敏感性,抗生素卡那霉素对番茄筛选的适宜浓度为70mg/L.通过根癌农杆菌 Agrobacteriumtumefaciens 介导,成功地进行了马槟榔甜蛋白基因MBLII对番茄的遗传转化,获得转化番茄抗性植株,组织化学法有阳性表现、PCR特异扩增及Southern杂交检测出现特异条带,表明MBLII基因已顺利整合到转基因番茄植株的基因组. 展开更多

关键词 番茄 甜蛋白基因MBLⅡ 遗传转化 卡那霉素

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利用类甜蛋白基因诱导表达提高马铃薯对晚疫病的抗性研究 被引量：26

7

作者 金红 岳东霞 +1 位作者 周良炎 S.Muthukrishnan 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期67-72,共6页

将类甜蛋白基因 (TLP)及其紧密连锁的抗除草剂bar基因以农杆菌介导法导入脱毒微型种薯“津引薯 8号” ,经除草剂筛选后的转基因单株无性繁殖用于分子检测 ,标记基因bar基因的PCR反应和含TLP基因特异探针的Southern检测结果 ,转基因植株... 将类甜蛋白基因 (TLP)及其紧密连锁的抗除草剂bar基因以农杆菌介导法导入脱毒微型种薯“津引薯 8号” ,经除草剂筛选后的转基因单株无性繁殖用于分子检测 ,标记基因bar基因的PCR反应和含TLP基因特异探针的Southern检测结果 ,转基因植株分别显示出 0 54kb和 3 0kb的特异性条带 ,证明TLP基因已成功地整合到转基因马铃薯基因组中。利用TLP基因特异性抗血清对转基因植株进行Western反应检测 ,结果表明 ,转基因植株中TLP基因表达量显著高于对照组 ,经晚疫病菌游离孢子接种离体抗性分析 。 展开更多

关键词 马铃薯晚疫病 类甜蛋白基因 抗病性 诱导表达

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奇异果甜蛋白及其基因工程 被引量：4

8

作者 孔建强 赵琦 +2 位作者 高音 祁晓廷 杨奇志 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期232-236,共5页

奇异果甜蛋白(thaumatin)是迄今为止最甜的物质之一,对其研究具有很重要的意义。奇异果甜蛋白的生化性质基本清楚,基因序列和氨基酸序列都已测定。它的甜味可能是由奇异果甜蛋白上特定基团和受体结合引起的。对奇异果甜蛋白的生理功能... 奇异果甜蛋白(thaumatin)是迄今为止最甜的物质之一,对其研究具有很重要的意义。奇异果甜蛋白的生化性质基本清楚,基因序列和氨基酸序列都已测定。它的甜味可能是由奇异果甜蛋白上特定基团和受体结合引起的。对奇异果甜蛋白的生理功能知之甚少。近二十年来,在奇异果甜蛋白的基因工程上取得了一定进展,但仍然存在许多困难。 展开更多

关键词 甜味蛋白 奇异果甜蛋白 甜味机理 生理功能 基因工程

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辣椒类甜蛋白基因家族鉴定及表达分析 被引量：6

9

作者 刘潮 韩利红 +3 位作者 宋培兵 王德琴 王海波 唐利洲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期122-129,共8页

为了在全基因组水平上了解辣椒类甜蛋白基因(TLP)家族特征,本研究通过生物信息学方法,利用辣椒基因组数据库,对筛选的28个辣椒TLP家族成员进行鉴定,对结构功能、聚类及时空表达进行分析。结果表明,辣椒TLP家族基因主要分为4种结构类型,... 为了在全基因组水平上了解辣椒类甜蛋白基因(TLP)家族特征,本研究通过生物信息学方法,利用辣椒基因组数据库,对筛选的28个辣椒TLP家族成员进行鉴定,对结构功能、聚类及时空表达进行分析。结果表明,辣椒TLP家族基因主要分为4种结构类型,基因分布在9条染色体上。系统发育分析结果显示,辣椒TLP家族基因属于8个聚类组,其中成员最多的聚类组5中的基因主要来自1号染色体。基因启动子区顺式作用元件分析发现多个激素响应元件、生物/非生物响应元件。时空表达分析结果表明,多数辣椒TLP家族基因在各器官和果实发育的各阶段均有较高表达,各成员在时空表达上具有器官特异性。本研究为辣椒TLP家族基因的克隆及其在植物生长及对抗胁迫方面的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 辣椒 类甜蛋白基因 生物信息学

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植物甜蛋白thaumatin基因重组表达质粒的构建 被引量：3

10

作者 杨成丽 范文韬 +1 位作者 刘德立 段媛媛 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期219-221,共3页

利用 DNA重组技术 ,将植物甜蛋白 thaumatin基因克隆至植物表达载体 p BI1 2 1中 ,成功地构建了重组植物表达质粒 p BI1 2 1

关键词 甜蛋白基因 THAUMATIN 基因克隆 植物表达载体 基因重组 质粒 构建

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甘蔗割手密种类甜蛋白家族鉴定及栽培种同源基因功能分析 被引量：5

11

作者 苏亚春 李聪娜 +5 位作者 苏炜华 尤垂淮 岑光莉 张畅 任永娟 阙友雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1275-1296,共22页

类甜蛋白(thaumatin-like protein,TLP)在植物生长发育和抵抗逆境胁迫中发挥重要作用。为全面了解甘蔗TLP家族基因的结构和功能特性,本研究利用甘蔗野生种割手密基因组数据库和生物信息学方法,首先筛选获得122个SsTLP家族基因并进行蛋... 类甜蛋白(thaumatin-like protein,TLP)在植物生长发育和抵抗逆境胁迫中发挥重要作用。为全面了解甘蔗TLP家族基因的结构和功能特性,本研究利用甘蔗野生种割手密基因组数据库和生物信息学方法,首先筛选获得122个SsTLP家族基因并进行蛋白理化性质、基因染色体分布、基因结构和系统进化等分析;其次,从我国大陆主栽甘蔗品种ROC22中克隆到1条SsTLP87的同源基因ScTLP1,并对其基因表达模式、亚细胞定位、瞬时表达和转录自激活活性进行鉴定。结果表明,122个SsTLP家族基因分布在28条割手密染色体上,且存在多基因聚集现象,每条染色体上有1~13个SsTLP基因,多数SsTLP蛋白被预测为定位于细胞质的酸性疏水性不稳定蛋白。SsTLP家族基因结构类型多样,其内含子数目(1~30)、内含子相位(0~2)和Motif(1~5)存在多种类型和分布。系统进化树分析显示,SsTLP基因编码蛋白分别聚类在TLP家族的Ⅰ~Ⅹ分支上,其中具有抑菌潜力的第Ⅴ类SsTLP数量最多(36个)。从甘蔗栽培种ROC22克隆获得的ScTLP1基因编码227个氨基酸残基,属于第Ⅴ类进化聚类组,定位于细胞膜,不具有转录自激活活性,其与割手密SsTLP87蛋白的氨基酸序列相似性高达99.56%。qRT-PCR分析表明,ScTLP1基因在甘蔗不同组织部位组成型表达,且在蔗芽部位的表达量最高。ScTLP1基因在脱落酸(abscisic acid,ABA)和水杨酸(salicylic acid,SA)处理下的表达量无显著变化,但受甘蔗黑穗病菌(Sporisorium scitaminea)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)、氯化钠(sodium chloride,NaCl)、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)和4℃低温诱导上调表达。瞬时过表达ScTLP1基因后,本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片中的DAB染色加深,乙烯合成相关基因NtEFE26和茉莉酸代谢途径相关基因NtPR3上调表达,且接种烟草青枯菌(Pseudomonas solanacearum)和烟草茄病镰刀菌蓝色变种(Fusarium solani var.coeruleum)的ScTLP1基因瞬时过表达叶片发病情况较对照组轻,表明ScTLP1基因可以诱发本氏烟的过敏反应,参与乙烯和茉莉酸信号传导途径,增强本氏烟对病原菌的防御效应。研究结果为深入探究甘蔗TLP家族基因的结构和功能奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 甘蔗 类甜蛋白 全基因组分析 功能分析

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‘黄冠’梨类甜蛋白编码基因PbPR5的克隆及其表达特性分析 被引量：4

12

作者 李刚波 杨峰 +5 位作者 赵林 樊继德 李勇 陆信娟 杨艳 王福建 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期129-136,共8页

【目的】分离和克隆类甜蛋白基因Pb PR5,了解其在‘黄冠’梨不同组织、不同发育阶段以及受到非生物胁迫和植物生长调节剂处理时的表达情况。【方法】以‘黄冠’梨(Pyrus bretschneideri‘Huangguan’)组培苗为试验材料,从水杨酸(salicyl... 【目的】分离和克隆类甜蛋白基因Pb PR5,了解其在‘黄冠’梨不同组织、不同发育阶段以及受到非生物胁迫和植物生长调节剂处理时的表达情况。【方法】以‘黄冠’梨(Pyrus bretschneideri‘Huangguan’)组培苗为试验材料,从水杨酸(salicylic acid,SA)处理的c DNA文库中克隆获得该基因全编码区序列,命名为Pb PR5,对其进行生物信息学分析,并研究该基因在盐、聚乙二醇(EG6000)、SA和乙烯(ETH)处理后的表达情况;以12 a生‘黄冠’梨的叶片和果实为材料,探究该基因在叶片和果实不同发育阶段的表达模式。【结果】Pb PR5的c DNA序列长度为741 bp,编码224个氨基酸残基;该基因的基因组DNA序列长度为813 bp,包含1个内含子。生物信息学分析表明,Pb PR5蛋白与其他植物PR5基因编码的氨基酸序列相似性较高。实时荧光定量PCR分析表明:Pb PR5基因在‘黄冠’梨组培苗的根,茎,叶中均能表达,其中根部的表达量高于茎和叶;盐和干旱胁迫诱导了该基因表达,根和茎中的表达高峰均出现在处理后6 h,叶在盐胁迫后24 h和干旱后12 h出现表达高峰;SA和乙烯也诱导了该基因在叶片中的表达。在不同发育阶段的叶片中,老叶表达量最高,成熟叶次之,幼叶中不表达;在不同发育阶段的果实中,成熟果实中表达量最高,幼果期和膨大期果实表达量较低。【结论】Pb PR5基因在‘黄冠’梨各组织中非组成型表达,并且在‘黄冠’梨抵御生物和非生物胁迫过程中可能具有重要的生物学功能。 展开更多

关键词 '黄冠’梨 类甜蛋白PbPR5基因 基因克隆 表达分析

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外源类甜蛋白基因在马铃薯中的表达 被引量：10

13

作者 岳东霞 金红 +1 位作者 周良炎 S.Muthukrishnan 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2000年第1期12-16,共5页

将“津引薯 8号”马铃薯薄片和含有CaMV35S启动子控制的类甜蛋白 (TLP)基因与紧密连锁的Ubiquitin启动子控制的bar标记基因的农杆菌双元表达载体进行共培养。切下马铃薯薄片表面产生的幼芽 ,用含有除草剂bialaphos的MS培养基进行初步筛... 将“津引薯 8号”马铃薯薄片和含有CaMV35S启动子控制的类甜蛋白 (TLP)基因与紧密连锁的Ubiquitin启动子控制的bar标记基因的农杆菌双元表达载体进行共培养。切下马铃薯薄片表面产生的幼芽 ,用含有除草剂bialaphos的MS培养基进行初步筛选。当获得的生根抗性芽生长成株后用TLP蛋白抗体和TLP基因特异引物对成株进行间接ELISA检测和PCR检测。两种检测结果一致率为 90 % ,推断以bar基因为筛选标记。 展开更多

关键词 马铃薯 遗传转 类甜蛋白基因 抗病育种

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人工合成的单链甜蛋白monellin基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：3

14

作者 陈忠军 路福平 +1 位作者 蔡恒 杜连祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期18-20,共3页

根据已报道的单链monellin甜蛋白的氨基酸序列,采用细菌偏爱密码子,人工合成了全长294bp的monellin基因。插入到大肠杆菌表达载体pET22b中,构建重组分泌型表达载体pETMO。经IPTG诱导pETMO所含有的甜蛋白基因可在大肠杆菌BL21(DE3)中高... 根据已报道的单链monellin甜蛋白的氨基酸序列,采用细菌偏爱密码子,人工合成了全长294bp的monellin基因。插入到大肠杆菌表达载体pET22b中,构建重组分泌型表达载体pETMO。经IPTG诱导pETMO所含有的甜蛋白基因可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,表达量占菌体可溶性蛋白的44.8%。且经纯化后测定其甜度是蔗糖的3000倍。 展开更多

关键词 甜蛋白MONELLIN 细菌优化密码子 重组PCR 诱导表达 甜蛋白基因 大肠杆菌 高效表达 人工合成 N基因 单链

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甜蛋白monellin基因在酿酒酵母中的分泌表达 被引量：2

15

作者 陈忠军 蔡恒 +1 位作者 李正英 路福平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期19-23,共5页

人工合成的单链甜蛋白monellin基因与经改造后的基因分别克隆到带有酵母半乳糖可诱导启动子GAL1的穿梭表达质粒pYES2.0中,得到表达载体pYESM及pYESMT。在表达载体pYESMT中,monellin基因的上游连接酿酒酵母的α-信号肽序列,得到分泌表达... 人工合成的单链甜蛋白monellin基因与经改造后的基因分别克隆到带有酵母半乳糖可诱导启动子GAL1的穿梭表达质粒pYES2.0中,得到表达载体pYESM及pYESMT。在表达载体pYESMT中,monellin基因的上游连接酿酒酵母的α-信号肽序列,得到分泌表达载体pYESMTA。分别将3个重组质粒转化酿酒酵母菌株INVsc1中进行表达。具有突变monellin基因的菌株INVMT/pYESMT的monellin蛋白表达量明显高于含monellin基因的菌株。而含有pYESMTA的菌株可将monellin基因分泌到胞外,表明α-信号肽序列能很好地将酿酒酵母中的重组monellin蛋白引导到胞外,完成分泌表达,且表达产物具有生物活性。 展开更多

关键词 酿酒酵母 甜蛋白monellin基因 偏爱密码子 信号肽

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植物甜蛋白基因Thaumatin Ⅱ转化番茄的初步鉴定

16

作者 杨飞 李志邈 +3 位作者 杨悦俭 叶青静 王荣青 阮美颖 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期167-172,共6页

以番茄无菌苗的子叶为外植体,以抗卡那霉素的NPTⅡ作为选择标记基因,通过根癌农杆菌介导法,将甜蛋白Thaumatin Ⅱ基因导入番茄中,共获得10株独立的抗性转化株系。对抗性转化株系进行了PCR和Southern blotting鉴定,PCR检测得到了预期的... 以番茄无菌苗的子叶为外植体,以抗卡那霉素的NPTⅡ作为选择标记基因,通过根癌农杆菌介导法,将甜蛋白Thaumatin Ⅱ基因导入番茄中,共获得10株独立的抗性转化株系。对抗性转化株系进行了PCR和Southern blotting鉴定,PCR检测得到了预期的特异条带,Southern blotting结果表明其中1个转化株系插入了2个拷贝的Thaumatin Ⅱ cDNA。以上试验结果证明Thaumatin Ⅱ基因已经整合到转基因番茄植株的基因组中,为最终获得在蛋白质水平表达Thaumatin Ⅱ的无选择标记的转基因番茄打下了基础。 展开更多

关键词 番茄 植物甜蛋白 THAUMATIN Ⅱ基因 遗传转化

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马槟榔甜蛋白基因(MBLⅡ)的拼接与表达载体的构建 被引量：4

17

作者 宋宗应 刘四新 +1 位作者 胡新文 郭建春 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期347-350,共4页

从云南植物Capparismasaikai中提取总DNA,设计引物克隆马槟榔甜蛋白基因MBLⅡ,序列测定后经同源性分析表明与GeneBank中登陆的马槟榔甜蛋白基因MBLⅡ(cDNA)序列一致,表明MBLⅡ不存在内含子序列。利用重叠区扩增基因拼接法(genesplicingb... 从云南植物Capparismasaikai中提取总DNA,设计引物克隆马槟榔甜蛋白基因MBLⅡ,序列测定后经同源性分析表明与GeneBank中登陆的马槟榔甜蛋白基因MBLⅡ(cDNA)序列一致,表明MBLⅡ不存在内含子序列。利用重叠区扩增基因拼接法(genesplicingbyoverlapextension,geneSOEing)进行体外基因剪接,剪接片段与植物表达载体pVKH相连,构建pVKH-35S-MBLⅡ-Pa、pVKH-35S-S-A+B-pA、pVKH-35S-A+B-pA、pVKH-35S-S-A-pA、pVKH-35S-S-B-pA,为寻找mabinlin的活性表达形式和翻译后剪接机制打下基础。 展开更多

关键词 甜蛋白 MBLⅡ基因 重叠区扩增基因拼接 pVKH植物表达载体

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人β防御素3与植物巴西甜蛋白基因密码子的优化及其在毕氏酵母中的表达 被引量：2

18

作者 暴元元 赵青君 +4 位作者 徐婷婷 陈锐博 赵卫东 郑振宇 李春丽 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期77-82,共6页

根据人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的氨基酸序列,按照酵母密码子的偏爱性,合成了14段末端具有粘合位点的核苷酸序列,经连接、PCR扩增,使人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的编码序列通过1段序列(含凝血酶切割位点... 根据人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的氨基酸序列,按照酵母密码子的偏爱性,合成了14段末端具有粘合位点的核苷酸序列,经连接、PCR扩增,使人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的编码序列通过1段序列(含凝血酶切割位点)连接成为嵌合基因,将其插入到pPIC9K载体中,构建重组表达载体pPIC9K-hBD3-Bra.SalⅠ,BglⅡ单酶切后,分别电击转化到毕赤酵母GS115中,构建野生型和乙醇氧化酶缺陷型酵母工程菌株GS115-pPIC9K-hBD3-Bra.筛选鉴定后,以体积分数为0.5%的甲醇进行诱导,缺陷型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的90%,纯度较高,野生型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的57.8%. 展开更多

关键词 防御素 甜蛋白 基因合成 克隆表达 活性检测

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松材线虫类甜蛋白(TLP-1)基因克隆及蛋白质结构预测 被引量：3

19

作者 汪菊 韩珊 +2 位作者 理永霞 邓勋 张星耀 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期305-310,共6页

【目的】对松材线虫类甜蛋白(TLP-1)结构进行分析,进一步为其功能研究奠定基础。【方法】通过对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)类甜蛋白(TLP-1)设计特异性引物,运用RT-PCR技术克隆该基因全长cDNA序列。运用相关生物学软件进行分... 【目的】对松材线虫类甜蛋白(TLP-1)结构进行分析,进一步为其功能研究奠定基础。【方法】通过对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)类甜蛋白(TLP-1)设计特异性引物,运用RT-PCR技术克隆该基因全长cDNA序列。运用相关生物学软件进行分析及三维结构构建。【结果】该基因全长为441bp,编码146个氨基酸。NCBI比对发现该基因属于TLP超基因家族。PROCHECK分析显示蛋白结构建合理。【结论】该蛋白不论从序列分析以及蛋白构建结果显示,相对于动物源类甜蛋白,其与植物更为相似。 展开更多

关键词 松材线虫 类甜蛋白 基因克隆 分子结构

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青稞耐低氮相关类甜蛋白基因HvTOND1克隆和亚细胞定位研究 被引量：4

20

作者 安立昆 姚有华 +1 位作者 姚晓华 吴昆仑 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1157-1166,共10页

为了探索青稞耐低氮相关类甜蛋白基因HvTOND1的基因和蛋白结构特点,为青稞耐低氮分子机制研究提供基础。以青稞‘昆仑14’叶片为材料,根据植物基因组数据库Gramene(http://www.gramene.org/)中的大麦HvTOND1(HORVU5Hr1G005300)基因和启... 为了探索青稞耐低氮相关类甜蛋白基因HvTOND1的基因和蛋白结构特点,为青稞耐低氮分子机制研究提供基础。以青稞‘昆仑14’叶片为材料,根据植物基因组数据库Gramene(http://www.gramene.org/)中的大麦HvTOND1(HORVU5Hr1G005300)基因和启动子区域序列设计引物,通过PCR获得青稞‘昆仑14’HvTOND1基因和启动子区域序列。采用生物信息学软件对HvTOND1基因启动子区域元件以及蛋白理化性质、跨膜结构、磷酸化位点、信号肽、二级结构、三级结构进行分析。结果表明HvTOND1没有内含子,HvTOND1蛋白由171个氨基酸组成,具有4个磷酸化位点,具有信号肽,不具有跨膜结构。将HvTOND1与其他植物的氨基酸序列进行对比并构建进化树发现青稞HvTOND1与节节麦AtsTOND1亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示HvTOND1定位在内质网中。 展开更多

关键词 青稞 类甜蛋白 HvTOND1基因 生物信息学分析

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