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结核分枝杆菌磷酸二酯酶重组腺病毒黏膜免疫诱导的免疫应答特点
1
作者
代婷
路延之
+6 位作者
赵瑞华
宁唤唤
康健
郝乐冉
李嘉玲
常宇骁
柏银兰
《细胞与分子免疫学杂志》
北大核心
2025年第1期1-8,共8页
目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼...
目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)抗体水平,实时定量PCR检测小鼠肺组织中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)转录水平,流式细胞术检测肺、脾CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群细胞比例,ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平,平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG,以及BALF中IgG和IgA产生,肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高,rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应,并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。
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关键词
结核分枝杆菌(Mt
b
)
环核苷酸
磷酸二酯
酶
b
(
cnpb
)
重组腺病毒
免疫治疗
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职称材料
人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
2
作者
张祥
何姝
+2 位作者
胡小蕾
廖飞
杨晓兰
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期93-97,共5页
目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合...
目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合到人全长PDE4B2基因编码区的N端和152-528aa截短突变体N端得到SF-h PDE4B2和STh PDE4B2;大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化,用偶联碱性磷酸酶的孔雀绿定磷法测定酶活性。结果:纯化后ST-h PDE4B2比活性接近SF-h PDE4B2的40倍,活性收率超过100倍;SDS-PAGE和6His标签免疫印迹发现纯化后2种融合蛋白都有多种带6His标签的降解片段;测定咯利普兰[(R)-Rolipram]和罂粟碱的抑制常数表明,SF-h PDE4B2对(R)-Rolipram主要为高亲和力结合构象,而ST-h PDE4B2主要为低亲和力结合构象。结论:与SF-h PDE4B2相比,ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂可能更有优势。
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关键词
环核苷酸
磷酸二酯
酶
4
b
2
重组表达
孔雀绿定磷法
酶
抑制剂
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职称材料
题名
结核分枝杆菌磷酸二酯酶重组腺病毒黏膜免疫诱导的免疫应答特点
1
作者
代婷
路延之
赵瑞华
宁唤唤
康健
郝乐冉
李嘉玲
常宇骁
柏银兰
机构
延安大学生命科学学院
空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室
空军军医大学军事医学创新中心
宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
北大核心
2025年第1期1-8,共8页
基金
国家自然科学基金(82272343,81971560)
陕西省重点研发计划(2022ZDLSF01-07,2024SF-YBXM-153)。
文摘
目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)抗体水平,实时定量PCR检测小鼠肺组织中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)转录水平,流式细胞术检测肺、脾CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群细胞比例,ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平,平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG,以及BALF中IgG和IgA产生,肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高,rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应,并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。
关键词
结核分枝杆菌(Mt
b
)
环核苷酸
磷酸二酯
酶
b
(
cnpb
)
重组腺病毒
免疫治疗
Keywords
Myco
b
acterium tu
b
erculosis(Mt
b
)
cyclic nucleotide phosphodiesterase
b
(
cnpb
)
recom
b
inant adenovirus
immunotherapy
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
R730.51 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
2
作者
张祥
何姝
胡小蕾
廖飞
杨晓兰
机构
重庆医科大学检验医学院
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期93-97,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:31570862)
文摘
目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合到人全长PDE4B2基因编码区的N端和152-528aa截短突变体N端得到SF-h PDE4B2和STh PDE4B2;大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化,用偶联碱性磷酸酶的孔雀绿定磷法测定酶活性。结果:纯化后ST-h PDE4B2比活性接近SF-h PDE4B2的40倍,活性收率超过100倍;SDS-PAGE和6His标签免疫印迹发现纯化后2种融合蛋白都有多种带6His标签的降解片段;测定咯利普兰[(R)-Rolipram]和罂粟碱的抑制常数表明,SF-h PDE4B2对(R)-Rolipram主要为高亲和力结合构象,而ST-h PDE4B2主要为低亲和力结合构象。结论:与SF-h PDE4B2相比,ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂可能更有优势。
关键词
环核苷酸
磷酸二酯
酶
4
b
2
重组表达
孔雀绿定磷法
酶
抑制剂
Keywords
cyclic nucleotide phosphodiesterase 4
b
2
fusion expression
alkaline phosphatase-coupled malachite green assay of phosphate
rolipram
分类号
Q556 [生物学—生物化学]
R446.61 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌磷酸二酯酶重组腺病毒黏膜免疫诱导的免疫应答特点
代婷
路延之
赵瑞华
宁唤唤
康健
郝乐冉
李嘉玲
常宇骁
柏银兰
《细胞与分子免疫学杂志》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
张祥
何姝
胡小蕾
廖飞
杨晓兰
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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职称材料
已选择
0
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