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猪卵母细胞玻璃化冷冻损伤的缓解策略 被引量：3
1
作者 孙雅雯 陈思颍 +3 位作者 李伉 冷璇 王栋 庞云渭 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期36-44,共9页
卵母细胞的冷冻保存是人类和动物辅助生殖中长期储存遗传资源的重要策略之一。然而,由于卵母细胞的表面积/体积比小、细胞渗透性差,在冷冻过程中极易受到冰晶形成、渗透性休克、氧化应激和冷冻保护剂毒性等损伤,严重降低其解冻后的发育... 卵母细胞的冷冻保存是人类和动物辅助生殖中长期储存遗传资源的重要策略之一。然而,由于卵母细胞的表面积/体积比小、细胞渗透性差,在冷冻过程中极易受到冰晶形成、渗透性休克、氧化应激和冷冻保护剂毒性等损伤,严重降低其解冻后的发育能力。与其他动物相比,猪卵母细胞中丰富的脂滴含量降低了其低温耐受性,冷冻保存难度更大。尽管可以从玻璃化未成熟卵母细胞中获得活仔猪,但与新鲜卵母细胞相比,玻璃化冷冻卵母细胞的发育能力还有待进一步提升。本文主要从玻璃化冷冻猪卵母细胞的损伤类型、受损机制、缓解冷冻损伤的策略等方面进行综述,为进一步建立和完善猪卵母细胞玻璃化冷冻保存方案提供参考。 展开更多
关键词 猪 卵母细胞 玻璃化冷冻 冷冻损伤
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基于scWGBS探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚基因组甲基化水平的影响
2
作者 杨柏高 徐皆欢 +4 位作者 张亮 龙熙 戴建军 赵学明 潘红梅 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期222-231,共10页
旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation, PA)囊胚基因组甲基化水平的影响。以猪第6天PA囊胚为研究对象,分别采用常规玻璃化冷冻液(玻璃化冷冻Ⅰ组)和改良玻璃化冷冻液(玻璃化冷冻Ⅱ组)进行玻璃化冷冻-复苏试验,每... 旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation, PA)囊胚基因组甲基化水平的影响。以猪第6天PA囊胚为研究对象,分别采用常规玻璃化冷冻液(玻璃化冷冻Ⅰ组)和改良玻璃化冷冻液(玻璃化冷冻Ⅱ组)进行玻璃化冷冻-复苏试验,每组选择3枚复苏形态良好的囊胚用于单细胞全基因组甲基化测序(single cell whole-genome bisulfite sequencing, scWGBS),分析囊胚基因组甲基化水平变化。结果显示,与新鲜组相比,玻璃化冷冻Ⅰ组猪PA囊胚的基因组整体甲基化水平极显著降低(18%vs. 20.9%,P<0.01),而玻璃化冷冻Ⅱ组显著升高(21.5%vs. 20.9%,P<0.05)。与新鲜组相比,在玻璃化冷冻Ⅰ组共鉴定到2 717个差异甲基化区域(differential methylation region, DMR),而在玻璃化冷冻Ⅱ组共鉴定到1 964个DMRs。基因功能富集分析结果显示,玻璃化冷冻导致胚胎发育、ATP代谢、MAPK信号通路、Wnt信号通路等生物学过程相关基因的甲基化水平发生紊乱。在玻璃化冷冻Ⅱ组中,Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路和mTOR信号通路等生物学过程更为活跃。综上所述,玻璃化冷冻改变猪PA囊胚基因组甲基化水平,其可能通过扰乱胚胎发育、ATP代谢、MAPK信号通路、Wnt信号通路等相关基因的甲基化水平进而损害猪PA囊胚冻后发育。此外,Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路和mTOR信号通路可作为缓解玻璃化冷冻损伤的候选途径。 展开更多
关键词 猪 孤雌激活 囊胚 玻璃化冷冻 scWGBS
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甘氨酸提高水貂卵母细胞玻璃化冷冻保存效率的关键机制
3
作者 唐毓 张颖 +3 位作者 杨镒峰 薛海龙 刘理想 许保增 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3265-3277,共13页
旨在利用小分子渗透剂甘氨酸具有优化细胞体积调控的作用机理,探究水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻/解冻以及体外成熟(in vitro maturation,IVM)过程中添加甘氨酸对提高卵母细胞冷冻保存效率的影响。本试验在水貂繁殖季节(2~3月份)取1~3岁... 旨在利用小分子渗透剂甘氨酸具有优化细胞体积调控的作用机理,探究水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻/解冻以及体外成熟(in vitro maturation,IVM)过程中添加甘氨酸对提高卵母细胞冷冻保存效率的影响。本试验在水貂繁殖季节(2~3月份)取1~3岁性成熟雌性水貂的卵巢,收集的卵母细胞随机分成3组,分别为对照组、冷冻组以及甘氨酸组,每组至少20枚卵母细胞,每次试验至少重复3次。在玻璃化冷冻、解冻以及随后的体外成熟过程中添加5 mmol·L^(-1)甘氨酸,检测卵母细胞的存活率,体外成熟培养后细胞的核成熟率、线粒体和皮质颗粒分布情况、卵母细胞的活性氧(ROS)水平、细胞凋亡以及组蛋白修饰。利用qRT-PCR和免疫荧光分析凋亡相关基因和DNMT1表达。研究表明,经甘氨酸处理后的玻璃化冷冻方法显著提高了水貂卵母细胞冷冻后的生物学功能。主要表现为玻璃化以及IVM过程中添加甘氨酸组与玻璃化未添加组的卵母细胞相比,存活率和核成熟率显著提高(P<0.05),成熟卵母细胞的线粒体损伤,皮质颗粒易位,ROS水平发生减少(P<0.05);细胞凋亡率降低,促细胞凋亡相关基因CASP3和BAX的mRNA相对表达水平降低(P<0.05),BCL-2/BAX比值升高(P<0.05);此外,玻璃化冷冻后水貂MII期卵母细胞的DNMT1转录水平(P<0.05)、组蛋白H3K9甲基化表达水平得到明显改善(P<0.05)。综上所述,在玻璃化冷冻过程中添加或去除冷冻保护剂所造成的卵母细胞渗透损伤可通过添加甘氨酸调控卵母细胞体积稳态,提高水貂卵母细胞玻璃化冷冻/解冻后的发育能力。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 水貂卵母细胞 甘氨酸 体积调控
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基于拉曼光谱分析猪卵母细胞玻璃化冷冻前后变化
4
作者 陈思颍 李伉 +3 位作者 孙雅雯 冷璇 王栋 庞云渭 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期4998-5006,共9页
旨在应用拉曼光谱技术研究猪体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻前后分子结构的变化。本研究采集屠宰场猪离体卵巢,经实验室抽取卵丘-卵母细胞复合体,体外成熟培养后,分别收集新鲜卵母细胞和玻璃化冷冻-解冻卵母细胞,采用激光共焦拉曼光谱仪获... 旨在应用拉曼光谱技术研究猪体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻前后分子结构的变化。本研究采集屠宰场猪离体卵巢,经实验室抽取卵丘-卵母细胞复合体,体外成熟培养后,分别收集新鲜卵母细胞和玻璃化冷冻-解冻卵母细胞,采用激光共焦拉曼光谱仪获取两组卵母细胞的拉曼光谱信息,对数据进行质控后,分析玻璃化冷冻前后卵母细胞的分子结构变化。结果表明,与新鲜组卵母细胞相比,玻璃化冷冻-解冻组卵母细胞在1020~1140 cm^(-1)的碳水化合物信号范围内,N-乙酰半乳糖胺等碳水化合物成分减少;在1230~1300 cm^(-1)的酰胺III带信号范围内蛋白质二级构象发生显著改变,β-折叠显著增加,α-螺旋减少;在2800~3100 cm^(-1)的脂质信号范围内,长链脂肪酸含量下降,支链脂肪酸含量上升。综上所述,玻璃化冷冻会改变猪卵母细胞蛋白质二级结构、脂肪酸组成及N-乙酰半乳糖胺等关键成分,导致蛋白质结构损伤、脂质组成改变以及碳水化合物代谢异常等多重冷冻损伤。 展开更多
关键词 猪 卵母细胞 拉曼光谱 玻璃化冷冻
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基于Smart-seq2技术探究玻璃化冷冻对牛活检囊胚基因表达的影响
5
作者 董建华 杨柏高 +3 位作者 张笑梦 冯肖艺 赵学明 吕丽华 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第5期754-766,共13页
为探究胚胎活检及后续玻璃化冷冻处理对牛体外受精囊胚基因表达的影响,以牛体外囊胚为研究对象,设置新鲜组(未经任何体外操作的原始胚胎)、活检组(经滋养外胚层活检的胚胎)、活检后玻璃化冷冻组(活检后的胚胎经玻璃化冷冻保存),每组选取... 为探究胚胎活检及后续玻璃化冷冻处理对牛体外受精囊胚基因表达的影响,以牛体外囊胚为研究对象,设置新鲜组(未经任何体外操作的原始胚胎)、活检组(经滋养外胚层活检的胚胎)、活检后玻璃化冷冻组(活检后的胚胎经玻璃化冷冻保存),每组选取3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术进行转录组分析,并在基因本体(gene ontology, GO)数据库及京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)中进行富集分析。结果表明:与新鲜组相比,在活检组中共鉴定到1 083个差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),GO和KEGG富集分析显示,这些DEGs与细胞脂质代谢过程、葡萄糖稳态、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等相关;相较于新鲜组,在活检后玻璃化冷冻组中共鉴定到1 391个DEGs,主要富集于糖异生、全局代谢通路及氨基酸合成等生物学过程;与活检组相比,在活检后玻璃化冷冻组中共鉴定到824个DEGs,主要与丙酮酸代谢、N-聚糖生物合成、细胞衰老等相关。综上所述,本研究基于Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术揭示了玻璃化冷冻对活检后牛体外囊胚脂质代谢、能量代谢、MAPK信号通路等相关基因表达的影响,为优化牛胚胎冷冻保存技术、提升良种胚胎利用率提供了分子靶点与理论依据。 展开更多
关键词 Smart-seq2技术 牛囊胚 玻璃化冷冻 胚胎活检 转录组测序
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马卵母细胞玻璃化冷冻保存研究进展
6
作者 杨明颖 王娜 +5 位作者 刘源壹 李昕俞 巴音那木拉 石玉杰 芒来 杜明 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4143-4155,共13页
卵母细胞的冷冻保存技术对于人类辅助生殖技术和畜牧生产具有重要的意义,该技术有助于优良品种的遗传资源保护和生物多样性的维持。然而,由于卵母细胞具有表面积与体积比值较小、细胞膜渗透性差等特性,其在冷冻过程中极易形成冰晶造成... 卵母细胞的冷冻保存技术对于人类辅助生殖技术和畜牧生产具有重要的意义,该技术有助于优良品种的遗传资源保护和生物多样性的维持。然而,由于卵母细胞具有表面积与体积比值较小、细胞膜渗透性差等特性,其在冷冻过程中极易形成冰晶造成机械损伤、遭受氧化应激和冷冻保护剂毒性等影响,严重降低其解冻后的发育能力。与其他动物相比,马卵母细胞中丰富的脂滴含量降低了其低温耐受性,冷冻保存难度更大。尽管可以从玻璃化冷冻的未成熟卵母细胞中获得后代,但与新鲜卵母细胞相比,经玻璃化冷冻卵母细胞的发育能力还有待进一步提升。本文主要从玻璃化冷冻对马卵母细胞造成的损伤类型和影响马卵母细胞冷冻效率的因素等方面进行综述,为进一步建立和完善马卵母细胞玻璃化冷冻保存方案提供参考。 展开更多
关键词 马 卵母细胞 玻璃化冷冻 冷冻损伤 冷冻保护剂
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绵羊卵母细胞玻璃化冷冻现状与改良策略
7
作者 潘波 秦建鹏 +1 位作者 魏耀宗 周光斌 《中国畜禽种业》 2025年第4期11-23,3,共14页
绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效率低下限制了其商业化应用。尽管目前已有高效的冷冻载体与抗冻保护剂应用于卵母细胞冷冻,但卵母细胞超低温冷冻仍旧难以避免渗透压应激、超微结构损伤、表观修饰异常和代谢异常,致使受精率与囊胚发育率依... 绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效率低下限制了其商业化应用。尽管目前已有高效的冷冻载体与抗冻保护剂应用于卵母细胞冷冻,但卵母细胞超低温冷冻仍旧难以避免渗透压应激、超微结构损伤、表观修饰异常和代谢异常,致使受精率与囊胚发育率依然较低,难以满足畜牧业规模化发展和人类医学上的需要。基于此,该文重点综述了玻璃化冷冻原理、发展历程、绵羊卵母细胞冷冻后的发育及缓解卵母细胞冷冻损伤的策略,以期为提高绵羊卵母细胞冷冻保存效率和加快绵羊种质资源保存提供借鉴与参考。 展开更多
关键词 绵羊卵母细胞 玻璃化冷冻 发育潜力 冷冻损伤
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两组冷冻保护剂对猪合子期胚胎玻璃化冷冻效果的研究
8
作者 屠平光 范雅婷 +3 位作者 楼芳芳 章啸君 胡旭进 项云 《浙江畜牧兽医》 2025年第2期1-3,共3页
为评价两组玻璃化冷冻保护剂对猪合子期胚胎的冷冻效果,本研究以胞浆内单精子注射技术(ICSI)获得合子期胚胎为实验对象,随机分为20%乙二醇(EG)+20%丙二醇(PROH)组与20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO)组。比较观察两组玻璃化冷冻保护剂... 为评价两组玻璃化冷冻保护剂对猪合子期胚胎的冷冻效果,本研究以胞浆内单精子注射技术(ICSI)获得合子期胚胎为实验对象,随机分为20%乙二醇(EG)+20%丙二醇(PROH)组与20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO)组。比较观察两组玻璃化冷冻保护剂对猪合子期胚胎冷冻后胚胎的复苏效果。结果表明,玻璃化冻融后两组在胚胎形态完整率和存活率上无显著差异,但在胚胎卵裂率和囊胚率上EG+PROH组显著高于EG+DMSO(P<0.05)。研究结果为:对猪合子期胚胎玻璃化冷冻,选用EG+PROH作为冷冻保护剂可获得较好的后期发育效果。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 冷冻保护剂 合子期胚胎 猪
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卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期的临床妊娠及围产期结局比较 被引量：3
9
作者 申春艳 张建瑞 +1 位作者 杜姗姗 管一春 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期331-335,共5页
目的:比较卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期临床妊娠及围产期结局的差异。方法:回顾性分析2011年1月至2021年6月在郑州大学第三附属医院生殖医学科接受卵裂期胚胎移植患者的临床资料。选取玻璃化冷冻卵母细胞解冻行卵胞浆内... 目的:比较卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期临床妊娠及围产期结局的差异。方法:回顾性分析2011年1月至2021年6月在郑州大学第三附属医院生殖医学科接受卵裂期胚胎移植患者的临床资料。选取玻璃化冷冻卵母细胞解冻行卵胞浆内单精子注射(ICSI)后新鲜卵裂期胚胎移植周期77个(卵母细胞冷冻组),和同期利用倾向性评分1∶4匹配后得到的新鲜卵母细胞行ICSI后卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏移植周期293个(胚胎冷冻组)。比较2组移植后临床妊娠及围产期结局。结果:卵母细胞冷冻组与胚胎冷冻组临床妊娠率(50.65%vs 46.76%)、早期流产率(12.82%vs 11.68%)及活产率(37.66%vs 39.72%)差异均无统计学意义(P均>0.05),剖宫产率(79.31%vs 83.33%)、胎膜早破发生率(10.34%vs 9.65%)及妊娠期高血压疾病发生率(10.34%vs 9.65%)等差异均无统计学意义(P均>0.05),单双胎分娩早产率(18.75%vs 6.41%,46.15%vs 41.67%)、出生体重[(3449.38±485.39)g vs(3424.74±511.94)g,(2515.20±539.46)g vs(2597.08±523.44)g]差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期临床妊娠和围产期结局相似,是一种相对安全的辅助生殖技术。 展开更多
关键词 卵母细胞 胚胎 玻璃化冷冻 临床妊娠结局 围产期结局
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羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存研究进展 被引量：1
10
作者 张迪 房晓欢 +1 位作者 李俊杰 王志刚 《家畜生态学报》 北大核心 2024年第6期9-13,共5页
生发泡(germinal vesial,GV)期卵母细胞由于未形成极为敏感的纺锤体,对于冷冻卵母细胞以及长期保存地方家畜种质资源具有无可比拟的优势。研究人员对此进行了广泛的关注,基于此,本文综述了羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的意义,分析了目... 生发泡(germinal vesial,GV)期卵母细胞由于未形成极为敏感的纺锤体,对于冷冻卵母细胞以及长期保存地方家畜种质资源具有无可比拟的优势。研究人员对此进行了广泛的关注,基于此,本文综述了羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的意义,分析了目前羊GV期卵母细胞冷冻保存过程中存在的问题,总结了有效提高卵母细胞冷冻效率的一些解决方法,对提高羊GV期卵母细胞冷冻保存效率具有一定的借鉴与参考。 展开更多
关键词 绵羊 山羊 卵母细胞 GV期 玻璃化冷冻
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家畜卵母细胞玻璃化冷冻损伤研究进展 被引量：1
11
作者 莫显红 李俊杰 +4 位作者 郭成 温诏禹 邹宇柱 赵文博 徐振军 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2524-2532,共9页
卵母细胞玻璃化冷冻保存对加快优良品种繁育、提高畜牧生产效率、维持物种多样性、拯救濒危动物具有重要意义。目前玻璃化冷冻技术已广泛应用于猪、牛、羊等家畜卵母细胞的冷冻保存。然而,相较新鲜卵母细胞,冷冻-解冻后卵母细胞的成熟... 卵母细胞玻璃化冷冻保存对加快优良品种繁育、提高畜牧生产效率、维持物种多样性、拯救濒危动物具有重要意义。目前玻璃化冷冻技术已广泛应用于猪、牛、羊等家畜卵母细胞的冷冻保存。然而,相较新鲜卵母细胞,冷冻-解冻后卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率及囊胚发育率仍然偏低,这显著影响卵母细胞冷冻保存的实际应用。冷冻损伤是制约卵母细胞保存效率与质量的关键。玻璃化冷冻引起卵母细胞透明带破裂、膜脂相变、DNA损伤、染色体异常及胞质内皮质颗粒分布异常、内质网和线粒体结构功能受损、纺锤体形态异常等结构损伤,以及引起细胞氧化应激和钙稳态失衡等生理状态紊乱,导致细胞发育能力降低。因此,认识冷冻损伤产生的原因及其损伤机制,有助于进一步提高卵母细胞冷冻保存效率,促进卵母细胞冷冻技术的提升。作者综述了家畜卵母细胞冷冻损伤类型,分析了冷冻损伤原因,针对不同类型的冷冻损伤提出了改善方法,并对其研究前景进行展望,旨在为提高卵母细胞冷冻保存效率和质量提供参考。 展开更多
关键词 卵母细胞 玻璃化冷冻损伤 发育能力 家畜
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基于Smart-seq2探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚基因表达的影响
12
作者 杨柏高 龙熙 +4 位作者 张亮 徐皆欢 戴建军 赵学明 潘红梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3936-3946,共11页
旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation,PA)囊胚基因表达的影响。本研究以猪PA囊胚为研究对象,根据试验处理分为新鲜组、玻璃化冷冻组Ⅰ和玻璃化冷冻组Ⅱ,随后从每组挑选3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞... 旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation,PA)囊胚基因表达的影响。本研究以猪PA囊胚为研究对象,根据试验处理分为新鲜组、玻璃化冷冻组Ⅰ和玻璃化冷冻组Ⅱ,随后从每组挑选3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术进行转录组测序分析。结果显示,玻璃化冷冻组Ⅰ与新鲜组相比,共鉴定到772个差异表达基因(differential expression genes,DEGs),GO和KEGG富集分析结果显示,这些DEGs与细胞脂质代谢过程、细胞葡萄糖稳态、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与新鲜组相比,共鉴定到1613个DEGs,主要与糖异生、代谢途径、氨基酸生物合成等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与玻璃化冷冻组Ⅰ相比,鉴定到822个DEGs,主要与丙酮酸代谢过程、N-聚糖生物合成、细胞衰老等相关。综上,本研究基于Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术揭示了玻璃化冷冻对猪PA囊胚脂质代谢、能量代谢、MAPK信号通路等相关基因表达的影响。 展开更多
关键词 Smart-seq2 玻璃化冷冻 猪 孤雌激活 囊胚
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牙鲆胚胎玻璃化冷冻技术研究 被引量：12
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作者 田永胜 陈松林 严安生 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期105-110,共6页
对名优经济鱼类牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎的玻璃化冷冻技术方法进行了研究.筛选出了适合于牙鲆胚胎平衡和培养的基础液BS2,对牙鲆不同时期胚胎在玻璃化液VS2中的耐受能力进行了研究,随着平衡时间的延长,胚胎成活率逐渐降低,4-5... 对名优经济鱼类牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎的玻璃化冷冻技术方法进行了研究.筛选出了适合于牙鲆胚胎平衡和培养的基础液BS2,对牙鲆不同时期胚胎在玻璃化液VS2中的耐受能力进行了研究,随着平衡时间的延长,胚胎成活率逐渐降低,4-5对肌节期、16-20对肌节期、尾芽期表现出对玻璃化液较强的适应能力.对洗脱液的种类和浓度进行了筛选,结果显示0.125mol/L蔗糖洗脱成活率最高.在室温(21～22℃)和6℃下分别对牙鲆不同时期胚胎在VS1中的成活率进行了比较研究,结果显示出15-20对肌节期在室温下的成活率高于低温,其它时期胚胎低温下的成活率高于室温.利用VS4、VS2、VS3分别对牙鲆尾芽期、肌效应期、出膜前期胚胎进行玻璃化冷冻保存,取得了5粒成活胚,4粒孵化出膜,成活时间为14～67h. 展开更多
关键词 牙鲆 成活率 芽期 胚胎玻璃化冷冻技术 经济鱼类 玻璃化冷冻技术 不同时期 VS 筛选 洗脱液
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猪卵母细胞、胚胎玻璃化冷冻初步研究(续上期)
14
作者 张德福 刘东 +3 位作者 王邵凯 王少兵 芮荣 汤琳琳 《中国畜禽种业》 2005年第12期45-47,共3页
关键词 猪卵母细胞 玻璃化冷冻保存 冷冻效果 体外受精 早期胚胎 冷冻过程 孵化囊胚 基础液 玻璃化冷冻液 存活率
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玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔卵母细胞纺锤体的影响 被引量：7
15
作者 蔡学泳 陈贵安 +2 位作者 廉颖 郑晓英 彭红梅 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期566-570,共5页
目的：探讨玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔第二次减数分裂中期卵母细胞纺锤体的影响。方法：以冷冻环为载体，单用乙二醇(ethylene glycol，EG)或乙二醇与二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide，DMSO)联合作冷冻保护剂，用直投... 目的：探讨玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔第二次减数分裂中期卵母细胞纺锤体的影响。方法：以冷冻环为载体，单用乙二醇(ethylene glycol，EG)或乙二醇与二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide，DMSO)联合作冷冻保护剂，用直投液氮或使用玻璃化冷冻仪高速制冷冷冻家兔卵母细胞；解冻2h 后固定并免疫荧光法染色纺锤丝及染色体；用共聚焦扫描显微镜观察纺锤体形态。结果：在单用 EG 以及 EG 和 DMSO 联合直投液氮的方案中，纺锤体损伤较严重，但在 EG 和 DMSO 联合应用并采用玻璃化冷冻仪提高制冷速度的方案中，纺锤体形态正常的比例与对照组相似 结论：玻璃化冷冻方法中采用冷冻保护剂联合及采用玻璃化冷冻仪高速制冷对保持解冻后家兔卵母细胞纺锤体形态效果最好。 展开更多
关键词 冷冻保护剂 纺锤体 联合 家兔 玻璃化冷冻 单用 卵母细胞 体形 减数分裂 DMSO
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不同品系小鼠胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究 被引量：14
16
作者 刘丽均 顾建忠 +4 位作者 朱东琴 符杰 施美莲 张瑞忠 徐平 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第2期77-80,F003,共5页
目的　研究甘油作为冷冻保护剂、不同基因型小鼠对胚胎玻璃化冷冻的影响。方法　采用 6 5mol L的甘油作为冷冻保护剂 ,采用二步法对CBA、NOD、C57BL 6J、ICR及CD1小鼠 3 5d的胚胎进行玻璃化冷冻 ,并比较了不同品系小鼠胚胎的复苏率及... 目的　研究甘油作为冷冻保护剂、不同基因型小鼠对胚胎玻璃化冷冻的影响。方法　采用 6 5mol L的甘油作为冷冻保护剂 ,采用二步法对CBA、NOD、C57BL 6J、ICR及CD1小鼠 3 5d的胚胎进行玻璃化冷冻 ,并比较了不同品系小鼠胚胎的复苏率及移植受孕率。结果和结论　CBA、NOD、C57BL 6J,ICR及CD1的复苏率分别为 5 7 6 %、4 8%、31 3%、86 5 %及 88% ,移植受孕率为 2 1%、2 3 5 %、11%、38%和 35 5 % ,封闭群小鼠的胚胎复苏率、移植受孕率均显著高于近交系小鼠。这提示胚胎的复苏率及移植受孕率可能与小鼠的不同基因型有关。五个品系中 ,桑椹胚及早期囊胚的体外复苏率均显著高于扩张囊胚。 展开更多
关键词 品系 小鼠 胚胎玻璃化冷冻保存 比较研究 复苏率 移植受孕率
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玻璃化冷冻囊胚复苏移植与新鲜囊胚移植的临床结局比较 被引量：11
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作者 赵静 张媔秋 +3 位作者 张军强 陈小燕 赵纯 凌秀凤 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期41-43,共3页
目的：比较新鲜囊胚移植周期与玻璃化冷冻囊胚复苏移植周期的临床结局。方法：回顾性分析2009~2011年本院生殖中心完成的874例囊胚移植周期,其中新鲜囊胚移植周期（A组）280例,冻融囊胚复苏移植周期（B组）594例,比较两组临床妊娠率。... 目的：比较新鲜囊胚移植周期与玻璃化冷冻囊胚复苏移植周期的临床结局。方法：回顾性分析2009~2011年本院生殖中心完成的874例囊胚移植周期,其中新鲜囊胚移植周期（A组）280例,冻融囊胚复苏移植周期（B组）594例,比较两组临床妊娠率。种植率。妊娠结局及新生儿情况等各项指标。结果：①A组平均移植胚胎数显著高于B组,分别为（1.88 ± 0.47）和（1.70 ± 0.53）个;临床妊娠率及种植率A组（43.93%。24.96%）显著低于B组（55.39%。40.51%,P 〈 0.05）;②A组和B组的流产率。早产率。单胎率。多胎率分别为13.82%。32.46%。70.16%。29.84%和16.72%。33.84%。71.86%。28.14%,孕龄分别为（265.49 ± 14.45）d。（264.43 ± 16.08）d均无统计学差异（P 〉 0.05）。两组中仅B组见1例异位妊娠,而A组无异位妊娠;③A组和B组巨大儿。生长受限及新生儿出生缺陷发生率分别为6.00%。19.66%。1.70%和9.40%。17.82%。0.90%,两组间无统计学差异。结论：玻璃化冷冻囊胚复苏移植显著提高了囊胚移植的种植率及妊娠率,且并没有增加新生儿出生缺陷。流产率。早产率,也没有增加巨大儿和新生儿生长受限的出生比率。因此,玻璃化冻融囊胚移植技术是安全有效的,值得在临床上应用推广。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 囊胚移植 妊娠结局
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慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响 被引量：7
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作者 彭艳 于丛一 +4 位作者 李予 麦美琪 冯淑英 杨冬梓 张清学 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期70-74,共5页
【目的】比较慢速冷冻、麦管玻璃化冷冻和尼龙网玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响。【方法】16例人卵巢组织切成薄片随机分配到新鲜卵巢组(A组)、麦管玻璃化冷冻组(B组)、尼龙网玻璃化冷冻组(C组)和慢速冷冻组(D组)后行组织学... 【目的】比较慢速冷冻、麦管玻璃化冷冻和尼龙网玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响。【方法】16例人卵巢组织切成薄片随机分配到新鲜卵巢组(A组)、麦管玻璃化冷冻组(B组)、尼龙网玻璃化冷冻组(C组)和慢速冷冻组(D组)后行组织学和电镜检查。【结果】A、B、C、D组中形态正常的原始卵泡比例分别为72.5%±8.4%、65.6%±12.8%、66.1%±11.1%、48.4%±13.3%;形态正常的初级卵泡比例分别为62.0%±13.9%、58.1%±7.9%、59.0%±16.2%、37.0%±14.0%。D组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、B、C组。B、C组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例,与A组相比无统计学差异。B、C组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变,D组中形态正常的原始卵泡超微结构存在一定程度的改变。【结论】玻璃化冷冻是人类卵巢组织较适宜的冷冻保存方法。 展开更多
关键词 卵巢组织 慢速冷冻 玻璃化冷冻 卵泡
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猪卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化 被引量：5
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作者 武彩红 芮荣 +4 位作者 戴建军 谢冰 剧世强 卢晓 侯加法 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期99-104,共6页
为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本。GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵... 为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本。GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵母细胞冷冻组。结果表明,所用玻璃化冷冻程序更适用于猪GV期卵母细胞的冷冻保存,GV期冷冻组卵母细胞的二乙酸荧光素(FDA)染色存活率、卵裂率均明显高于MⅡ期卵母细胞冷冻组。透射电镜观察结果发现,猪GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,主要表现为部分卵丘-卵母细胞复合体(COC)发生卵丘细胞脱落,透明带破损,卵丘细胞碎裂,卵丘细胞与卵母细胞间的连接受到破坏,卵母细胞微绒毛断裂、消失、数量减少,卵母细胞内脂滴多呈均质状。而MⅡ期卵母细胞冷冻后,皮质颗粒仍呈单层排列于质膜下,仅可见形态不规则的不均质脂滴,其周围常严重空泡化。试验表明,采用适当的冷冻方案,可以获得少量源于冷冻保存的猪GV期卵母细胞的胚胎。而猪MⅡ期卵母细胞冷冻后,经体外受精未见卵裂,脂滴严重空泡化是其最为明显的变化。 展开更多
关键词 猪 卵母细胞 玻璃化冷冻 体外成熟 体外发育 超微结构
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玻璃化冷冻保存牛卵母细胞技术研究 被引量：6
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作者 李青旺 于永生 +3 位作者 江中良 王立强 胡建宏 常万存 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第1期109-112,共4页
采用一步法和二步法研究玻璃化冷冻保存的牛生发泡 (GV )期和体外成熟 (IVM)卵母细胞的发育潜力。结果表明 ,冷冻基础液 PBS和 TCM199在玻璃化冷冻中的效果差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;冷冻程序和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响 ... 采用一步法和二步法研究玻璃化冷冻保存的牛生发泡 (GV )期和体外成熟 (IVM)卵母细胞的发育潜力。结果表明 ,冷冻基础液 PBS和 TCM199在玻璃化冷冻中的效果差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;冷冻程序和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响 ,二步法冷冻效果显著优于一步法 (P<0 .0 5 ) ,IVM卵母细胞冷冻效果显著优于GV期 (P<0 .0 5 )。 展开更多
关键词 冷冻保存 牛 卵母细胞 玻璃化冷冻
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