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环介导等温核酸扩增技术快速检测食物中的大肠杆菌O157 被引量:8
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作者 王丽 徐振波 +1 位作者 赵喜红 钟青萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期146-150,共5页
建立了环介导等温核酸扩增技术(LAMP)检测食源大肠杆菌O157,并对该方法的灵敏度和特异性进行了评价。分别针对大肠杆菌O157三个特异基因rfbE,stx1和stx2的8个独立靶区域设计了外引物、内引物和环引物进行LAMP扩增检测,同时将检测结果与... 建立了环介导等温核酸扩增技术(LAMP)检测食源大肠杆菌O157,并对该方法的灵敏度和特异性进行了评价。分别针对大肠杆菌O157三个特异基因rfbE,stx1和stx2的8个独立靶区域设计了外引物、内引物和环引物进行LAMP扩增检测,同时将检测结果与PCR方法做比较。研究结果表明,rfbE,stx1和stx2基因的LAMP方法检测限分别为100,100和10 fg DNA/管,灵敏度是PCR方法的10倍以上;将建立的环介导等温扩增法用于417株食物分离的大肠杆菌的检测,发现LAMP检测rfbE,stx1和stx2基因的灵敏度分别为100%,95.3%和96.3%,对3个靶基因的阴性预测率分别为100%,96.7%和97.1%,特异性和阳性预测率均为100%。结果表明,该方法用于大肠杆菌O157的检测具有特异性强、灵敏度高、操作简便的优越性,在食品安全检测方面具有良好的实际应用前景。 展开更多
关键词 环介导等温核酸扩增(LAMP 大肠杆菌O157 快速检测
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番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法 被引量:3
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作者 封立平 尼秀媚 +3 位作者 魏晓棠 邵秀玲 吴兴海 厉艳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第4期1207-1212,共6页
目的建立番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法。方法应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对番茄溃疡病菌的16SrRNA特异性基因进行扩增,采用4对引物识别目的片段的6个特异性区域,62℃恒温1h完成扩增。结果设计的引物与对照菌皱... 目的建立番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法。方法应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对番茄溃疡病菌的16SrRNA特异性基因进行扩增,采用4对引物识别目的片段的6个特异性区域,62℃恒温1h完成扩增。结果设计的引物与对照菌皱纹假单胞菌、茄假单胞菌、丁香假单胞菌番茄致病变种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。这些对照菌在茄科蔬菜上易引起类似症状。结论 LAMP检测程序便捷,所需设备简单,其结果可以通过肉眼观察来判断,比常规PCR灵敏且能更早得到反应结果,因此该技术具有更大的优势。 展开更多
关键词 番茄溃疡病菌 环介导等温核酸扩增技术 16SrRNA
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应用LAMP检测方法检测肉制品中的单增李斯特菌 被引量:12
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作者 高宏伟 徐彪 +3 位作者 朱来华 肖西志 郑小龙 梁成珠 《食品安全质量检测学报》 CAS 2010年第1期12-17,共6页
本研究使用恒温环介导技术,以单增李斯特菌的肌动蛋白大会诱导蛋白聚集因子A(actA)基因设计引物,建立单增李斯特菌的LAMP快速检测方法。不同来源的13株单增李斯特菌LAMP检测均显示阳性,其他21种细菌LAMP检测显示阴性。使用使用本研究建... 本研究使用恒温环介导技术,以单增李斯特菌的肌动蛋白大会诱导蛋白聚集因子A(actA)基因设计引物,建立单增李斯特菌的LAMP快速检测方法。不同来源的13株单增李斯特菌LAMP检测均显示阳性,其他21种细菌LAMP检测显示阴性。使用使用本研究建立的LAMP方法检测肉类样品中的单增李斯特菌结果与细菌分离方法检测结果一致。 展开更多
关键词 李斯特菌 actA基因 环介导等温核酸扩增
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小反刍兽疫病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:11
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作者 李林 吴晓东 +3 位作者 包静月 李金明 王君玮 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2010年第4期32-34,41,共4页
利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明,根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63℃恒温下,1小时内实现目的核酸的大量扩增,由于在... 利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明,根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63℃恒温下,1小时内实现目的核酸的大量扩增,由于在检测前加入荧光指示试剂,检测结果可以直接用肉眼判断,避免了由于开盖检验带来的扩增产物污染导致的假阳性。该检测体系具有较高的特异性,只能特异性地检测目的病毒,与其他同属的病毒或类似病毒等无交叉反应;具有较高的检测灵敏度,比普通RT-PCR灵敏性高10倍,与荧光RT-PCR的灵敏度相当。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 逆转录环介导等温核酸扩增 检测
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可视化2型猪链球菌LAMP检测方法的建立
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作者 熊炜 魏晓锋 +6 位作者 王艳 林颖峥 张强 李春阳 黄忠荣 胡建华 李健 《中国动物检疫》 CAS 2016年第12期75-77,84,共4页
由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法... 由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了测试。通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了对检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于在出入境口岸货物查验现场及猪场等一线实验室使用。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 环介导等温核酸扩增技术 可视化
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狂犬病病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:2
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作者 何媛 罗宝正 +6 位作者 邵建宏 薄清如 徐海聂 林瑞庆 沙才华 廖秀云 陈步雲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第5期1-5,共5页
本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判... 本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判断,重复性好,稳定可靠,可将狂犬病病毒与犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(PIV)、犬腺病毒(CAV)、犬细小病毒(CPV)进行鉴别,对86份犬唾液样品和3种商品化狂犬病疫苗进行检测表明,建立的方法适用于样品中狂犬病病毒的临床检测。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 逆转录-环介导等温核酸扩增技术 检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立 被引量:9
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作者 罗忠永 王印 杨泽晓 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期1-5,共5页
应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在6... 应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在64.5℃60min内实现对目标核酸片段的大量扩增,检测结果可通过直接观察反应副产物(焦磷酸镁)进行判读,该检测系统具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒等均无交叉反应;通过PRRSV不同毒株疫苗、模拟样品和临床样品确定,该检测系统具有很好的稳定性;通过质粒确定该检测系统可以检测到10拷贝/μL的病毒核酸模板。结果表明成功建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 环介导等温核酸扩增 检测
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