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环介导等温扩增法(LAMP)在水生动物病害检测中的应用 被引量:3
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作者 张家松 王印庚 +3 位作者 陈义平 张健 雷霁霖 李卓佳 《中国动物检疫》 CAS 2010年第2期71-73,共3页
近年来我国的水产养殖发展迅速,养殖面积和产量都位居世界第一。但是疾病频发一直是困扰水产养殖的一个问题,而病原的快速检测是水产动物疾病防控的前提和关键。随着水产病害基础研究的不断深入,病原的检测技术也得到快速发展。本文介... 近年来我国的水产养殖发展迅速,养殖面积和产量都位居世界第一。但是疾病频发一直是困扰水产养殖的一个问题,而病原的快速检测是水产动物疾病防控的前提和关键。随着水产病害基础研究的不断深入,病原的检测技术也得到快速发展。本文介绍了一种新型的核酸扩增技术——环介导等温扩增(l oop-medi at ed i sot hermalampl i f i cat i on,LAMP),综述了近年来LAMP方法在水生动物病害检测领域的具体应用实例和研究进展,并对该方法的应用前景做了展望。 展开更多
关键词 环介等温(lamp) 水生动物病害 检测
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基于核酸分子光开关的闭管可视化环介导等温扩增检测方法 被引量:3
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作者 王芳 董菁 +1 位作者 李艳妮 徐秦峰 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期646-651,共6页
该研究采用核酸分子“光开关”[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)作为环介导等温扩增(LAMP)荧光染料,建立了一种快速、直观的闭管可视化LAMP检测方法。为避免高浓度染料对LAMP反应造成的强烈抑制和开盖导致的气溶胶交叉污染,该文采用蜡封反应管... 该研究采用核酸分子“光开关”[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)作为环介导等温扩增(LAMP)荧光染料,建立了一种快速、直观的闭管可视化LAMP检测方法。为避免高浓度染料对LAMP反应造成的强烈抑制和开盖导致的气溶胶交叉污染,该文采用蜡封反应管进行检测,通过直接观察扩增产物DNA与[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)结合后产生的强烈红色荧光信号判定结果。该方法对金黄色葡萄球菌DNA的检出限可低至20拷贝/反应。方法特异性强,整个可视化检测过程可在1 h内完成,有望广泛应用于环境检测、食品安全、临床诊断等领域的现场快速核酸检测。 展开更多
关键词 环介等温(lamp) [Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+) 可视化检测 金黄色葡萄球菌
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环介导等温扩增技术在禽病毒病检测中的应用 被引量:1
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作者 徐宁 《养殖技术顾问》 2014年第3期242-242,共1页
环介导等温扩增技术(LAMP),是2000年由日本的荣研株式会的Notomi T等人开发出来的一种新的核酸扩增方法。LAMP法是针对靶基因的6个区域设计4种特异的引物,利用一种链置换脱氧核糖核酸聚合酶(DNA polymerase)在恒温条件保温几十分... 环介导等温扩增技术(LAMP),是2000年由日本的荣研株式会的Notomi T等人开发出来的一种新的核酸扩增方法。LAMP法是针对靶基因的6个区域设计4种特异的引物,利用一种链置换脱氧核糖核酸聚合酶(DNA polymerase)在恒温条件保温几十分钟,即可完成核酸扩增反应,具有高特异性和等温快速扩增的特点,可以在1小时之内,将靶脱氧核糖核酸(DNA)片段扩增108~109倍。在DNA延伸合成时,从脱氧核酸三磷酸基质(dNTPS)中析出的焦磷酸离子与反应溶液中的镁离子结合,会产生一种焦磷酸镁的衍生物,而高效扩增的LAMP法生成大量这样的衍生物,并呈现白色沉淀。可以把浑浊度作为鉴定指标,仅凭肉眼观察白色混浊沉淀,就能鉴定扩增与否,而不需要繁琐的电泳和紫外观察等过程。且该方法不需要任何贵重的仪器和试剂,在水浴锅中即可完成反应,特别适合在野外现场和基层部门应用。迄今已建立了针对多种病原性细菌、真菌、病毒、寄生虫等的LAMP检测方法。下面就目前LAMP技术在禽病毒检测中的进展情况作一归纳。 展开更多
关键词 技术 病毒检测 病毒病 等温 应用 脱氧核糖核酸 lamp
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食品过敏原大豆成分LAMP实时浊度检测法的建立 被引量:3
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作者 邝筱珊 成晓维 +3 位作者 游淑珠 王小玉 刘李登 冯家望 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期65-68,72,共5页
根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行... 根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明:该方法能够特异性检出食品中的过敏原大豆成分,特异性高,灵敏度达0.1%(w/w)。对含有大豆成分为10%、1%、0.1%、0%(w/w)的样品分别进行20次重复实验,其稳定性好,假阳性和假阴性率为0%。本实验建立的LAMP方法适用于特异性快速检测食品中的过敏原大豆成分。 展开更多
关键词 环节等温(lamp) 实时浊度仪 过敏原 大豆 检测
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LAMP实时浊度法检测转基因植物NPTⅡ基因 被引量:1
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作者 邝筱珊 胡松楠 +3 位作者 王小玉 唐食明 成晓维 冯家望 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期60-64,共5页
根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进... 根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明,该方法能够特异性检出含有NPTⅡ基因的植物及其加工产品,特异性高,灵敏度达0.5%。对转基因玉米MON863(含NPTⅡ基因)含量为10%、1%、0.5%、0%(W/W)的样品DNA分别进行扩增,其稳定性好,无假阳性和假阴性。所建立的LAMP方法适用于特异性筛选检测含NPTⅡ基因的植物及其加工样品。 展开更多
关键词 环节等温(lamp)实时浊度仪 新霉素-3'-磷酸转移酶基因 转基因 检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR和RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:3
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作者 周康平 郑虎 +2 位作者 王美玉 韩振伟 王业富 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期72-76,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是世界各地重要猪病毒性病原之一,每年给养猪业造成重大损失。本试验建立了应用TaqMan-LNA的荧光定量RT-PCR和逆转录—环介导等温扩增(RT-LAMP)2种P... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是世界各地重要猪病毒性病原之一,每年给养猪业造成重大损失。本试验建立了应用TaqMan-LNA的荧光定量RT-PCR和逆转录—环介导等温扩增(RT-LAMP)2种PRRSV检测方法。结果表明荧光定量RT-PCR和RT-LAMP检测下限分别为102和101拷贝数/μL,都具有良好的特异性。临床样本检测结果同样表明2种方法都具有良好的特异性和灵敏度。本试验所建立的TaqMan-LNA荧光定量RT-PCR和RT-LAMP可有效的应用于PRRSV的检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光定量RT-PCR 逆转录&mdash 环节等温
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对虾白斑综合征病毒和传染性皮下及造血器官坏死病毒双重LAMP检测方法的建立和临床应用分析 被引量:3
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作者 张娜 黄磊 斯泽恩 《水产科技情报》 2020年第2期68-72,共5页
为了快速有效地检测养殖对虾的对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV),建立了WSSV和IHHNV的双重环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并以钙黄绿素荧光目测方法和电泳方法分别观察和检测结果。通过扩增序列分析发现,... 为了快速有效地检测养殖对虾的对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV),建立了WSSV和IHHNV的双重环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并以钙黄绿素荧光目测方法和电泳方法分别观察和检测结果。通过扩增序列分析发现,WSSV的LAMP扩增靶序列中存在HinfⅠ酶切位点,而IHHNV的LAMP扩增靶序列中没有此酶切位点,因此可以利用内切酶酶切反应来区分两种病毒的扩增产物。试验结果显示,所建立的双重LAMP方法具有较好的灵敏性和特异性。将所建立的检测方法进行临床应用,对湛江地区养殖场对虾WSSV和IHHNV的流行情况进行调查,结果发现,湛江地区养殖场WSSV和IHHNV感染率较高,且在低日龄虾苗中有感染情况。本研究所建立的LAMP方法不需要严格的仪器设备,反应快速、操作简单,适用于口岸检疫和条件相对落后的基层实验室进行疫病的快速检测。 展开更多
关键词 对虾白斑综合征病毒 传染性皮下及造血器官坏死病毒 环介等温(lamp) 双重lamp
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贝类包拉米虫可视化LAMP检测方法的建立
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作者 曾婷婷 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 刘加波 庞耀珊 范晴 罗思思 邓显文 谢志勤 《中国动物检疫》 CAS 2013年第4期43-46,共4页
目的建立一种可以根据颜色变化判断结果的环介导等温扩增方法(LAMP)检测贝类包拉米虫。方法根据贝类包拉米虫的基因,设计一套LAMP引物,进行LAMP反应,并优化反应条件,进行特异性和敏感性实验。结果经过反应条件优化,可通过肉眼观察颜色... 目的建立一种可以根据颜色变化判断结果的环介导等温扩增方法(LAMP)检测贝类包拉米虫。方法根据贝类包拉米虫的基因,设计一套LAMP引物,进行LAMP反应,并优化反应条件,进行特异性和敏感性实验。结果经过反应条件优化,可通过肉眼观察颜色直接判定结果,在1h内完成整个反应,检测的敏感性最低达到15.4fg,是普通PCR方法的10倍,对其他贝类常见病原体的检测结果均为阴性。结论本实验建立的检测贝类包拉米虫的LAMP方法,具有良好的特异性和敏感性,不需要昂贵的仪器,可以在短时间内检测包拉米虫,在基层兽医具有良好的诊断应用价值。 展开更多
关键词 包拉米虫 环节等温 可视化检测
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