猪A群轮状病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立与运用

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作者 林青 康龙滨 +5 位作者 吴瑞森 赵文娟 陈秋勇 王隆柏 周伦江 俞道进 《福建农业学报》 北大核心 2025年第4期370-376,共7页

【目的】建立一种猪A群轮状病毒(porcine rotavirus group A, PoRV A)快速检测方法,用于PoRV检测和流行病学调查。【方法】参考GenBank中猪A群轮状病毒(PoRVA)VP6基因序列(登录号MT025937.1、OP978242.1、PP566178.1)设计特异性引物和探... 【目的】建立一种猪A群轮状病毒(porcine rotavirus group A, PoRV A)快速检测方法,用于PoRV检测和流行病学调查。【方法】参考GenBank中猪A群轮状病毒(PoRVA)VP6基因序列(登录号MT025937.1、OP978242.1、PP566178.1)设计特异性引物和探针,优化反应体系中引物和探针的浓度,建立Taq Man RT-qPCR检测方法,并通过特异性、灵敏性和重复性的结果以及临床应用对该方法进行评价。【结果】该方法可特异性扩增PoRV核酸,最低检出限度为27.0 copies·μL^(-1),灵敏度高于普通RT-PCR 100倍;与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(porcinedeltacoronavirus,PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of swine, TGEV)核酸均无交叉反应;组内和组间变异系数均小于1.10%,重复性好。151份疑似PoRV的临床样品使用RT-qPCR进行检测,结果显示检出率为42.38%(64/151),优于常规RT-PCR的检出率(33.11%,50/151)。【结论】本研究基于猪A群轮状病毒VP6基因,建立了适用于PoRV A检测及其流行病学调查的Taq Man实时荧光定量PCR检测方法,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优势,为猪轮状病毒检测和流行病学调查提供了技术手段。 展开更多

关键词 猪a群轮状病毒 Taq Man探针 荧光定量RT-PCR

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猪A群轮状病毒的分离与鉴定 被引量：18

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作者 库旭钢 张坤 +1 位作者 刘羽茜 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期275-281,共7页

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行... 目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行病毒分离传代。再对分离毒株进行常规RT-PCR鉴定和电镜观察,并对分离毒株的VP6、VP7和VP8基因进行测序及序列分析。结果成功分离猪A群轮状病毒TM-a株,经序列同源性分析发现,与TM-a株VP6、VP7和VP8基因同源性最高的毒株分别为中国北京人源LL3354株、印度人源RMC321株和日本野猪源GUB-71株,其相似性为96.0%、95.1%和97.0%。该TM-a株轮状病毒不同基因表现出与人源轮状病毒和猪源轮状病毒的高度同源性,推测猪A群轮状病毒可能在人畜间传播,发生基因重组现象。 展开更多

关键词 猪a群轮状病毒 分离 鉴定

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1株G26P[23]型猪A群轮状病毒的基因组特征 被引量：5

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作者 魏春华 李佳睿 +6 位作者 杨圆 但惠娟 陈昊宇 祝冰清 戴爱玲 杨小燕 刘建奎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期426-432,共7页

目的分析2021年从福建省发生腹泻的猪场分离到的1株G26P[23]新基因型猪轮状病毒RVA/pig/CHN/FJSH01/2021/G26P[23](简称FJSH01)的分子特征。方法利用MARC-145细胞进行RV分离,采用RT-PCR方法对分离株FJSH01的全基因组进行了测定,利用在... 目的分析2021年从福建省发生腹泻的猪场分离到的1株G26P[23]新基因型猪轮状病毒RVA/pig/CHN/FJSH01/2021/G26P[23](简称FJSH01)的分子特征。方法利用MARC-145细胞进行RV分离,采用RT-PCR方法对分离株FJSH01的全基因组进行了测定,利用在线分型工具RotaC v2.0对其基因型进行鉴定,并对其分子遗传特征进行了分析。结果分离株FJSH01的基因型图谱为G26-P[23]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1,即G26P[23]型。分离株FJSH01的VP3、NSP1、NSP3和NSP5基因分别与人源轮状病毒RVA/Human_wt/VNM/30378/2009/G26P[19]、RVA/Human-wt/VNM/NT0077/2007/G4P[6]、Human/LL4260/China/T1和RVA/Human/Ryukyu-1120的核苷酸同源性最高,为96.01%~98.65%,其余7个片段与猪源轮状病毒(PoRV)的核苷酸同源性最高,为95.12%~97.99%,表明分离株FJSH01可能为人源轮状病毒和猪源轮状病毒重配后的病毒株。结论G26P[23]型PoRV为国内首次鉴定,研究结果丰富了PoRV分子流行病学资料,为PoRV预防控制提供理论参考。 展开更多

关键词 猪a群轮状病毒 型 病毒分离 遗传进化分析

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2022—2023年我国部分地区猪A群轮状病毒分子流行病学调查分析 被引量：8

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作者 谷拉强 陶然 +5 位作者 程曦 张雪寒 周金柱 王丹丹 王建新 李彬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3083-3091,共9页

【目的】探究我国部分地区猪A群轮状病毒(RVA)的分子流行病学特征,明确当前的优势基因型,为RVA科学防控与疫苗研发提供理论依据。【方法】2022年1月—2023年3月收集江苏、江西、福建、山西和贵州5省36个规模化猪场送检的434份腹泻仔猪... 【目的】探究我国部分地区猪A群轮状病毒(RVA)的分子流行病学特征,明确当前的优势基因型,为RVA科学防控与疫苗研发提供理论依据。【方法】2022年1月—2023年3月收集江苏、江西、福建、山西和贵州5省36个规模化猪场送检的434份腹泻仔猪粪便样品,采用RT-PCR检测样品RVA阳性情况,对部分RVA阳性样品的VP7和VP4基因进行扩增及测序,与各型参考序列进行多序列比对,使用MegAlign进行核苷酸序列同源比对分析,并采用MEGA 7.0的邻接法构建系统发育进化树。【结果】RT-PCR检测结果显示,434份腹泻仔猪粪便样品中RVA阳性样品为196份,阳性检出率为45.16%。2022年与2023年初的阳性检出率分别为40.37%(132/327)和59.81%(64/107)。根据样品来源地区,RVA阳性检出率最高的是江苏(57.70%),其次是江西(55.71%),福建、贵州和山西的RVA阳性检出率分别是35.66%、30.00%和22.23%。共获得各地区12株RVA的VP4和VP7基因序列信息,遗传进化分析结果表明,G型中G9为优势基因型(占83.4%),G4和G5分别占8.3%;而P型中P7为优势基因型(占75.0%),其次为P13和P23,分别占16.7%和8.3%;12株RVA分属4种基因型组合,分别为G9P[7](占75.0%)、G5P[13](占8.3%)、G9P[13](占8.3%)和G4P[23](占8.3%)。【结论】我国部分省份猪场RVA阳性检出率持续升高,猪群中RVA基因型复杂多样,优势基因型组合为G9P[7]。因此,今后有必要对猪群中RVA的流行情况进行持续监测,结合基因型致病性制定预防措施并开发针对性疫苗。 展开更多

关键词 猪a群轮状病毒 VP4基因 VP7基因 分子流行病学

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华东地区猪A群轮状病毒的VP7和VP4基因序列分析 被引量：8

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作者 常新见 周金柱 +6 位作者 鲁天弈 范宝超 郭容利 朱琳 李彬 牛家强 何孔旺 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期3-7,12,共6页

为了掌握华东地区猪轮状病毒(PRV)的流行情况,通过对华东地区猪轮状病毒流行病学的调查,分析临床猪轮状病毒对应的2个抗原序列VP7和VP4的基因型,进而丰富VP7和VP4基因库。采集2017-2018年华东地区包括江苏、浙江、上海、山东、安徽等省(... 为了掌握华东地区猪轮状病毒(PRV)的流行情况,通过对华东地区猪轮状病毒流行病学的调查,分析临床猪轮状病毒对应的2个抗原序列VP7和VP4的基因型,进而丰富VP7和VP4基因库。采集2017-2018年华东地区包括江苏、浙江、上海、山东、安徽等省(市),部分猪场猪的粪便拭子共201份,PCR检测PRV阳性52份,阳性率25.9%。选择5个阳性样本进行VP7和VP4基因全长扩增并克隆测序,应用DNASTAR、MEGA5等生物学软件对其进行比对分析。结果显示:5个VP7核苷酸序列全长均为1 062 bp,5个VP4序列全长均为2 362 bp。VP7与2008年分离的G9型代表毒株NMTL的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93.2%~95.2%和97.2%~97.5%。VP4与OSU毒株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为98.5%~98.7%和99.3%~99.4%。表明这5株猪轮状病毒的基因型鉴定为G9P7。与参考毒株相比,VP7氨基酸第100、122、180、309位有突变,但无插入和缺失现象,VP4氨基酸在第30、137、686、774位有突变,但无插入和缺失。 展开更多

关键词 华东地区 VP7 VP4 序列分析 猪a群轮状病毒 抗原表位

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一步法多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒方法的建立和应用 被引量：3

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作者 于新友 李天芝 沈志强 《养猪》 2016年第2期105-108,共4页

根椐Gen Bank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(PARV)基因序列,分别设计3对引物,在建立各病毒单项一步法RT-PCR技术的基础上,优化多重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的一步法多重RT-PCR检测方法... 根椐Gen Bank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(PARV)基因序列,分别设计3对引物,在建立各病毒单项一步法RT-PCR技术的基础上,优化多重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的一步法多重RT-PCR检测方法,用这3对引物对同一样品中的PEDV、TGEV和PARV核酸模板进行多重RT-PCR扩增,结果可同时扩增PEDV的450 bp、TGEV的609 bp、PARV的241 bp特异性片段,而对其它4种病原的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该多重RT-PCR技术能检出10 pg的PEDV、10 pg的TGEV和1 pg的PARV模板。用67份临床病料对建立的多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的一步法多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪a群轮状病毒 一步法多重RT-PCR

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A群猪轮状病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及其应用

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作者 陈冰冰 蔡蔚游 +3 位作者 刘玉彤 王修武 孙守湖 贺东生 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期4095-4100,共6页

旨在建立一种特异、灵敏的A群猪轮状病毒(porcine rotavirus A,PoRVA)微滴式数字PCR(ddPCR)新型检测方法。本研究根据GenBank中PoRVA的VP 6基因保守序列,设计猪轮状病毒特异性引物和探针,优化其反应条件,从而构建PoRVA的ddPCR检测方法,... 旨在建立一种特异、灵敏的A群猪轮状病毒(porcine rotavirus A,PoRVA)微滴式数字PCR(ddPCR)新型检测方法。本研究根据GenBank中PoRVA的VP 6基因保守序列,设计猪轮状病毒特异性引物和探针,优化其反应条件,从而构建PoRVA的ddPCR检测方法,并测定其特异性、灵敏度、重复性以及临床样品试验。优化反应条件结果显示,最佳引物浓度为600 nmol·L^(-1),最佳探针浓度为300 nmol·L^(-1);退火温度在56℃时,病毒阳性液滴拷贝数最高;特异性结果显示,自行建立的检测方法仅能检出PoRVA,而猪丁型冠状病毒、猪流行性腹泻病毒等七种对照病毒核酸检测结果均为阴性;灵敏度结果显示,该方法最低检测限度为3.97 copies·μL^(-1),比普通PCR(最低检测限度3970 copies·μL^(-1))和荧光定量PCR(最低检测限度39.7 copies·μL^(-1))分别高1000倍和10倍;重复性结果显示,组内和组间变异系数小于10%;对142份临床样品检测显示,ddPCR检出阳性率高于qPCR和PCR。综上,本研究自行建立的PoRVA ddPCR新型检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于猪轮状病毒早期感染诊断和流行病学调查,可为日后持续性监控猪轮状疫情提供可靠的手段。 展开更多

关键词 a群猪轮状病毒 微滴式数字PCR 检测方法

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2022—2024年松江区猪轮状病毒A群监测结果分析

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作者 金立 《上海畜牧兽医通讯》 2025年第4期28-30,共3页

为有效制定上海市松江区猪群腹泻类疫病的防控策略,对2022—2024年该区采集的1215份猪粪便拭子样品进行猪轮状病毒A群核酸检测。结果显示,共检出119份病毒核酸阳性样品,总阳性率为9.8%,且阳性率呈逐年升高趋势,2024年高达27.8%;冬春季... 为有效制定上海市松江区猪群腹泻类疫病的防控策略,对2022—2024年该区采集的1215份猪粪便拭子样品进行猪轮状病毒A群核酸检测。结果显示,共检出119份病毒核酸阳性样品,总阳性率为9.8%,且阳性率呈逐年升高趋势,2024年高达27.8%;冬春季阳性率显著高于夏秋季。结果表明,松江区猪群存在猪轮状病毒A群感染风险,猪场须加强对猪轮状病毒病的防控。 展开更多

关键词 猪轮状病毒a群 聚合酶链式反应 腹泻

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猪轮状病毒G9P[7]型云南株的分离鉴定及VP4和VP7基因测序分析 被引量：1

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作者 王修武 邓可辉 +5 位作者 马沐林 关金连 韩淑杰 郭智轩 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期1-7,共7页

为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性... 为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性样品处理后接种至MA-104细胞进行PoRV分离;对分离毒株进行间接免疫荧光、电镜观察、胶体金检测和VP4、VP6、VP7基因测序及遗传进化分析。结果显示,仔猪肠道组织样品经终浓度20μg/mL的胰酶在37℃孵育2 h,能在MA-104细胞上增殖传代,第3代出现稳定的细胞病变,盲传20代,每隔5代进行PoRV的检测;间接免疫荧光试验可见特异性荧光,胶体金和RT-PCR检测均为PoRV阳性,电镜观察可见病毒粒子直径约为65 nm,呈车轮状,符合PoRV粒子典型形态特征,将该分离株命名为PoRV YN-A株。基因同源性比较和遗传进化树分析显示,YN-A株的VP6基因序列与国内A群GD株的同源性为99.93%,VP7与中国G9型NJ2012株的同源性为99.12%,VP4与美国P[7]型OSU株的同源性为98.91%,确定该分离株为猪A群轮状病毒G9P[7]型。YN-A株VP7序列在9个氨基酸位点存在点突变,即aa9(I→V)、aa16(V/T→I)、aa44(A→V)、aa100(D/E→N)、aa212(T/A→K)、aa221(N→S)、aa225(V→A)、aa271(I→V)、aa267(D→E)。首次从云南地区的腹泻仔猪小肠组织中成功分离到1株G9P[7]型的新基因型PoRV毒株,为PoRV的致病性、分子生物学特性研究及PoRV G9优势基因型新疫苗研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪a群轮状病毒 分离鉴定 G9基因型 基因测序 电镜观察

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2015～2016年我国东北三省地区猪A、B、C群轮状病毒流行情况调查 被引量：6

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作者 乔成鹏 翟军军 +4 位作者 邢宇昕 郜洪权 张鹏宇 王德海 孙东波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第2期33-39,共7页

为了解我国东北三省地区(黑龙江省、辽宁省、吉林省)规模化猪场新生仔猪的猪A群轮状病毒(GARV)、猪B群轮状病毒(GBRV)和猪C群轮状病毒(GCRV)的流行情况。利用巢式PCR方法对2015年1月至2016年10月从我国东北三省地区多个规模化猪场采集的... 为了解我国东北三省地区(黑龙江省、辽宁省、吉林省)规模化猪场新生仔猪的猪A群轮状病毒(GARV)、猪B群轮状病毒(GBRV)和猪C群轮状病毒(GCRV)的流行情况。利用巢式PCR方法对2015年1月至2016年10月从我国东北三省地区多个规模化猪场采集的108份仔猪腹泻病料和15份健康仔猪粪便样品进行分析。结果显示:黑龙江省GARV阳性率为47.4%,GBRV未检出,GCRV阳性率为5.3%;辽宁省GARV阳性率为51.5%,GBRV阳性率为3.03%,GCRV阳性率为6.1%;吉林省GARV的阳性率为21.1%,GBRV阳性率为7.1%,GCRV阳性率7.1%;并且存在GARV/GCRV混合感染的情况,因此,我国东北三省地区猪轮状病毒病的主要病原是GARV,但GBRV和GCRV也是幼龄猪群潜在的重要致病风险。为我国猪轮状病毒病的提前预防和综合防控提供流行病学参考数据。 展开更多

关键词 猪a群轮状病毒 猪B群轮状病毒 猪C群轮状病毒 巢式RT-PCR 流行病学调查

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A群猪轮状病毒VP6结构蛋白在杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量：6

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作者 原霖 张瑜 +6 位作者 刘洋 王婧怡 寇占英 亢文华 杨林 王传彬 倪建强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期476-480,共5页

为在杆状病毒表达系统中表达和纯化A群猪轮状病毒(PoRVA)VP6结构蛋白,在PoRVA VP6基因5'端融合添加组氨酸标签(6×His)后,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB中,得到重组转移载体pFastBac-VP6,并将其转化至DH10Bac感受态细胞... 为在杆状病毒表达系统中表达和纯化A群猪轮状病毒(PoRVA)VP6结构蛋白,在PoRVA VP6基因5'端融合添加组氨酸标签(6×His)后,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB中,得到重组转移载体pFastBac-VP6,并将其转化至DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆状病毒杆粒转染Sf9细胞后收获重组杆状病毒rBac-PoRVA-VP6,经SDS-PAGE和western blot鉴定结果显示,表达的PoRVA重组VP6蛋白约45 ku,并且能够被PoRVA阳性血清识别。上述结果表明,经杆状病毒表达系统表达的重组VP6蛋白具有良好的反应原性,为建立PoRVA抗体检测技术奠定了基础。 展开更多

关键词 a群猪轮状病毒 VP6蛋白 杆状病毒表达系统 重组蛋白表达

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A群猪轮状病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：4

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作者 迟延彬 陈建飞 +6 位作者 时洪艳 张鑫 石达 李长龙 韩斅 陈洪岩 冯力 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期70-74,共5页

试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。将A群G11血清型PoRVVP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化融合... 试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。将A群G11血清型PoRVVP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化融合蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞并进行有限稀释法克隆化筛选。经3次筛选,最终得到1株能与GST-VP7蛋白反应的特异性、稳定分泌抗体的阳性细胞克隆。Western blotting鉴定结果显示该单克隆抗体具有良好的免疫原性及特异性;MTT法中和试验结果显示其具有中和活性;分泌的单克隆抗体亚型为IgG2b。本试验结果表明A群PoRV VP7蛋白在大肠杆菌中成功表达且制备了单克隆抗体,可用于PoRV VP7蛋白结构和功能的研究,也为猪轮状病毒病的预防、诊断和治疗等研究奠定基础。 展开更多

关键词 a群猪轮状病毒 VP7基因 单克隆抗体

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重组G3P[13]型A群猪轮状病毒全基因组测序分析 被引量：5

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作者 王一丹 向华 +4 位作者 张斌 向萌 任玉鹏 邱文英 付利芝 《动物医学进展》 北大核心 2022年第4期1-7,共7页

为了解引发四川某猪场腹泻疫情的猪轮状病毒(PoRV)基因组特征和遗传变异规律,采用RT-PCR分别扩增PoRV 11个基因节段,并克隆测序,通过生物信息学分析软件研究病毒基因组特征、变异性及遗传进化规律。结果显示,SCMY-1株基因合型为G3-P[13]... 为了解引发四川某猪场腹泻疫情的猪轮状病毒(PoRV)基因组特征和遗传变异规律,采用RT-PCR分别扩增PoRV 11个基因节段,并克隆测序,通过生物信息学分析软件研究病毒基因组特征、变异性及遗传进化规律。结果显示,SCMY-1株基因合型为G3-P[13]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1,即G3P[13]型毒株。该毒株VP2、NSP2和NSP4基因与人源毒株同源性最高,分别与3株人源轮状病毒RVA/Human-wt/LKA/R1207/2009株、RVA/Human-wt/ZAF/UFS-NGS-MRC-DPRU2291/2009和RVA/Human/CU331-NR/08株单独聚为一小支,推测这可能增加SCMY-1株跨种传播到人的风险。此外,SCMY-1株VP4基因与美国3个猪源毒株同处一个小分支;VP7基因与RVA/Pig/China/LNCY/2016株遗传进化距离最近。上述结果提示,PoRV可能在国际和国内生猪贸易过程中被广泛传播。与NCBI上已登录毒株相比,SCMY-1株VP4、VP7蛋白氨基酸分别存在13个和2个独有氨基酸位点的突变,可能对VP4和VP7两个主要抗原毒力及抗原性产生影响。重组分析显示,SCMY-1株VP3基因由两个猪源亲本株重组而来,推测这可能增强病毒毒力和宿主适应性。研究结果丰富了PoRV基因组学和分子流行病学相关研究资料,为PoRV预防控制提供理论参考,也为深入研究PoRV跨物种传播的分子基础提供科学依据。 展开更多

关键词 型a群猪轮状病毒 基因组 遗传变异 基因重组

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四川省稻城县3个藏香猪猪场腹泻样本4种病毒的检测

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作者 张敏 杨丹娇 +4 位作者 刘怡雯 吴建平 蓝岚 叶忠明 何宗伟 《养猪》 2019年第6期89-91,共3页

为了调查稻城县规模化藏香猪猪场仔猪腹泻的原因,采集了3个暴发仔猪腹泻的猪场共50份样本,采用RT-PCR方法检测4种病毒的感染情况。结果显示,50份样本中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪δ冠状病毒、传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒4种病毒... 为了调查稻城县规模化藏香猪猪场仔猪腹泻的原因,采集了3个暴发仔猪腹泻的猪场共50份样本,采用RT-PCR方法检测4种病毒的感染情况。结果显示,50份样本中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪δ冠状病毒、传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒4种病毒的检出率分别为60%、0、0、0,猪流行性腹泻病毒在3个猪场的阳性率为64%、50%、60%。试验结果表明,PEDV是引起3个猪场腹泻的主要原因,为稻城县仔猪腹泻的防控提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪δ冠状病毒 传染性胃肠炎病毒 猪a群轮状病毒 仔猪腹泻 RT-PCR

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规模猪场仔猪腹泻病的诊断与防制 被引量：5

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作者 曾政 曹芸 +3 位作者 凌洪权 谢建华 蔺露 熊仲良 《中国猪业》 2012年第5期34-35,共2页

2010年以来,华东地区出现了大面积的仔猪腹泻病,部分省份的仔猪发病率高达87%,其主要病原为猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒。2012年1月,重庆长寿区一规模猪场暴发严重的仔猪腹泻病,仔猪多在吃初乳后1天左右发病,出现水样腹泻、... 2010年以来,华东地区出现了大面积的仔猪腹泻病,部分省份的仔猪发病率高达87%,其主要病原为猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒。2012年1月,重庆长寿区一规模猪场暴发严重的仔猪腹泻病,仔猪多在吃初乳后1天左右发病,出现水样腹泻、呕吐、脱水等症状。发病率高达70%,病死率达90%。经血清学和病原学诊断,该病主要由猪流行性腹泻病毒和猪A群轮状病毒引起,并伴发了大肠杆菌病和Kobu病毒病。 展开更多

关键词 腹泻 猪流行性腹泻病毒 猪a群轮状病毒病 诊断

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四川某猪场仔猪腹泻病的病原学诊断 被引量：2

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作者 沈思思 汤承 岳华 《四川畜牧兽医》 2017年第2期34-36,共3页

四川省双流区某商品猪场的5~10日龄仔猪暴发腹泻,且传播迅速,为查明病因,我们采集腹泻仔猪肛拭子15份,用RT-PCR分别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(GARV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪Delta冠状病毒(PDCoV)。结果显示:样本... 四川省双流区某商品猪场的5~10日龄仔猪暴发腹泻,且传播迅速,为查明病因,我们采集腹泻仔猪肛拭子15份,用RT-PCR分别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(GARV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪Delta冠状病毒(PDCoV)。结果显示:样本的总阳性率为14/15,其中PEDV、GARV的阳性数分别为11、8,双阳性数为5,而TGEV和PDCoV未检出,说明该猪场仔猪腹泻由PEDV及GARV感染引起,且PEDV和GARV混合感染的情况较为严重。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪a群轮状病毒 混合感染

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凉山地区猪腹泻样本中PEDV、PDCoV和GARV感染检测 被引量：2

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作者 彭艳伶 李昊 +4 位作者 余琼 李建 张斌 沈思思 任玉鹏 《四川畜牧兽医》 2017年第7期18-20,22,共4页

为了解四川省凉山州部分猪场3种猪腹泻病毒的感染情况,本研究采用RT-PCR方法,分别对来自德昌、冕宁县和宁南县多个规模化猪场的60份猪腹泻样本进行病原检测,包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪A群轮状病毒(GARV)... 为了解四川省凉山州部分猪场3种猪腹泻病毒的感染情况,本研究采用RT-PCR方法,分别对来自德昌、冕宁县和宁南县多个规模化猪场的60份猪腹泻样本进行病原检测,包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪A群轮状病毒(GARV)。结果显示:3种病原的检出率分别为PEDV15%、PDCoV33.33%、GARV58.33%,其中冕宁县PDCoV检出率为65%,而GARV检出率更高达70%;3种病毒混合感染的情况普遍存在,总体混合感染率分别为:德昌15%(3/20),冕宁60%(12/20),宁南5%(1/20),混合感染类型中尤以PDCoV和GARV的混合感染率最高,提示PDCoV和GARV可能存在更高的协同致病性。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪Delta冠状病毒 猪a群轮状病毒 RT—PCR

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贵州省2017年~2023年PEDV和PoRVA流行病学调查及PoRVA VP7、VP4基因的遗传演化分析 被引量：4

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作者 田红利 柳佳佳 +6 位作者 梁海英 曾智勇 汤德元 王彬 边孟婷 黄书 潘向英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期791-798,共8页

为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化... 为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化分析及其编码氨基酸序列的变异分析。结果显示,PEDV、PoRVA和PEDV+PoRVA的感染率分别为67.88%(112/165)、38.79%(64/165)和21.21%(35/165),且在不同年份、不同地区和不同季节均检出三者的感染。PCR结果显示,本实验扩增出27株PoRVA VP7基因和22株VP4基因;遗传进化分析结果显示共鉴定出6种G型和3种P型,其中G9(29.63%)和P[13](68.18%)为优势基因型,G3、G4、G5、G11、G26、P[6]和P[23]分别占7.41%、22.22%、22.22%、3.70%、14.81%、13.64%、18.18%。21份PoRVA样品鉴定出10种G/P组合基因型,G9P[13](19.05%)为优势组合基因型,G4P[13]、G5P[13]、G3P[13]、G4P[6]、G5P[23]、G9P[23]、G11P[13]、G26P[6]、G26P[13]分别占14.29%、14.29%、9.52%、9.52%、9.52%、9.52%、4.76%、4.76%及4.76%。同源性分析结果显示,27株VP7基因和22株VP4基因序列与NX疫苗株相应基因序列之间的同源性分别为75.5%~94.0%和68.5%~75.6%,氨基酸序列的同源性分别为78.3%~96.6%和72.0%~82.5%,部分PoRVA上述基因序列与国外、人源RVA的同源性最高。氨基酸位点变异分析结果显示,与NX疫苗株相比,所测PoRVA VP7和VP4氨基酸序列均存在特征性位点的变异,其中G型PoRVA VP7无氨基酸位点的缺失和插入,G9型PoRVA VP7存在3处(I^(208)T、K^(212)A/V/T、V^(271)I)变异,G3、G4、G5、G11和G26型PoRVA VP7存在17处(S^(28)R/K、A^(29)I/T/M/V、L^(40)I/V、V^(44)L、S^(71)T、Q^(73)G/N/S/E、S^(90)A/Q/K/R、G^(94)N/S/A/K、N^(100)D/E、T^(122)A/S、T^(147)A/G/N/D、Q^(189)S/T、I^(208)L/Q/T、K^(212)T/I/P/N、A^(213)N/T/D、E^(267)D/N、V^(271)I)变异;3株P[6]型PoRVA VP4在aa136缺失T,13株P[13]型PoRVA VP4在aa188~aa189插入E/D~Y/F,P[6]、P[13]和P[23]型PoRVA VP4存在26处(I^(92)V、Q^(94)E、Q^(113)T/P/N、T^(114)N/Q/S/R、T^(115)Q/E、N^(116)S/L/T、P^(148)A/Q/V/S/I、T^(180)E/N/D、P^(162)T、I^(174)V/L、C^(269)Y、R^(281)N、A^(286)L/S、T^(302)N、A^(340)S/V、T^(379)S、T^(403)A、S^(438)P、R^(553)K、A^(569)A、M^(570)L、A^(608)S、E^(660)D、I^(726)F、K^(733)N、S^(739)T)变异。上述结果表明,2017年~2023年贵州省PEDV和PoRVA感染率高且基因型复杂,其中PoRVA存在以G9型、P[13]型为主的流行,优势组合基因型为G9P[13]。本研究丰富了贵州省PEDV和PoRVA的流行病学资料,尤其为PoRVA感染的防控和候选疫苗株的筛选提供了参考数据。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪a群轮状病毒 分子流行病学 VP7和VP4基因 遗传演化分析

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PEDV、PoRVA和PDCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立与初步应用 被引量：3

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作者 胡泽奇 李润成 +5 位作者 谭祖明 谢秀艳 王江平 秦乐娟 李荣 葛猛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2267-2272,共6页

旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-... 旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-VP6和PDCoV-M基因设计了引物和探针,条件优化后进行性能评估,并与商品化试剂盒检测对比。结果显示:本研究建立的三重RT-qPCR方法具有良好特异性,对PRRSV、PCV_2和PRV等阳性核酸不发生扩增;具有较高的敏感性,PEDV、PoRVA和PDCoV的最低检测限均达1 copies·μL^(-1);重复性良好,组内和组间变异系数均小于1%;样本适应性广,检测不同样本类型时,变异系数均小于1%。与商品化试剂盒对比,本研究建立的方法PEDV和PoRVA的检测符合率为92.5%和97.5%,并对PDCoV的检测范围更广,对其变异毒株仍有较好的检测效果。本研究建立的检测方法具有特异性好、敏感性高、稳定性强和样本适应性广等优势,为临床腹泻样本提供了一种好的检测方法。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪a群轮状病毒 猪丁型冠状病毒 三重RT-qPCR

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PEDV、TGEV、PARV多重RT-PCR检测方法的建立及其应用 被引量：18

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作者 郭容利 何孔旺 +5 位作者 倪艳秀 茅爱华 温立斌 李彬 王小敏 俞正玉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1065-1069,共5页

建立了一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(PARV)的三重RT-PCR方法,并对其进行特异性与敏感性试验。在实验室检测中,此方法能检测约50 TCID50的混合病毒,能够扩增出3条长度为750 bp(PEDV)、5... 建立了一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(PARV)的三重RT-PCR方法,并对其进行特异性与敏感性试验。在实验室检测中,此方法能检测约50 TCID50的混合病毒,能够扩增出3条长度为750 bp(PEDV)、544 bp(TGEV)、275 bp(PARV)特异性片段,而其他病毒无特异性条带。应用该方法对江苏省及周边地区154份临床疑似病毒性腹泻病料进行检测,结果表明:PEDV、TGEV、PARV阳性率分别为53.2%、8.4%、5.2%。PEDV与TGEV混合感染率为5.2%,PEDV与PARV混合感染率为4.5%。该方法的建立对临床上进行这3种疾病混合感染的检测具有重要意义。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪a群猪轮状病毒 多重RT-PCR

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