基于环介导等温扩增微流控芯片技术检测4种鱼类病毒方法的建立

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作者 任向阳 丁宁 +7 位作者 苗子毅 黄献培 潘一峰 柏建山 黎浩权 袁建文 陈进会 张险朋 《广东海洋大学学报》 北大核心 2025年第5期106-112,共7页

【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、... 【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、KHV、NNV和VHSV各自保守基因设计LAMP引物,预包埋LAMP引物至微流控芯片,注入等温扩增反应试剂,通过电浸润法将反应试剂驱动至各反应位点,复溶预包埋的LAMP引物,在各反应位点进行等温扩增反应。分析该检测体系的特异性、灵敏性和重复性验证,并应用于实际样品检测。【结果】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系对SVCV、KHV、NNV和VHSV阳性样品均出现特异性扩增反应,且不同病毒间未出现交叉反应;对鱼类易感的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、大口黑鲈虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、本尼登虫(Benedenia girellae)和刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)等8种常见病原体阳性样品均无特异性扩增反应。灵敏度实验结果表明,对SVCV、VHSV的检测限均为10 fg/μL,对KHV、NNV的检测限均为1 fg/μL。重复性实验结果表明,4种病毒的变异系数均<5%。该检测体系与实时荧光PCR方法相比,对20份实际样品的检测结果均保持一致。【结论】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系于63℃等温扩增30 min即可完成对SVCV、KHV、NNV和VHSV的同时检测,且特异性好、灵敏度高、重复性好,可为鱼类SVCV、KHV、NNV和VHSV等温快速联检提供技术支撑。 展开更多

关键词 环介导等温扩增微流控芯片技术 鲤春病毒血症病毒 锦鲤疱疹病毒 神经坏死病毒 病毒性出血性败血症病毒

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微流控芯片环介导等温扩增技术检测3种猪圆环病毒 被引量：4

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作者 石艳萍 邓飞 +6 位作者 周丽媛 李丽 邵靓 陈斌 张孟思 邱明双 陈弟诗 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期58-64,共7页

为建立快速区分3种猪圆环病毒(PCV2、PCV3和PCV4)的现场检测方法,采用微流控芯片环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取,与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测... 为建立快速区分3种猪圆环病毒(PCV2、PCV3和PCV4)的现场检测方法,采用微流控芯片环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取,与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测试剂盒进行灵敏度、特异性和重复性同步比对。结果显示:微流控芯片LAMP法在3种猪圆环病毒联检测试中具有非常高的灵敏度,可以在30 min内,实现不低于荧光定量PCR法的敏感性;与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒临床阳性样本均无交叉反应,特异性好;测试3种猪圆环病毒重复性Ct值变异系数(CV)均在2%以下,稳定性好。结果表明:3种猪圆环病毒微流控芯片快速联检技术特异性好、灵敏度高、重复性强,检测速度快,环境要求低,可以满足现场检测的要求,适用于养猪场等场所的猪圆环病毒现场快速检测。本方法的建立为猪相关病原体的现场快速核酸检测提供了有力工具。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 微流控芯片 环介导恒温扩增 快速检测 核酸检测

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基于环介导等温扩增技术的微流控芯片在宠物疫病检测中的应用展望 被引量：1

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作者 杨德全 郁达义 +5 位作者 鞠厚斌 李鑫 沈海潇 葛菲菲 王建 赵洪进 《上海畜牧兽医通讯》 2021年第4期42-43,共2页

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术与微流控芯片技术相结合,可实现对宠物疫病病原体的快速检测,具有高通量、特异性强、灵敏度高、操作简单、即时检测等优点。基于LAMP的微流控芯片应用于宠物疫病检测,... 环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术与微流控芯片技术相结合,可实现对宠物疫病病原体的快速检测,具有高通量、特异性强、灵敏度高、操作简单、即时检测等优点。基于LAMP的微流控芯片应用于宠物疫病检测,可显著提高宠物疫病的病原学诊断能力和效率,成为宠物疫病的快速诊断及高效防控的重要手段之一。 展开更多

关键词 环介导等温扩增 微流控芯片 宠物疫病 应用展望

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基于环介导等温扩增的离心式微流控芯片检测3种致病菌 被引量：6

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作者 姚延禄 曹宁 周新丽 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期255-261,共7页

采用微流控技术可以将食源性致病菌样品的制备、分离、检测等基本单元集成到仅有几平方厘米的芯片上,与分子检测技术相结合,能够满足对食源性致病菌快速现场检测的需要。基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification... 采用微流控技术可以将食源性致病菌样品的制备、分离、检测等基本单元集成到仅有几平方厘米的芯片上,与分子检测技术相结合,能够满足对食源性致病菌快速现场检测的需要。基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP),设计制作出一种用于食源性致病菌快速检测的离心式微流控芯片。通过离心式微流控核酸等温扩增装置实现微流控芯片上的流体控制、等温扩增及可视化检测,可1次进行5种样品的3种食源性致病菌的检测。结果显示,基于LAMP的离心式微流控方法用于检测大肠杆菌、沙门氏菌和单增李斯特氏菌,能够在60 min内完成芯片的可视化检测,并且检测结果具有良好的特异性及敏感性,检测限为10^(3)copies/μL。将微流控技术用于食源性致病菌的核酸提取、等温扩增及检测,具有集成化、易于携带和快速分析等优势,在食品安全快速检测中具有应用的潜力。 展开更多

关键词 微流控芯片 食源性致病菌 环介导等温扩增 快速检测

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遗传学实验教学的前沿拓展——等温扩增技术和微流控芯片技术的引入与思考 被引量：1

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作者 赵雪莹 李梦欣 +2 位作者 卢大儒 乔守怡 皮妍 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2022年第6期248-251,共4页

现代遗传学学科与技术的飞速发展对本科生遗传学实验教学提出了更高的要求。探索如何将新知识、新技术、新案例引入传统的实验教学课程正成为当前教学改革的重要方向。等温扩增技术是经典的聚合酶链式反应技术的拓展和延伸,具有极强的... 现代遗传学学科与技术的飞速发展对本科生遗传学实验教学提出了更高的要求。探索如何将新知识、新技术、新案例引入传统的实验教学课程正成为当前教学改革的重要方向。等温扩增技术是经典的聚合酶链式反应技术的拓展和延伸,具有极强的应用性,基于等温扩增的微流控芯片核酸检测技术现已广泛应用于转基因鉴定、病原体鉴定等核酸检测工作中。将基于环介导等温扩增的微流控芯片核酸检测技术快速鉴定转基因材料实验作为遗传学实验教学新案例,能够在拓展学生前沿视野的同时,大大激发学生探索科学的兴趣,培养学生的创新精神和解决实际问题的能力。该实验实施以来,深受学生欢迎,取得了较理想的教学效果,有利于后期进一步实践与推广。 展开更多

关键词 遗传学实验 环介导等温扩增 微流控芯片 转基因材料鉴定

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多重环介导等温扩增技术研究进展 被引量：31

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作者 林文慧 邹秉杰 +1 位作者 宋沁馨 周国华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期899-910,共12页

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)因其扩增速度快、灵敏度和特异性高、仪器要求低等优点而被广泛应用于核酸诊断领域。为充分利用LAMP技术优势、提高诊断检测的效率与可靠性、扩展其应用范围,同时节约... 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)因其扩增速度快、灵敏度和特异性高、仪器要求低等优点而被广泛应用于核酸诊断领域。为充分利用LAMP技术优势、提高诊断检测的效率与可靠性、扩展其应用范围,同时节约试剂成本,近年来多重LAMP技术的研究成为一大热点。常规的LAMP扩增产物检测方法多数以聚合反应的双链DNA产物或其副产物为基础,只能判断有无扩增反应发生,而难以识别多重扩增产物的靶标来源及其特异性。为实现多重扩增产物的高特异检测,各国学者通过对该技术巧妙的改进或与其他技术相偶联,发展了一系列多重LAMP扩增检测技术。然而上述狭义的多重LAMP技术依然存在因引物间相互干扰、扩增效率存在差异而引发歧视性扩增的局限,限制了多重扩增的重数。近年研究活跃的微型扩增技术以其实现多个平行、互不干扰的小体积单重扩增的技术优势打破了这一局限,由此产生了新型的广义多重LAMP扩增技术。这些技术还具有试剂消耗少、自动化程度较高、交叉污染风险更小以及更适合对较多靶标进行现场快速检测等优势。本文分别从狭义多重LAMP的方法原理及其扩增反应体系优化、广义多重LAMP的方法原理以及多重LAMP技术在诊断检测中的应用等方面对近年来多重LAMP技术的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 多重环介导等温扩增 特异扩增产物检测 微型扩增技术 微流控芯片

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微流控芯片恒温扩增技术快速检测米饭中的蜡样芽孢杆菌 被引量：5

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作者 王珍 贺磊 +4 位作者 肖英平 卢先东 刘艳红 陆雯 王首锋 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期193-202,共10页

为建立米饭中的蜡样芽孢杆菌微流控芯片恒温扩增快速检测方法,利用蜡样芽孢杆菌公开的hblA基因序列设计引物,加入荧光染料SYTO-9,采用微流控芯片通过环介导恒温扩增进行实时荧光读数,并通过24株菌株验证其特异性;分别用阳性质粒和阳性... 为建立米饭中的蜡样芽孢杆菌微流控芯片恒温扩增快速检测方法,利用蜡样芽孢杆菌公开的hblA基因序列设计引物,加入荧光染料SYTO-9,采用微流控芯片通过环介导恒温扩增进行实时荧光读数,并通过24株菌株验证其特异性;分别用阳性质粒和阳性菌株测试其灵敏度、检出限和重复性。结果表明:2株蜡样芽孢杆菌呈阳性,22株非蜡样芽孢杆菌呈阴性;微流控芯片恒温扩增技术检测蜡样芽孢杆菌菌液的灵敏度为170 CFU/mL,检测时间在35 min内;使用合成的蜡样芽孢杆菌阳性质粒样品,其灵敏度为10μL-1,检测时间在15 min内,比传统分离鉴定方法的灵敏度高10倍;人工污染米饭中蜡样芽孢杆菌的检出限为570 CFU/g,并可在45 min内完成结果判定;蜡样芽孢杆菌阳性质粒检测重复性好,其变异系数(coefficient of variation, CV)为2.02%。综上所述,微流控芯片恒温扩增快速检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可用于米饭类食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。 展开更多

关键词 微流控芯片 环介导恒温扩增 蜡样芽孢杆菌 米饭 检测

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环介导等温扩增技术的应用及研究进展 被引量：23

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作者 徐匆 罗华建 +5 位作者 李艳芳 黄皓 梁卫驱 胡珊 胡楚维 罗鸿斌 《广东农业科学》 CAS 2019年第4期116-123,共8页

环介导等温扩增(LAMP)技术自2000年被发明以来以其快速、灵敏、低耗等特点,引起众多研究者的关注。该技术在人、动物、植物、环境等相关微生物的检测、监控等领域得到了广泛研究与应用,其检测灵敏度普遍高于传统PCR 。但是传统LAMP技术... 环介导等温扩增(LAMP)技术自2000年被发明以来以其快速、灵敏、低耗等特点,引起众多研究者的关注。该技术在人、动物、植物、环境等相关微生物的检测、监控等领域得到了广泛研究与应用,其检测灵敏度普遍高于传统PCR 。但是传统LAMP技术对于产物检测存在耗时、易造成污染等问题,以及在野外或医疗点检测时存在判读不便的弊端。就LAMP技术与其他多种产物检测技术结合后的方法如目视LAMP、实时LAMP、微流控LAMP、横向流LAMP及电化学LAMP进行了总结、举例及讨论。目视LAMP具有费用低、适合多环境下使用的特点;实时LAMP、微流控及电化学LAMP法能够有效提高样品检测的准确度,且可减少检测时间;横向流LAMP具有可操作性强、便于判读等特点。根据目前LAMP技术的研究进展及各技术优劣势的分析,预测 LAMP技术未来发展的方向和重点可能为研发手持便携式检测仪。 展开更多

关键词 环介导等温扩增(LAMP) 实时LAMP 微流控LAMP 横向流LAMP 电化学LAMP

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微流控LAMP芯片构建及在MRSA快速检测中的应用研究 被引量：5

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作者 管潇 张梦军 +5 位作者 韩清娟 冯志强 曹文轩 刘明 郭嘉伟 张惠静 《中国测试》 CAS 北大核心 2015年第4期50-54,共5页

构建一种基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),集细菌在线裂解、核酸提取、目标基因扩增和产物检测一体化的用于病原菌快速检测的集成式微流控芯片。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant st... 构建一种基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),集细菌在线裂解、核酸提取、目标基因扩增和产物检测一体化的用于病原菌快速检测的集成式微流控芯片。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus,MRSA)为模式菌,以mec A为靶基因,在优化条件下用芯片实现对病原菌的在线检测,完成对101~106cfu MRSA的在线裂解、LAMP扩增和产物测定,采用荧光原位检测可得101~105cfu的检测范围和101cfu的检出限。该微流控LAMP芯片结构简单,操作便捷,可在1 h内实现对MRSA mec A基因的快速检测,具有较高的灵敏度和特异性,为下一步临床生物样本病原菌快速检测微流控芯片系统的构建奠定前期研究基础。 展开更多

关键词 微流控芯片 环介导等温扩增 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MEC A基因 快速检测

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基于双富集微流控技术的食品中蜡样芽孢杆菌快速检测 被引量：2

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作者 唐璎 周春红 +3 位作者 杨晓楠 黄佳 邓展瑞 马婷婷 《中国测试》 CAS 北大核心 2023年第11期53-59,90,共8页

为实现食源性致病菌多场景即时检验,替换常规检验及快检技术中耗时的增菌培养过程,以缩短检验时间和降低实验环境及设备要求。研究以蜡样芽孢杆菌为研究对象,采用双层膜富集样品中菌体,磁珠提取纯化微量DNA的方式,取代增菌培养过程,同... 为实现食源性致病菌多场景即时检验,替换常规检验及快检技术中耗时的增菌培养过程,以缩短检验时间和降低实验环境及设备要求。研究以蜡样芽孢杆菌为研究对象,采用双层膜富集样品中菌体,磁珠提取纯化微量DNA的方式,取代增菌培养过程,同时将环介导等温扩增反应与微流控芯片相结合,有效避免扩增中气溶胶污染问题。实验结果显示:使用双富集微流控技术检测食品中蜡样芽孢杆菌,可将现行国标的检验时间由5~7 d缩短至1 h内,方法特异性良好,检出限为10 CFU/g(mL)等同于现行国标,Ct值变异系数<5%,显示重复性好。研究建立的双富集微流控技术快速检测食品中蜡样芽孢杆菌方法可实现食源性致病菌即时快速检验,为食源性致病菌引起的食品安全事件和舆情风险防控快速反应提供技术支撑。 展开更多

关键词 食源性致病菌快检 蜡样芽孢杆菌 膜富集 磁珠纯化DNA 环介导等温扩增 微流控芯片

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LAMP结合基因芯片技术在快速检测嗜肺军团菌中的应用 被引量：6

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作者 杨俊发 许飞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第14期2383-2385,共3页

目的:开发一种可以快速、准确检测嗜肺军团菌的检测方法。方法:采用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)对嗜肺军团菌的特异性DNA保守片段和其他对照菌种DNA进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,... 目的:开发一种可以快速、准确检测嗜肺军团菌的检测方法。方法:采用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)对嗜肺军团菌的特异性DNA保守片段和其他对照菌种DNA进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,观察是否可在芯片相应的区域出现杂交信号。结果:只有嗜肺军团菌DNA经LAMP反应后出现特异性的扩增条带,与PCR扩增基因的最低稀释倍数105相比,LAMP最低稀释倍数可达107,反应的灵敏度比PCR高100倍左右,同时将经LAMP扩增后的基因与基因芯片杂交,相应的嗜肺军团菌区域可出现杂交信号。结论:LAMP技术结合基因芯片杂交技术具有灵敏度高,特异性好,简便快速等优势,可提高检验鉴定结果的准确性。 展开更多

关键词 环介导等温核酸扩增技术 基因芯片 嗜肺军团菌 检测

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鉴别牛5种重要病毒的LAMP-基因芯片方法的建立 被引量：17

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作者 高峰 华利忠 +5 位作者 于伯华 王建峰 张丹 张琳 唐泰山 张常印 《动物医学进展》 北大核心 2019年第5期7-12,共6页

为建立牛的主要疫病的快速、准确及高通量鉴别诊断技术,以赤羽病病毒(AKV)、牛白血病病毒(BLV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)5种牛传染病病原为研究对象,将LAMP技术与微流控芯片技术有机结合,建立... 为建立牛的主要疫病的快速、准确及高通量鉴别诊断技术,以赤羽病病毒(AKV)、牛白血病病毒(BLV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)5种牛传染病病原为研究对象,将LAMP技术与微流控芯片技术有机结合,建立了相应的基因芯片检测技术,并优化了该基因芯片的反应条件。结果表明,建立的基因芯片可同时检测上述5种病原,特异性好,60 min反应时间即可给出检测结果。其中AKV和PPRV的敏感性为10~3 copies/μL,BLV的敏感性为10~5 copies/μL,BTV和BVDV的敏感性为10~2 copies/μL,与LAMP检测的敏感性一致。成功建立了基于LAMP技术的5重RT-LAMP基因芯片,可同时快速准确检测上述5种病毒,为口岸检疫探索出一种能快速、高通量检测动物疫病的方法。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 高通量 微流控芯片 牛的病毒鉴别检测

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