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广东甘蔗宿根矮化病菌的分离培养及鉴定 被引量:5
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作者 陈健文 刘睿 +2 位作者 沈万宽 杨湛端 邓海华 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第8期68-70,共3页
利用改良的SC培养基,从甘蔗蔗汁中分离培养到一种杆状细菌,根据菌落的形态特征,并结合血清学和PCR检测方法,确认所分离到的菌是甘蔗宿根矮化病的致病菌Leifsonia xyli subsp.xyli。该菌的分离培养在广东还是首次报道,这使分离高纯度的... 利用改良的SC培养基,从甘蔗蔗汁中分离培养到一种杆状细菌,根据菌落的形态特征,并结合血清学和PCR检测方法,确认所分离到的菌是甘蔗宿根矮化病的致病菌Leifsonia xyli subsp.xyli。该菌的分离培养在广东还是首次报道,这使分离高纯度的甘蔗宿根矮化病菌DNA成为可能,促进了该菌以DNA为基础的检测方法的发展,同时也为今后对该菌开展遗传多样性等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 甘蔗宿根矮化病菌 分离培养 鉴定
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甘蔗宿根矮化病菌多克隆抗体制备及初步检测 被引量:1
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作者 陈健文 杨湛端 +7 位作者 刘睿 沈万宽 齐永文 何方洋 万宇平 余厚美 徐苑娴 邓海华 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期134-136,共3页
以纯化培养的甘蔗宿根矮化病(RSD)病菌作为抗原,免疫健康家兔,制备了RSD多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附试验检测其效价,并通过斑点酶标免疫法(Dot blot enzyme immunoassays,DB-EIA)确定其工作浓度,同时与澳大利亚的抗体比较。结果表... 以纯化培养的甘蔗宿根矮化病(RSD)病菌作为抗原,免疫健康家兔,制备了RSD多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附试验检测其效价,并通过斑点酶标免疫法(Dot blot enzyme immunoassays,DB-EIA)确定其工作浓度,同时与澳大利亚的抗体比较。结果表明,制备的RSD多克隆抗体效价大于1∶10000,在用DB-EIA法检测样本时的工作浓度以稀释10倍较好;与澳大利亚抗体的检测结果一致,但在印迹着色方面比澳大利亚的浅一些。试验结果表明,自制RSD抗体的效价略低于澳大利亚RSD抗体,但检测效果较好,可以满足今后在甘蔗生产上对RSD的检测要求。 展开更多
关键词 甘蔗宿根矮化病菌 多克隆抗体 制备
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甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用
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作者 李文凤 卢文洁 +3 位作者 黄应昆 王明强 王晓燕 罗志明 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期598-601,共4页
为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病(ratoon stuning disease,RSD)的PCR检测方法。本文通过改进模板DNA的制备方法,在PCR基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)16S-23SrDNA基因间隔区特异性引物,调整PC... 为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病(ratoon stuning disease,RSD)的PCR检测方法。本文通过改进模板DNA的制备方法,在PCR基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)16S-23SrDNA基因间隔区特异性引物,调整PCR扩增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子,优化PCR反应体系。此检测体系能从感染RSD的样品中扩增出大小为438 bp的特异性片段,而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断;未优化仅从稀释30倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段,优化后可以从稀释3 000倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段。对31份田间采集样品检测,未优化的阳性检出率为32.26%;优化后阳性检出率74.19%,与I-ELISA检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染RSD,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。 展开更多
关键词 甘蔗宿根矮化病菌 PCR检测 16S-23SrDNA 间接酶联免疫吸附法
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