甘油脱水酶结构基因(gldABC)克隆及序列分析 被引量：2

1

作者 郑艳 管艺飞 刘长江 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期203-205,共3页

以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(gldABC)并将该基因克隆到pMD19-TSimple载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(gldABC)结构基因的全长为2816bp,由三个独立的开放阅读框架组成,三个独立的读... 以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(gldABC)并将该基因克隆到pMD19-TSimple载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(gldABC)结构基因的全长为2816bp,由三个独立的开放阅读框架组成,三个独立的读码框分别由1668、585、426bp组成,分别编码556、195、142个氨基酸。通过BLAST同源性分析,该基因与GenBank中已发表的gldABC基因(U60992)的核苷酸序列同源性为99.39%。氨基酸的同源性为100%。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯氏菌 1 3-丙二醇 甘油脱水酶 克隆

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甘油脱水酶基因(gldABC)与1,3-丙二醇氧化还原酶基因(dhaT)的共表达 被引量：1

2

作者 郑艳 管艺飞 刘长江 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期12-14,共3页

将dhaT基因片段以顺反子的形式插入到重组质粒pMD19TS2中gldABC基因的下游,形成重组克隆质粒pMD19TS3,进而将gldABC与dhaT基因以多顺反子的形式亚克隆至pET-28a(+)表达载体上。终浓度为1mmol/L IPTG诱导重组大肠杆菌E.coli/pET-28a(+)/g... 将dhaT基因片段以顺反子的形式插入到重组质粒pMD19TS2中gldABC基因的下游,形成重组克隆质粒pMD19TS3,进而将gldABC与dhaT基因以多顺反子的形式亚克隆至pET-28a(+)表达载体上。终浓度为1mmol/L IPTG诱导重组大肠杆菌E.coli/pET-28a(+)/gldABC-dhaT 2h,SDS-PAGE电泳分析结果表明分别在甘油脱水酶三个亚基分子量相对应的61ku、21ku、16ku和1,3-丙二醇氧化还原酶亚基分子量相对应的42 ku的位置上出现了特异性条带。上清液中酶活性分别为甘油脱水酶23.7U/mL,1,3-丙二醇氧化还原酶30.4 U/mL。 展开更多

关键词 甘油脱水酶基因(gldABC) 1 3-丙二醇氧化还原酶基因(dhaT) 共表达

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Klebsiella pneumoniae甘油脱水酶α亚基基因的克隆与序列分析 被引量：1

3

作者 邵敬伟 刘长江 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2004年第2期27-30,共4页

甘油脱水酶是1,3 丙二醇发酵过程中的重要限速酶,具有很好的工业应用前景.其中α亚基为甘油脱水酶的主要组成部分,该基因的正确克隆与分析对甘油脱水酶的正确表达起重要作用.作者采用PCR技术,从肺炎克雷伯氏杆菌A.S.1.1736基因组中扩增... 甘油脱水酶是1,3 丙二醇发酵过程中的重要限速酶,具有很好的工业应用前景.其中α亚基为甘油脱水酶的主要组成部分,该基因的正确克隆与分析对甘油脱水酶的正确表达起重要作用.作者采用PCR技术,从肺炎克雷伯氏杆菌A.S.1.1736基因组中扩增得到了编码甘油脱水酶α亚基的gldA基因,并将其克隆至pMD18 T载体中.经核苷酸序列分析证实,gldA基因开放阅读框架由1668bp组成.经GenBank检索对照分析,gldA基因序列与国外文献报道的同源性达99.34%,表明所克隆的gldA基因即为克雷伯氏甘油脱水酶α亚基基因. 展开更多

关键词 肺炎克雷伯氏杆菌 甘油脱水酶 Α亚基基因 基因克隆 基因序列

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克雷伯氏菌甘油脱水酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1

4

作者 洪解放 邹少兰 +1 位作者 张鸿达 张鲲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期6-9,共4页

利用PCR技术从K.pneumoniae AS1.1736总DNA中扩增得到甘油脱水酶基因(dhaB)的DNA片段,将其连接至载体pGEM-Teasyvector,经测序正确后亚克隆至载体pET28a(+),转化至E.coli BL21(DE3)中,得到的重组菌能高效表达甘油脱水酶(DHAB)。对其进... 利用PCR技术从K.pneumoniae AS1.1736总DNA中扩增得到甘油脱水酶基因(dhaB)的DNA片段,将其连接至载体pGEM-Teasyvector,经测序正确后亚克隆至载体pET28a(+),转化至E.coli BL21(DE3)中,得到的重组菌能高效表达甘油脱水酶(DHAB)。对其进行了诱导表达研究,并对DHAB的一些基本性质进行了初步探讨。结果表明,37℃,IPTG浓度1.0mmol/L,诱导2h重组菌DHAB比活力最高;该酶最适温度为37℃,最适pH为8.0。在优化条件下,酶的比活力可达到8.75U/(mg.min)。 展开更多

关键词 1 3-丙二醇 甘油脱水酶 诱导 酶活力

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辅酶依赖型和不依赖型甘油脱水酶的比较 被引量：1

5

作者 杨仲丽 方柏山 +2 位作者 余劲聪 王庆花 李梓君 《华侨大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第5期542-547,共6页

实验比较源自肺炎克氏杆菌(K.pneumoniae)和丁酸梭状芽孢杆菌(C.butyricum)中的甘油脱水酶(GDHt)的辅酶依赖特性.采用生物信息学的方法,对两种酶的异同点进行分析,发现两种酶结构上相似性较低、亲缘性较远、分属于两个不同的家族.SMART... 实验比较源自肺炎克氏杆菌(K.pneumoniae)和丁酸梭状芽孢杆菌(C.butyricum)中的甘油脱水酶(GDHt)的辅酶依赖特性.采用生物信息学的方法,对两种酶的异同点进行分析,发现两种酶结构上相似性较低、亲缘性较远、分属于两个不同的家族.SMART数据库搜索结果表明,C.butyricum中不依赖辅酶的甘油脱水酶及其再激活酶,分别属于gly-Radical和Radical-SAM家族,多序列比对得到的一段富含半胱氨酸残基C**C**C的保守序列正是其共同特征. 展开更多

关键词 肺炎克氏杆菌 丁酸梭状芽孢杆菌 辅酶 甘油脱水酶 维生素B12 依赖性

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甘油脱水酶的研究进展

6

作者 王庆花 方柏山 《华侨大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第2期125-129,共5页

甘油脱水酶是微生物发酵法生产3-羟基丙醛和1,3-丙二醇过程中的关键限速酶.文中对甘油脱水酶的结构与功能、作用机制、基因工程研究等情况进行综述,探讨了甘油脱水酶的研究进展并提出一些建议.

关键词 甘油脱水酶 生物转化法 结构功能 作用机制 基因工程

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咪唑甘油磷酸酯脱水酶与含氮杂环磷酸酯类抑制剂作用方式的分子模拟 被引量：2

7

作者 申涛 杜凤沛 +5 位作者 刘婷 姚广伟 吴峥 方萌萌 徐筱杰 路慧哲 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1831-1838,共8页

国际上依据咪唑甘油磷酸酯脱水酶(IGPD)底物结构筛选,成功获得了一系列含氮杂环磷酸酯类化合物作为IGPD抑制剂,然而IGPD与含氮杂环磷酸酯类抑制剂间的作用模式尚不清楚.本研究利用Gaussian 03程序,基于密度泛函理论B3LYP方法,选择6-31G*... 国际上依据咪唑甘油磷酸酯脱水酶(IGPD)底物结构筛选,成功获得了一系列含氮杂环磷酸酯类化合物作为IGPD抑制剂,然而IGPD与含氮杂环磷酸酯类抑制剂间的作用模式尚不清楚.本研究利用Gaussian 03程序,基于密度泛函理论B3LYP方法,选择6-31G**基组优化含氮杂环磷酸酯类化合物,在确定其稳定构象的基础上利用分子对接、力学优化构建IGPD与其含氮杂环磷酸酯类抑制剂相互作用的复合物结构,基于化合物的电子结构(前线轨道能级及组成、原子电荷、自然键轨道等)、复合物的空间结构(抑制剂识别IGPD的功能域、分子间氢键、van der Waals相互作用等)探讨了IGPD与含氮杂环磷酸酯类抑制剂作用方式,确定了含氮杂环电荷分布、磷酸根离子电荷分布、前线轨道LUMO能级是影响抑制剂活性的内在因素,为进一步筛选、优化高效的新型除草剂提供了重要信息. 展开更多

关键词 咪唑甘油磷酸酯脱水酶 抑制剂 分子对接 力学优化 密度泛函理论 前线轨道

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甘油发酵生产3-羟基丙酸的代谢改造工程菌研究进展 被引量：3

8

作者 牛坤 秦海彬 +1 位作者 柳志强 郑裕国 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期234-240,共7页

3-羟基丙酸是一种重要的平台化合物,可以用来合成许多重要的化工中间体及工业化工产品,被美国能源部列为当前最具潜力的12种化工产品之一。文中就近年来以大肠杆菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)作为宿主... 3-羟基丙酸是一种重要的平台化合物,可以用来合成许多重要的化工中间体及工业化工产品,被美国能源部列为当前最具潜力的12种化工产品之一。文中就近年来以大肠杆菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)作为宿主进行代谢改造合成3-羟基丙酸的相关研究进行了总结,介绍了当前以甘油为底物发酵合成3-羟基丙酸的主要研究成果,并针对目前存在的问题加以展望,旨在为3-羟基丙酸的工业化生产提供参考。 展开更多

关键词 甘油 3-羟基丙酸 甘油脱水酶 醛脱氢酶

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罗伊乳杆菌转化甘油能力的原位再激活 被引量：2

9

作者 王珍珠 陈国 陈宏文 《华侨大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期414-417,共4页

考察罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)静息细胞转化甘油的重复利用,甘油脱水酶的原位再激活,以及补加培养基对再激活甘油脱水酶的变化.结果表明:菌体经二次转化后基本丧失转化能力,甘油对胞内甘油脱水酶具有强烈的抑制灭活作用;确证胞内存在甘... 考察罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)静息细胞转化甘油的重复利用,甘油脱水酶的原位再激活,以及补加培养基对再激活甘油脱水酶的变化.结果表明:菌体经二次转化后基本丧失转化能力,甘油对胞内甘油脱水酶具有强烈的抑制灭活作用;确证胞内存在甘油脱水酶再激活体系;不具转化甘油能力的L.reuteri可被补加的培养基在一定程度上再激活,使其能够重复利用. 展开更多

关键词 罗伊氏乳杆菌 甘油脱水酶 原位再激活 静息细胞 甘油

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dhaT基因克隆及其与gldABC基因串联表达载体的构建

10

作者 郑艳 刘长江 管艺飞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期43-46,共4页

以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(dhaT)并将该基因克隆至pMD19-T Simple载体。基因的序列分析表明,dhaT基因全长为1164bp,编码387个氨基酸。将含有自身核糖体结合位点的dhaT基因片段插入到pMD19-T... 以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(dhaT)并将该基因克隆至pMD19-T Simple载体。基因的序列分析表明,dhaT基因全长为1164bp,编码387个氨基酸。将含有自身核糖体结合位点的dhaT基因片段插入到pMD19-T Simple/gldABC质粒的gldABC基因下游,形成重组克隆质粒pMD19-T Simple/gldABC-dhaT,并进一步将gldABC与dhaT串联基因亚克隆到表达载体pET28a(+)上。 展开更多

关键词 1.3-丙Z-醇氧化还原酶 基因克隆 甘油脱水酶 表达载体构建

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gldABC基因与dhaT基因串联表达载体的构建

11

作者 郑艳 管艺飞 刘长江 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2007年第2期38-41,共4页

以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过基因扩增仪(PCR)扩增得到了目的基因(gldABC)并将该基因克隆到pMD19-TSimple载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(gldABC)结构基因的全长为2816bp。将限制性内切酶处理后的含有自... 以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过基因扩增仪(PCR)扩增得到了目的基因(gldABC)并将该基因克隆到pMD19-TSimple载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(gldABC)结构基因的全长为2816bp。将限制性内切酶处理后的含有自身核糖体结合位点的dhaT基因插入到质粒pMD19-T Simple/gldABC中gldABC基因的下游,形成重组克隆质粒pMD19-T Simple/gldABC-dhaT,并进一步将gldABC与dhaT串联基因亚克隆到表达载体pET28a(+)上。 展开更多

关键词 甘油脱水酶(g1dABc) 克隆 1 3-丙二醇氧化还原酶(dhaT) 表达载体构建

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克雷伯氏肺炎杆菌生产1,3-丙二醇代谢途径中的酶活变化 被引量：2

12

作者 王娅君 赵莉 +2 位作者 徐佳杰 付水林 宫衡 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期481-484,共4页

考察了不同条件下克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella.pneumoniae)合成1,3-丙二醇(1,3-PD)的3种关键酶(甘油脱氢酶(GDH)、1,3-PD氧化还原酶(PDOR)及甘油脱水酶(GDHz))的表观酶活变化。结果显示:这3种酶的酶活变化与Klebsiella.pneumoniae的1,3... 考察了不同条件下克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella.pneumoniae)合成1,3-丙二醇(1,3-PD)的3种关键酶(甘油脱氢酶(GDH)、1,3-PD氧化还原酶(PDOR)及甘油脱水酶(GDHz))的表观酶活变化。结果显示:这3种酶的酶活变化与Klebsiella.pneumoniae的1,3-PD代谢不完全相关。用SDS-PAGE电泳分析上述不同发酵条件下酶活变化,结果显示不同于3种酶的蛋白条带,Mr约为4.0×104位置的蛋白条带有明显的变化,这可能与菌体代谢过程相关,结论有待进一步深入研究。 展开更多

关键词 克雷伯氏肺炎杆菌 甘油脱氢酶 1 3-丙二醇氧化还原酶 甘油脱水酶

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