假单胞菌(Pseudomonas sp. cn 4902)甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及表达 被引量：4

1

作者 刘广发 谭静 +3 位作者 陈启伟 刘广发 谭静 陈启伟 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期183-188,共6页

参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究... 参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究。结果表明 ,克隆获得一长为 114 9bp的基因。经蛋白质保守区域研究 ,初步判别该基因为mtlD结构基因。将该基因与pBV2 2 0质粒构建成高效表达原核重组载体pBH。SDS PAGE电泳表明 ,含pBH的转化子产生特异的、分子量约为 4 1kD的蛋白带 ,表达量约占菌体可溶性蛋白 6 7%。转化子的耐盐水平比对照提高了约 1/5。在含 0 9mol/LNaCl的液体培养基中 ,转化子培养 2 4h后其生物量约是对照的 10 2倍 ,甘露醇含量约是对照的 4 1倍。可见 ,假单胞菌的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因是一个重要的耐盐相关基因 ,该基因已在GenBank登记 ,代号为AY112 6 96。 展开更多

关键词 假单胞菌 甘露醇-1-磷酸脱氢酶 基因 克隆

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大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

2

作者 谢启鑫 庄东红 +3 位作者 欧阳永长 胡忠 钟名其 彭桂庄 《江西农业学报》 CAS 2007年第10期5-8,15,共5页

以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板,根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物,通过PCR扩增到1条长约1.15 kb的特异片断,把该片断连接到pUCm-T载体上进... 以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板,根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物,通过PCR扩增到1条长约1.15 kb的特异片断,把该片断连接到pUCm-T载体上进行测序。序列分析结果表明,该基因编码区全长1149 bp,共编码382个氨基酸,与报道的mtlD基因修正序列完全一致。将该基因插入到原核表达载体pET28a(+),IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,发现在约45 kD处明显比对照多出1条带,凝胶扫描后经Bandscan 5.0软件分析表明,该特异条带的蛋白含量占菌体可溶性总蛋白的72.9%。Western blot检测其为带组氨酸标签的融合蛋白,而质谱分析证实其为甘露醇-1-磷酸脱氢酶。转化子的耐盐能力比对照提高了约20%。该基因提交到GeneBank数据库,返回的接受号为DQ660889。 展开更多

关键词 大肠杆菌 W3350菌株 甘露醇-1-磷酸脱氢酶 基因克隆 原核表达

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半理性设计提高短链醇脱氢酶在(S)-1-(4-氟苯基)乙醇合成中的应用

3

作者 谢静雯 孟仪方 +2 位作者 叶文杰 王华磊 魏东芝 《化工进展》 北大核心 2025年第5期2515-2523,共9页

(S)-1-(4-氟苯基)乙醇是一种重要的手性药物中间体,被广泛用于阿尔兹海默症治疗等多种药物的合成当中。目前,利用生物不对称还原法合成该手性醇时普遍存在制备效率低下的问题。为建立(S)-1-(4-氟苯基)乙醇酶法高效合成工艺,本研究对实... (S)-1-(4-氟苯基)乙醇是一种重要的手性药物中间体,被广泛用于阿尔兹海默症治疗等多种药物的合成当中。目前,利用生物不对称还原法合成该手性醇时普遍存在制备效率低下的问题。为建立(S)-1-(4-氟苯基)乙醇酶法高效合成工艺,本研究对实验室包含323种醇脱氢酶的酶库进行筛选,得到了具备高立体选择性(e.e.=99.9%)和相对活性的短链醇脱氢酶Dp ADH,随后通过半理性设计经过多轮迭代突变成功获得了催化效率提高30.8倍的优良变体M3(N164C/S195W/F157A)。为进一步提高生物催化效率,构建了醇脱氢酶突变体M3与葡萄糖脱氢酶Bs GDH的共表达菌株,在100g/L底物投料下可于7h内实现99.6%的转化率。分子动力学模拟结果显示,M3变体增加了与底物间有利的π-π相互作用并稳定了底物结合构象。本研究为(S)-1-(4-氟苯基)乙醇的制备提供了经济高效的合成途径,并为醇脱氢酶Dp ADH的分子改造和机制解析提供了指导,提高了该酶的工业应用潜力。 展开更多

关键词 (S)-1-(4-氟苯基)乙醇 半理性设计 醇脱氢酶 不对称还原 共表达

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1-磷酸甘露醇脱氢酶基因转化水稻的研究 被引量：16

4

作者 王慧中 刘俊君 +6 位作者 卢德赵 赵艳 颜美仙 钱前 彭学贤 陈受宜 黄大年 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-10,共5页

PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的... PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的相对电导率和大分子渗漏值明显降低。部分转基因株系能在 1 .0 % Na Cl浓度下正常生长 ,而对照在 0 .5% Na Cl浓度下已不能存活。通过有性杂交途径实现了 mtl D和 gut D两个基因的聚合 ,部分杂交后代株系能在 1 .2 5% Na Cl胁迫下正常生长结实。 展开更多

关键词 水稻 1-磷酸甘露醇脱氢酶基因 6-磷酸山梨醇脱氢酶基因 转基因植株 耐盐性 产量性性 有性杂交 农艺性状

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球孢白僵菌甘露醇1-磷酸脱氢酶cDNA克隆及生物信息学分析 被引量：1

5

作者 李凯月 郑长英 +1 位作者 燕霞飞 王俊平 《山东农业科学》 2017年第10期10-14,共5页

本研究利用RT-PCR技术克隆获得了球孢白僵菌(Beauveria bassiana)甘露醇1-磷酸脱氢酶(Bb MPD)基因的cDNA序列,并对其氨基酸序列进行生物信息学分析,明确其蛋白典型特征。结果显示,Bb MPD基因cDNA序列长1 176 bp,编码391个氨基酸,分子量... 本研究利用RT-PCR技术克隆获得了球孢白僵菌(Beauveria bassiana)甘露醇1-磷酸脱氢酶(Bb MPD)基因的cDNA序列,并对其氨基酸序列进行生物信息学分析,明确其蛋白典型特征。结果显示,Bb MPD基因cDNA序列长1 176 bp,编码391个氨基酸,分子量约为42.9 k D,理论等电点为5.09;不具有信号肽,属于非分泌蛋白;无跨膜结构,是亲水性蛋白;亚细胞定位预测显示Bb MPD蛋白主要位于细胞质;具有典型的甘露醇1-磷酸脱氢酶保守结构域;α螺旋和无规则卷曲是Bb MPD蛋白主要的二级结构。该结果为进一步研究Bb MPD基因及其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 球孢白僵菌 甘露醇1-磷酸脱氢酶 基因克隆 生物信息学分析

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共转染小干扰RNA质粒联合抑制HeLa细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和转酮醇酶样基因-1表达 被引量：2

6

作者 张德太 杨文 +2 位作者 涂启明 张科 胡丽华 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第11期1156-1160,共5页

目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small i... 目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体同时沉默人宫颈癌Hela G6PD及TKTL-1后,观察其对G6PD和TKTL1的联合抑制作用,旨在探讨共转染siRNA表达载体联合抑制PPP的效果及可行性。方法分别构建靶向G6PD和TKTL1基因siRNA干扰质粒载体,通过酶切和测序鉴定siRNA干扰质粒载体构建成功后,单独或共转染HeLa细胞株,RT-PCR检测G6PD、TKTL1 mRNA表达并结合G6PD、转酮醇酶(transketolase,TKT)活性测定判断并比较共转染联合抑制Hela细胞G6PD、TKTL1表达的效果。结果共转染靶向G6PD和TKTL1基因的siRNA干扰载体能显著下调G6PD和TKTL1基因表达水平[(0.96±0.05)vs(0.47±0.04),(0.98±0.05)vs(0.41±0.04),P<0.01]。同时,2个酶的活性也显著下降(99.2%vs34.5%和99.8%vs 40.1%,P<0.01)。共转染抑制G6PD基因mRNA表达较单独转染靶向G6PD基因的siRNA干扰载体的效果有显著下降[(0.47±0.04)vs(0.31±0.04),P<0.01)]。结论共转染siRNA干扰载体对人宫颈癌HeLa细胞PPP代谢通路进行联合抑制是一种有效的实验方案。 展开更多

关键词 小干扰RNA 转酮醇酶样基因-1 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 HELA细胞

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6-磷酸山梨醇脱氢酶(gutD)基因克隆、测序和表达 被引量：2

7

作者 陈启伟 刘广发 邱凤英 《台湾海峡》 CAS CSCD 2004年第3期314-317,共4页

本研究根据6 磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)两端序列设计引物,以假单胞杆菌(PseudonmonasXM)的总DNA为模板通过PCR的方法克隆gutD基因并进行序列分析.将克隆得到的gutD基因与原核表达载体pBV220连接并转化大肠杆菌(Es cherichiacoli)JM10... 本研究根据6 磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)两端序列设计引物,以假单胞杆菌(PseudonmonasXM)的总DNA为模板通过PCR的方法克隆gutD基因并进行序列分析.将克隆得到的gutD基因与原核表达载体pBV220连接并转化大肠杆菌(Es cherichiacoli)JM101后检测其蛋白表达及菌株生长耐盐性. 展开更多

关键词 分子生物学 6-磷酸山梨醇脱氢酶基因 克隆 序列分析 蛋白表达

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副干酪乳杆菌6-磷酸山梨醇脱氢酶(gutF)基因的克隆和超表达 被引量：3

8

作者 丁寅寅 左芳雷 +3 位作者 卢晓明 赵建云 王欧 陈尚武 《中国奶牛》 2010年第8期52-55,共4页

为研究6-磷酸山梨醇脱氢酶基因在乳酸菌中超表达的影响,本试验根据副干酪乳杆菌的基因序列设计引物,用PCR的方法扩增6-磷酸山梨醇脱氢酶(gutF)基因,将其连接到乳酸菌表达载体pMG36e,并将重组质粒转化到副干酪乳杆菌及乳酸乳球菌中获得... 为研究6-磷酸山梨醇脱氢酶基因在乳酸菌中超表达的影响,本试验根据副干酪乳杆菌的基因序列设计引物,用PCR的方法扩增6-磷酸山梨醇脱氢酶(gutF)基因,将其连接到乳酸菌表达载体pMG36e,并将重组质粒转化到副干酪乳杆菌及乳酸乳球菌中获得重组菌株;对重组菌株表达产物进行蛋白质水平的电泳检测,检测出表达了大约28kD的蛋白;使用山梨醇替代培养基中的葡萄糖,以未转化基因菌株做阴性对照,进行生长曲线的测定,结果表明,转化菌株能够利用在以山梨醇作为碳源的条件下,重组菌株的生长速度和最终菌浓度均优越于对照菌株。本研究通过超表达6-磷酸山梨醇脱氢酶蛋白,对于进一步研究乳酸菌的耐受性具有十分重要的理论基础。 展开更多

关键词 6-磷酸山梨醇脱氢酶 超表达 山梨醇

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苹果6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子的转化及其转录活性 被引量：3

9

作者 杨国婵 谢银鹏 +2 位作者 马锋旺 梁东 邹养军 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第9期166-173,共8页

【目的】研究6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子(S6PDHp)的组织表达特点。【方法】利用Gateway技术构建了S6PDHp与GUS基因的融合表达载体,然后通过农杆菌介导法转化番茄"中蔬5号",对转基因植株进行PCR检测,对鉴定为阳性的植株进行... 【目的】研究6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子(S6PDHp)的组织表达特点。【方法】利用Gateway技术构建了S6PDHp与GUS基因的融合表达载体,然后通过农杆菌介导法转化番茄"中蔬5号",对转基因植株进行PCR检测,对鉴定为阳性的植株进行GUS组织化学染色,验证S6PDHp的组织表达特性。【结果】将S6PDHp-GUS融合表达载体转化番茄,经PCR检测显示,成功获得了转S6PDHp基因的阳性番茄植株。对阳性植株各组织器官的GUS化学染色和活性检测结果显示,除叶片外许多器官都有很强的GUS活性,且在转基因番茄成熟期植株的茎部活性最高,根部活性最低;叶片从新叶到老叶的各个时期,GUS活性持续降低。【结论】S6PDHp表达在植物衰老过程中降低;且在转基因番茄茎部的GUS活性最强,说明该启动子具有组织表达特异性。 展开更多

关键词 苹果 6-磷酸山梨醇脱氢酶 启动子 转基因 GUS染色

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干旱胁迫下小麦葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因TaG6PDH1的表达特征及启动子分析 被引量：1

10

作者 关涛 怀宝玉 +3 位作者 郑佩晶 李丹 康振生 刘杰 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1194-1201,共8页

为进一步揭示小麦抗旱性的生物学机理,通过电子克隆和RT-PCR方法,在水源11小麦叶片中分离得到1个新的小麦葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因TaG6PDH1后进行基因序列特征和启动子元件组成分析,并利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q... 为进一步揭示小麦抗旱性的生物学机理,通过电子克隆和RT-PCR方法,在水源11小麦叶片中分离得到1个新的小麦葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因TaG6PDH1后进行基因序列特征和启动子元件组成分析,并利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术对其在PEG模拟干旱胁迫下的表达特征进行分析。结果表明,TaG6PDH1基因的cDNA全长1 338bp,编码445个氨基酸。TaG6PDH1蛋白具有典型的G6DPH结构,即C-端葡萄糖-6-磷酸结合激活序列、N-端NAD(P)结合位点和C-端保守的Cys位点。系统进化分析表明,TaG6PDH1蛋白与质体型G6PDH中的P2型相似性较高,其与OsG6PDH5有极高的同源性。启动子区域分析表明,所选区域包含核心启动子和上游应答元件,该区域为TaG6PDH1基因转录的启动子区域,在该区域存在的顺式作用元件有ERF1与HMG-I/Y等,在调控植物防卫反应中有重要的生物学意义。qRT-PCR分析表明,TaG6PDH1基因在PEG模拟干旱胁迫下从6h开始被上调,48h被上调最大,说明TaG6PDH1基因参与了小麦干旱应答防卫反应,其可能作为一种正调控因子参与到小麦的防卫反应信号途径中。 展开更多

关键词 小麦 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 干旱胁迫 TaG6PDH1基因

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葡萄糖6-磷酸脱氢酶调控细胞周期蛋白E1和细胞周期蛋白依赖性激酶2促进细胞增殖及其在肾透明细胞癌中的预后价值 被引量：3

11

作者 杨哲 倪月莉 +7 位作者 王舒婕 刘文静 朱玉芝 车蓉 段友斌 况应敏 朱月春 张巧 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期658-670,共13页

肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是一种转移率高、预后差的细胞代谢性疾病,对其有效诊疗及预后分子标志物的研究十分重要。葡萄糖6-磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphatedehydrogenase,G6PD)在ccRCC中高表达,并提示患... 肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是一种转移率高、预后差的细胞代谢性疾病,对其有效诊疗及预后分子标志物的研究十分重要。葡萄糖6-磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphatedehydrogenase,G6PD)在ccRCC中高表达,并提示患者不良预后,其促进ccRCC细胞增殖的分子机制有待进一步揭示。本研究发现,降低G6PD可抑制细胞周期G_(1)/S期转化并显著抑制ccRCC细胞增殖。G6PD可在细胞水平调控G_(1)/S期转化及增殖相关因子Cyclin D1,CDK4,CDK6,Cyclin E1和CDK2基因表达。TCGA数据库分析结果表明,ccRCC中Cyclin D1,Cyclin E1和CDK2的mRNA水平显著升高,而CDK4表达无明显差异,CDK6表达却显著降低。相关性分析结果显示,G6PD与Cyclin D1呈显著负相关(P<0.0001),G6PD与CDK4,CDK6之间无显著相关性(P>0.05),G6PD与Cyclin E1(P<0.0001)以及CDK2(P<0.05)显著正相关。进一步免疫组化检测结果表明,Cyclin E1和CDK2在ccRCC肿瘤组织中表达显著升高。生存预后分析结果显示,Cyclin D1高表达提示ccRCC患者整体预后更为良好,CDK4和CDK6表达水平在ccRCC患者总生存率预测中无意义;而Cyclin E1和CDK2高表达均可提示ccRCC患者预后不良。进一步细胞水平检测发现,Cyclin E1、CDK2表达降低可显著逆转G6PD促进ccRCC细胞增殖的能力。综上,与增殖相关因子Cyclin D1,CDK4和CDK6相比,G6PD有可能通过促进Cyclin E1和CDK2表达升高而发挥促进ccRCC肿瘤细胞增殖的作用,并且这3者的异常高表达有望成为ccRCC患者不良预后的独立生存预测因素。 展开更多

关键词 肾透明细胞癌 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 细胞周期蛋白 E1 细胞周期蛋白依赖性激酶2 增殖

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香茅醇假单胞菌SJTE-3的短链脱氢酶SDR-X1的克隆及酶性质测定

12

作者 付雅丽 彭万里 +2 位作者 林双君 邓子新 梁如冰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期121-129,共9页

香茅醇假单胞菌SJTE-3能够以17β-雌二醇为唯一碳源并将其高效降解,但其催化雌二醇转化的关键酶仍不明确。本文鉴定了该菌株中降解雌二醇的短链脱氢酶SDR-X1(WP_043267487.1),并对其功能进行了研究。首先利用荧光定量PCR,检测了不同碳... 香茅醇假单胞菌SJTE-3能够以17β-雌二醇为唯一碳源并将其高效降解,但其催化雌二醇转化的关键酶仍不明确。本文鉴定了该菌株中降解雌二醇的短链脱氢酶SDR-X1(WP_043267487.1),并对其功能进行了研究。首先利用荧光定量PCR,检测了不同碳源条件下基因sdr-x1的转录水平;克隆基因sdr-x1,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,利用亲和层析纯化获得了重组蛋白SDR-X1;体外检测了重组蛋白SDR-X1的催化活性与酶学性质,并利用高效液相色谱鉴定了其转化17β-雌二醇的产物。蛋白SDR-X1可被17β-雌二醇诱导表达;蛋白序列比对显示蛋白SDR-X1含有短链脱氢酶的保守基序与氨基酸。该酶以NAD+为辅因子,将17β-雌二醇氧化为雌酮;其K_(m)值为(0.03986±0.004061)mmol/L,V_(max)值为(3.168±0.135)mmol/L/min/mg,可在15 min内转化61.75%以上的雌二醇。该酶对温度具有一定耐受性,最佳反应温度为50℃,偏碱性pH可促进其酶促反应。不同二价金属离子对该酶活性具有不同的影响,Mg^(2+)、Mn^(2+)和Ca^(2+)可增强其酶活性。香茅醇假单胞菌SJTE-3中的SDR-X1可高效催化17β-雌二醇转化,参与该菌株的雌激素降解过程,其功能研究将推进细菌的雌激素代谢机制解析。 展开更多

关键词 香茅醇假单胞菌SJTE-3 短链脱氢酶SDR-X1 17Β-雌二醇 雌酮 生物降解

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酶法测定1-磷酸葡萄糖的含量

13

作者 陆婷婷 吕浩 +1 位作者 魏秀丽 应汉杰 《南京工业大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第6期78-80,共3页

建立反应液中1-磷酸葡萄糖(G-1-P)的测定方法.分别在样品中加入PGluM(EC5.4.2.2)、G6P-DH(ECl.1.1.49)和氧化型辅酶Ⅱ(β-NADP),通过测定还原型辅酶Ⅱ(β-NADPH)吸光值的变化(△A)来确定样品中G-1-P的含量.G-1-P在0～400 mg/L范围内与△... 建立反应液中1-磷酸葡萄糖(G-1-P)的测定方法.分别在样品中加入PGluM(EC5.4.2.2)、G6P-DH(ECl.1.1.49)和氧化型辅酶Ⅱ(β-NADP),通过测定还原型辅酶Ⅱ(β-NADPH)吸光值的变化(△A)来确定样品中G-1-P的含量.G-1-P在0～400 mg/L范围内与△A呈线性关系,r2=0.999 8,其平均回收率为100.88%(RSD=0.52%).该法快速、灵敏、准确. 展开更多

关键词 1-磷酸葡萄糖 葡萄糖磷酸变位酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 酶法测定

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siRNA沉默G6PD对人结肠癌细胞HIF-1α表达的影响 被引量：7

14

作者 张德太 张科 +1 位作者 杨文 胡丽华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1544-1548,共5页

目的:研究siRNA干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因表达的LoVo细胞在低氧环境中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平的变化及其对低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法:构建靶向G6PD基因的siRNA干扰质粒载体,并转染人结肠... 目的:研究siRNA干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因表达的LoVo细胞在低氧环境中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平的变化及其对低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法:构建靶向G6PD基因的siRNA干扰质粒载体,并转染人结肠癌细胞株(LoVo),用限制性内切酶法结合DNA测序鉴定特异重组子,RT-PCR检测G6PD mRNA表达,结合G6PD活性测定判断其干扰效率;以未转染LoVo细胞为对照,进一步观察G6PD沉默的瘤细胞在低氧环境下NADPH水平的变化,RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达水平,West-ern blotting检测HIF-1α蛋白水平。结果:成功构建靶向G6PD的siRNA重组质粒载体并稳定转染LoVo细胞。与未转染组细胞相比,RNA干扰G6PD使mRNA表达下降43%,酶活性下降63.5%,细胞内NADPH水平显著下降(41%vs 100%,P<0.05),但HIF-1αmRNA表达水平无明显变化,而HIF-1α蛋白显著降低。结论:低氧环境下,G6PD基因可能通过下调NADPH水平从而降低HIF-1α的稳定性,导致其水平下降,进而影响肿瘤细胞的低氧反应。 展开更多

关键词 siRNA 低氧诱导因子1Α 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 LOVO细胞

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人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用 被引量：10

15

作者 吴胜斌 王应灯 《世界中医药》 CAS 2018年第8期2010-2014,共5页

目的:探讨人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用。方法:通过基于细胞的肾脏保护试验,研究了发酵黑参(FBG)及其活性成分人参皂苷20(S)-Rg3对猪肾(LLC-PK1)细胞中顺铂(化疗药物)诱导的损伤的保护作用。结果:由顺铂... 目的:探讨人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用。方法:通过基于细胞的肾脏保护试验,研究了发酵黑参(FBG)及其活性成分人参皂苷20(S)-Rg3对猪肾(LLC-PK1)细胞中顺铂(化疗药物)诱导的损伤的保护作用。结果:由顺铂诱导的细胞活力降低,再使用FBG提取物和人参皂苷20(S)-Rg3依赖剂量后明显恢复。用FBG提取物或人参皂苷20(S)-Rg3处理后会降低顺铂诱导升高与磷酸化c-Jun N-末端激酶(JNK),p53和裂解的半胱天冬酶-3升高的蛋白。通过用FBG和人参皂苷20(S)-Rg3的共同处理,由于顺铂的诱导导致凋亡LLC-PK1细胞升高的百分比显著降低。结论:人参皂苷20(s)-Rg3可改善LLC-PK1的细胞毒性,人参皂苷20(S)-RG3可能是通过阻断JNK-P53-caspase-3信号级联反应来介导这种作用的重要组成部分。 展开更多

关键词 顺铂 人参皂苷20(S)-Rg3 llc-pk1细胞 c-Jun N-末端激酶 肾毒性 发酵黑参 丝裂原活化蛋白激酶 细胞外调节蛋白激酶 磷酸脱氢酶 甘油醛-3-磷酸脱氢酶

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siRNA沉默转酮醇酶样蛋白1基因对人肝癌HepG2细胞生长微环境的影响 被引量：1

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作者 张德太 左曙荣 +3 位作者 杨文 张科 宋斌 涂启明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1383-1387,共5页

目的:通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及NADPH/NADP+比值的影响,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与其转移特性的内在联系。方法:用构建的靶向TKTL... 目的:通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及NADPH/NADP+比值的影响,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与其转移特性的内在联系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HepG2细胞株,RT-PCR检测TKTL1 mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HepG2细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞内乳酸生成水平、GSH含量、NADPH/NADP+比值及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的变化。结果:siRNA沉默HepG2细胞TKTL1基因后TKTL1 mRNA表达下降、TKT活性显著降低(P<0.01),乳酸生成、GSH水平及NADPH/NADP+比值较对照组细胞均显著降低(P<0.01),但G-6-PD活性无明显变化(P>0.05)。结论:肿瘤可能通过TKTL1高表达调整葡萄糖代谢从而改变乳酸及氧化自由基生成,使细胞生长微环境利于肿瘤转移。 展开更多

关键词 RNA 小干扰 转酮醇酶样蛋白1 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 HEPG2细胞

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LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移 被引量：7

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作者 李帅 董震 +1 位作者 王晓晨 丁涛 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期294-298,共5页

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇... 目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 骨肉瘤 miR⁃337⁃3p 甘油-3-磷酸脱氢酶1

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G6PD缺陷通过Caspase-3和PARP-1诱导人黑色素瘤细胞凋亡 被引量：3

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作者 郝晓培 任娜 +4 位作者 唐琼玲 张春华 胡滔 陈龙 朱月春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1121-1127,共7页

葡糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在许多肿瘤细胞中高表达,但其发生的作用机理目前仍然不明确.以正常人表皮黑色素细胞(HEM)、野生型人黑色素瘤A375细胞(A375-WT)和G6PD缺陷的A375细胞(A375-G6PDΔ)为对象,经real-time PCR、Western印迹和紫外... 葡糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在许多肿瘤细胞中高表达,但其发生的作用机理目前仍然不明确.以正常人表皮黑色素细胞(HEM)、野生型人黑色素瘤A375细胞(A375-WT)和G6PD缺陷的A375细胞(A375-G6PDΔ)为对象,经real-time PCR、Western印迹和紫外分光光度法分析显示,A375-WT细胞的mRNA、G6PD蛋白和G6PD活性分别是HEM细胞的1.89倍(P<0.05)、6.86倍(P<0.01)和2.30倍(P<0.05).Annexin V/PI流式细胞仪和Western印迹测定表明,A375-G6PDΔ的凋亡率是A375-WT的5.10倍(P<0.01),活化半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)增高1.84倍(P<0.01)以及89 kD多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)生成增加2.87倍(P<0.01).分光光度法分析显示,A375-G6PDΔ的NADPH和GSH分别降低了72.30%(P<0.01)和27.39%(P<0.05),并伴有75.43%的H2O2增高(P<0.01).结果提示,G6PD在黑色素瘤细胞中高表达和高活性,而敲减G6PD表达通过caspase-3和PARP-1信号诱发人黑色素瘤细胞凋亡,这为深入揭示黑色素瘤的发生机理提供了新思路。 展开更多

关键词 葡糖-6-磷酸脱氢酶 黑色素瘤 半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3) 多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1) 细胞凋亡

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在明串珠菌中构建葡萄糖到甘露醇的转化体系 被引量：1

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作者 金红星 王星 彭钰玮 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期96-100,108,共6页

为了进一步提高甘露醇产量,在明串珠菌构建了葡萄糖到甘露醇的转化体系。通过2次同源重组,将mt1d-m1p表达盒串联体定点插入到染色体上。以90g/L蔗糖为底物时,野生型菌株的甘露醇产量为31.48g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)为42.63g/L,Δaldh::(m... 为了进一步提高甘露醇产量,在明串珠菌构建了葡萄糖到甘露醇的转化体系。通过2次同源重组,将mt1d-m1p表达盒串联体定点插入到染色体上。以90g/L蔗糖为底物时,野生型菌株的甘露醇产量为31.48g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)为42.63g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)Δdts::amy为43.47g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)Δdts::(mt1d-m1p)为45.74g/L,Δdts1ΔD-ldhΔpat::mdhΔstpk::mdhΔfk::mdhΔaldh::(mt1d-m1p)为47.26g/L。增加甘露醇的合成途径是增产的手段之一。 展开更多

关键词 甘露醇 明串珠菌 葡萄糖 甘露醇-1-磷酸脱氢酶 甘露醇-1-磷酸酶

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蔷薇科植物中山梨醇代谢酶的研究进展 被引量：19

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作者 梁东 马锋旺 +2 位作者 管清美 张军科 徐凌飞 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第7期1362-1366,共5页

蔷薇科植物中,与山梨醇代谢相关的酶主要有:6-磷酸山梨醇脱氢酶、山梨醇脱氢酶和山梨醇氧化酶。综述了近些年来国内外关于这几种酶的研究进展,涉及的内容有:酶的性质与作用、酶的活性变化与转录的关系,及其在生物技术方面的研究成果,并... 蔷薇科植物中,与山梨醇代谢相关的酶主要有:6-磷酸山梨醇脱氢酶、山梨醇脱氢酶和山梨醇氧化酶。综述了近些年来国内外关于这几种酶的研究进展,涉及的内容有:酶的性质与作用、酶的活性变化与转录的关系,及其在生物技术方面的研究成果,并对今后的研究工作进行了展望。 展开更多

关键词 蔷薇科植物 山梨醇 6-磷酸山梨醇脱氢酶 山梨醇脱氢酶 山梨醇氧化酶

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