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猫1型疱疹病毒分离鉴定及部分生物学特性分析
1
作者 郑焕琴 姜晓敏 +5 位作者 岳红 王宝岩 刘洋 张兴晓 张建龙 朱洪伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3040-3048,共9页
本试验旨在从临床样品中得到猫1型疱疹病毒(feline herpesvirus-1,FHV-1)分离株,为FHV-1疫苗候选毒株的研究奠定基础。从宠物医院采集疑似感染FHV-1的猫的眼鼻拭子,用猫肾细胞(Crandell reese feline kidney,CRFK)进行病毒分离,并进行... 本试验旨在从临床样品中得到猫1型疱疹病毒(feline herpesvirus-1,FHV-1)分离株,为FHV-1疫苗候选毒株的研究奠定基础。从宠物医院采集疑似感染FHV-1的猫的眼鼻拭子,用猫肾细胞(Crandell reese feline kidney,CRFK)进行病毒分离,并进行分离株的遗传进化分析、形态学电镜观察以及动物回归试验等系统评价。结果显示:用CRFK细胞对临床样品进行分离培养,经PCR和间接免疫荧光方法鉴定为FHV-1,并命名为“FHV-ZH2202”株。经高通量测序以及基因参考组装拼接获得病毒的全基因组序列后,将其与国内流行毒株进行SNP分析,发现非同义突变SNP主要集中分布在UL22和US7基因。通过构建系统发育树对FHV-ZH2202与国内外流行株进行分析,FHV-ZH2202株与国内外流行株在UL22基因的同源性较高,但对于US7基因具有相对较远的亲缘性。动物回归试验结果表明,FHV-ZH2202株感染组猫全部发病,出现打喷嚏、眼鼻分泌物等典型症状,但无死亡病例出现。感染后第2天开始,感染组猫通过眼鼻向外界排毒,持续6~8 d。本研究成功分离到1株FHV-1病毒,并对其部分生物学特性进行了鉴定,证明FHV-ZH2202株具有一定的致病性,为FHV-1疫苗候选毒株的研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 猫1型疱疹病毒 分离鉴定 生物学特性分析 高通量测序 动物回归试验
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猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析 被引量：1
2
作者 张晶晶 孙慧敏 +1 位作者 宋家升 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期515-521,共7页
[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... [目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选
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上海市门诊宠物猫和动物园流浪猫的猫疱疹病毒1型中和抗体检测 被引量：6
3
作者 赵洪进 白艺兰 +8 位作者 杨显超 朱九超 卢军 陶田谷晟 于讳茹 葛杰 刘健 鞠厚斌 王建 《中国动物检疫》 CAS 2020年第10期127-130,共4页
为了解临床中猫疱疹病毒1型(FHV-1)疫苗的免疫效果和流浪猫的FHV-1感染状况,利用临床分离株建立了FHV-1中和抗体检测方法,并对20份宠物门诊FHV-1免疫猫血清和10份未免疫的动物园流浪猫血清进行中和抗体检测。结果显示,免疫宠物猫和未免... 为了解临床中猫疱疹病毒1型(FHV-1)疫苗的免疫效果和流浪猫的FHV-1感染状况,利用临床分离株建立了FHV-1中和抗体检测方法,并对20份宠物门诊FHV-1免疫猫血清和10份未免疫的动物园流浪猫血清进行中和抗体检测。结果显示,免疫宠物猫和未免疫流浪猫的抗体阳性率均为60%。结果表明,上海市FHV-1疫苗免疫效果不佳,未免疫流浪猫FHV-1感染较严重。结果提示,需加强猫科动物的FHV-1免疫抗体监测,及时补免,同时加强流浪猫的管理、收容、免疫和监测。本研究为防控猫科动物FHV-1感染提供了参考。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1型 家养猫 流浪猫 中和抗体检测
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猫疱疹病毒1型部分糖蛋白的研究进展 被引量：4
4
作者 张继一 王竹 刘宝山 《养殖技术顾问》 2013年第5期212-213,共2页
猫传染性鼻气管炎又名猫疱疹病毒1型感染症,是由猫疱疹病毒1型引起的猫的急性和高度接触性的上呼吸道感染,该病毒是具有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜糖蛋白对病毒的吸附、侵入和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生中和抗体。囊膜糖蛋白... 猫传染性鼻气管炎又名猫疱疹病毒1型感染症,是由猫疱疹病毒1型引起的猫的急性和高度接触性的上呼吸道感染,该病毒是具有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜糖蛋白对病毒的吸附、侵入和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生中和抗体。囊膜糖蛋白的研究不仅能了解病毒分子生物学的结构和功能,而且对该病的预防和诊断也具有重要意义。笔者就gB蛋白和gD蛋白的结构和分子生物学特性作一综述,并对其研究展进行了展望。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1型 传染性鼻气管炎 糖蛋白 猫
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猫疱疹病毒1型的分离鉴定及gD基因序列分析 被引量：11
5
作者 孙春艳 钱鹏 +8 位作者 王洁 曹玉娇 崔宁宁 霍宁宁 黄柏成 习向锋 刘玉秀 林德贵 田克恭 《动物医学进展》 北大核心 2020年第3期30-35,共6页
为研究猫疱疹病毒1型(FHV-1)的分子流行病学特征,对2016年-2017年从洛阳及天津地区多家宠物医院收集的具有上呼吸道感染症状的病猫眼鼻拭子样品,用FK-81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察和gD基因测序分析等方法鉴... 为研究猫疱疹病毒1型(FHV-1)的分子流行病学特征,对2016年-2017年从洛阳及天津地区多家宠物医院收集的具有上呼吸道感染症状的病猫眼鼻拭子样品,用FK-81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察和gD基因测序分析等方法鉴定所分离的病毒,并进行病毒体外生长动力学研究。结果显示,病料在FK-81细胞上接种后24 h^36 h呈现变圆、融合、局灶性堆积聚团和脱落等细胞病变;分离毒株可被FHV-1单克隆抗体特异性识别;电镜下可观察到病毒粒子呈圆形、有囊膜、直径约130 nm,具有疱疹病毒科的典型形态特征,将所分离到的5株FHV-1分别命名为2016TJ1株、2016TJ2株、2017LY1株、2017LY2株和2017LY3株;病毒一步生长曲线测定结果显示,接种后12 h^36 h病毒快速增殖,40 h^60 h病毒滴度达到高峰,72 h病毒滴度开始下降;5株FHV-1 gD基因序列之间的同源性为100%,核酸序列高度保守且与国内外流行株及疫苗株的同源性极高。研究结果为我国宠物猫群中FHV-1的病原分离、分子流行病学调查等研究积累了资料。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1型 gD基因序列分析 分离鉴定 生长动力学
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猫疱疹病毒1型RPA-Cas12a-LFD检测方法的建立及初步应用 被引量：5
6
作者 黄坚 刘韵佳 +1 位作者 杨晓农 李妍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1638-1643,共6页
猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1,FHV-1)为水痘病毒属的双链DNA包膜病毒,是引起猫上呼吸道感染的主要病原之一。本研究以重组聚合酶扩增(RPA)、Cas12a反式酶切反应和侧流层析试纸条(LFD)显示技术为基础,旨在建立靶向FHV-1 TK基因的R... 猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1,FHV-1)为水痘病毒属的双链DNA包膜病毒,是引起猫上呼吸道感染的主要病原之一。本研究以重组聚合酶扩增(RPA)、Cas12a反式酶切反应和侧流层析试纸条(LFD)显示技术为基础,旨在建立靶向FHV-1 TK基因的RPA-Cas12a-LFD快速可视化检测方法。根据FHV-1 TK基因的保守片段序列设计RPA引物和合成crRNA的引物,并通过反应体系验证、RPA-Cas12a-LFD检测灵敏度和特异性分析,以及临床样本的符合检测,评价FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法的有效性。结果显示,建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法可以特异性地检出FHV-1(与其他猫相关病原无交叉反应),灵敏度极高(最低检测限为2.35×10^(-1) copies·μL^(-1)),检测时间短,结果可视化。该方法对20份表现明显症状的患猫呼吸道样本的FHV-1检出率(35%,7/20)高于现有的TB Green qPCR方法(25%,5/20),对其中5份阳性样本的检测符合率为100%。综上表明,成功建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD检测方法的特异性好和敏感性极高,不需要特殊的检测设备,可以作为FHV-1现场快速检测的有效工具。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1型 RPA-Cas12a-LFD 核酸检测 应用
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猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒1型三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：6
7
作者 陈林文 冀伟 +5 位作者 曹龙龙 王莹 李秋燕 曹胜波 陈清秀 周登元 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1141-1147,1198,共8页
为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原... 为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原的目的基因并克隆至pMD18-T载体中,构建重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1,并均经PCR和测序鉴定。将3种重组质粒标准品稀释到同一浓度1×10^(8)拷贝/μL,按体积比1∶1∶1混合后作为模板,采用方阵法优化各反应条件后,建立了检测上述病原的三重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。以FPV、FCV、FHV-1、猫博卡病毒、猫冠状病毒、猫支原体、猫白血病病毒、猫星状病毒的基因组为模板采用本研究建立的方法检测,评估该方法的特异性,结果显示,该方法仅能检测到FPV、FCV、FHV-1,而其他病原的检测结果均为阴性。选取1×10^(0)拷贝/μL~1×10^(6)拷贝/μL的混合质粒标准品和10^(-0.5) TCID_(50)/mL~10^(5.5) TCID_(50)/mL的混合病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法检测重组质粒和病毒的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1的检测限均为1.0×10^(1)拷贝/μL,对3种病毒的检测限均约为10^(0.5) TCID_(50)/mL;以1×10^(7)拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10^(3)拷贝/μL质粒标准品混合物作为模板分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于3%。利用建立的该三重荧光定量RT-PCR和常规PCR对81份临床样品(77份猫的眼、鼻、咽、肛混合拭子样品和4份组织病料样品)分别检测,结果显示三重荧光定量RT-PCR检测出47份FPV、13份FCV和13份FHV-1阳性样品,而常规PCR分别检测出39份FPV、9份FCV和6份FHV-1阳性样品,该三重荧光定量RT-PCR与FPV、FCV、FHV-1常规PCR的总符合率分别为90.12%、95.06%、92.59%。本研究建立的三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,为FPV、FCV、FHV-1临床样品的快速鉴别检测提供了有力技术支持。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 猫杯状病毒 猫疱疹病毒1型 三重荧光定量RT-PCR
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FHV-1和FCV双重TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立和应用 被引量：1
8
作者 静争 金红岩 +4 位作者 王春艳 王文杰 沈佳宇 范志坚 侯绍华 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期58-64,共7页
为了快速、便捷、准确诊断猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV),本试验选取FHV-1的糖蛋白C(GC)基因(Gen Bank登录号:OR504662)和FCV的衣壳蛋白1(VP1)基因(Gen Bank登录号:OP904215)以及一段猫外源性内标序列设计并合成引物和探针,构... 为了快速、便捷、准确诊断猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV),本试验选取FHV-1的糖蛋白C(GC)基因(Gen Bank登录号:OR504662)和FCV的衣壳蛋白1(VP1)基因(Gen Bank登录号:OP904215)以及一段猫外源性内标序列设计并合成引物和探针,构建重组阳性质粒标准品p MD19-T-G、p MD19-T-P和p MD19-T-C,建立了双重Taq Man实时荧光定量PCR方法。以重组阳性质粒标准品绘制标准曲线,验证该方法的特异性、灵敏性和重复性,利用建立的方法检测33份临床样本评估该方法的可行性,并对泰州市292份流浪猫眼口鼻分泌物样本进行检测。结果显示,本试验建立的双重Taq Man实时荧光定量PCR方法具有良好的线性关系,对其他病原无交叉反应,对FHV-1和FCV的最低检测限均为1×10^(1)copies/μL,组内和组间的变异系数均小于2%;对33份临床样本的检测结果显示,FHV-1和FCV的阳性符合率为100%,FHV-1总符合率为93.9%,FCV总符合率为90.9%;292份流浪猫眼口鼻分泌物样本中,FHV-1阳性率为20.9%,FCV阳性率为46.2%,FHV-1和FCV混合阳性率为12.0%。结果表明,本试验建立的双重Taq Man实时荧光定量PCR,特异性强、灵敏度高、重复性好,为临床猫呼吸系统疾病病原鉴别诊断和宠物健康监测提供了技术支持。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1型(FHV-1) 猫杯状病毒(FCV) 实时荧光定量PCR
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FHV-1阳性猫角膜腐骨病不同手术方式治疗效果的比较 被引量：1
9
作者 毕静文 达举云 +1 位作者 史金莲 张勇 《动物医学进展》 北大核心 2022年第10期126-131,共6页
为探究猫角膜腐骨病最佳治疗方式,试验选取了患猫角膜腐骨病的病例共90例,应用PCR方法对患猫眼、鼻、口拭子样本进行猫疱疹病毒1型(FHV-1)检测。对检出的26例FHV-1阳性患猫采取了不同的手术方式进行治疗。术后1个月通过裸眼观察对比角... 为探究猫角膜腐骨病最佳治疗方式,试验选取了患猫角膜腐骨病的病例共90例,应用PCR方法对患猫眼、鼻、口拭子样本进行猫疱疹病毒1型(FHV-1)检测。对检出的26例FHV-1阳性患猫采取了不同的手术方式进行治疗。术后1个月通过裸眼观察对比角膜透明度,发现采用生物补片修补术的优于自体角膜结膜板层移植术的,采用自体角膜结膜板层移植术的优于结膜瓣遮盖术的。为了探究治疗效果更好的手术方式,进行了异种角膜移植治疗猫角膜腐骨的尝试。对1例角膜腐骨患猫进行了兔角膜板层移植,1周后拆除第三眼睑遮盖,发现眼部毛细血管网沿角膜缘向角膜爬行速度较正常时间快1倍,3周后角膜基本透明仅有少量瘢痕。结果表明生物补片修补术治疗效果好于其他方法,兔角膜板层植片方式可尝试但还需要进一步验证。 展开更多
关键词 猫 角膜腐骨 猫疱疹病毒1型 手术治疗 异种角膜板层移植术
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猫常见传染病的防治研究进展
10
作者 熊霙 周含笑 +5 位作者 杨斌 王妙玮 单靖方 祖丽阿亚提·阿卜杜热西提 杨思远 王亚君 《黑龙江农业科学》 2024年第10期108-113,共6页
近年来,宠物饲养数量呈上升态势,宠物猫的养殖量增长速度尤为突出,在城市宠物猫中常见传染病的发病率也随之提高。猫泛白细胞减少症病毒(Feline Panleukopenia Virus,FPV)、猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)、猫疱疹病毒1型(Feline H... 近年来,宠物饲养数量呈上升态势,宠物猫的养殖量增长速度尤为突出,在城市宠物猫中常见传染病的发病率也随之提高。猫泛白细胞减少症病毒(Feline Panleukopenia Virus,FPV)、猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)、猫疱疹病毒1型(Feline Herpesvirus 1,FHV-1)、猫艾滋病毒(FIV)以及猫白血病病毒(Feline Leukemia Virus,FeLV)的发病率较高,这些病毒的传播速度快,传播途径广泛且一年四季均可发病,严重危害猫科动物尤其是宠物猫的健康。有效的疫苗免疫是控制上述疾病最经济、最直接的措施。本文对上述病毒的流行情况、临床治疗以及常用预防疫苗进行了全面的介绍和总结,通过比较现有各类疫苗的优势与不足,预测了疫苗未来发展趋势,以期对我国猫常见传染病的诊治与疫苗研发提供参考。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 猫疱疹病毒1型 猫杯状病毒 猫艾滋病毒 猫白血病病毒 疫苗
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