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环己酮单加氧酶的基因挖掘及高效催化合成奥美拉唑的研究
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作者 张睿 席志文 +1 位作者 张荣珍 徐岩 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期12-22,共11页
【目的】为了提高奥美拉唑的合成效率。【方法】以来源于Acinetobacter johnsonii(A.johnsonii)的CHMO_(NCIMB 9871)和来源于Priestia megaterium(P.megaterium)的P450 BM3为模板,筛选出转化效率最高的单加氧酶并确定其蛋白质诱导的最... 【目的】为了提高奥美拉唑的合成效率。【方法】以来源于Acinetobacter johnsonii(A.johnsonii)的CHMO_(NCIMB 9871)和来源于Priestia megaterium(P.megaterium)的P450 BM3为模板,筛选出转化效率最高的单加氧酶并确定其蛋白质诱导的最适条件,通过单因素试验和响应面优化确定该重组酶催化合成奥美拉唑的最优条件。【结果】来源于Pseudomonas sp.的环己酮单加氧酶CHMO_(KT2440)转化效率最高,其蛋白质诱导的最适条件为:菌体OD_(600)值0.6,诱导温度17℃,IPTG终浓度0.15 mmol/L。单因素试验结果为:在33℃、pH 9.0、FAD添加量0.05 mmol/L、底物质量浓度3.0 g/L、反应时间10 h的条件下,奥美拉唑的产率为78.9%。CHMO_(KT2440)催化合成奥美拉唑的回归方程为:y=60.78+9.56A-19.74B+9.55C+1.80AB+5.13AC+1.48BC-18.04A2-0.79B2-9.41C2。结合单因素试验结果,确定最优转化条件为:底物质量浓度3.0 g/L,反应温度34℃,反应pH 9.0,FAD添加量0.05 mmol/L,反应时间10 h,在此条件下奥美拉唑的产率高达79.9%,较优化前提高了90.23%。【结论】筛选的环己酮单加氧酶CHMO_(KT2440)为奥美拉唑的合成提供了一个优秀候选酶。 展开更多
关键词 环己酮单加氧酶 同源酶挖掘 奥美拉唑 响应面优化 产率
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