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浙江省9株猪链球菌2型分离株Cps2J全基因克隆与序列分析 被引量:3
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作者 姚苹苹 王复甦 +5 位作者 朱函坪 梅玲玲 叶菊连 罗进 张政 姚晨辉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期62-64,共3页
目的了解浙江猪链球菌2型(SS2)分离株的分子基础及与国内外其他分离株的基因差异程度,确定Cps2J基因变异位点和频率,为该地区的猪链球菌防治提供科学依据。方法提取菌株DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增菌株Cps2J基因全片段,克隆入质粒载... 目的了解浙江猪链球菌2型(SS2)分离株的分子基础及与国内外其他分离株的基因差异程度,确定Cps2J基因变异位点和频率,为该地区的猪链球菌防治提供科学依据。方法提取菌株DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增菌株Cps2J基因全片段,克隆入质粒载体,纯化后采用ABI自动测序仪测定序列,并同国内外其他分离株的基因进行比较。结果扩增出9株菌株的Cps2J基因的完整开放阅读框(ORF)都为999bp,编码333个氨基酸,9株菌株Cps2J片段核苷酸高度同源,同源性在99.7%~100%;与国内外其他的SS2核苷酸的同源性为98.8%~99.0%,与猪链球菌1型的同源性只有56.8%~57.0%。结论9株浙江省猪链球菌2型分离株Cps2J基因序列非常保守,这些不同来源的菌株可能有相同的起源。 展开更多
关键词 猪链球菌2 Cps2j基因 序列分析
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3株人源猪链球菌2型湖南株cps2J、gdh、ef基因进化分析 被引量:1
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作者 欧新华 张如胜 +5 位作者 苏良 杨柳青 肖姗 姚栋 宋克云 孙边成 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期369-374,共6页
目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对... 目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株进行PCR扩增和序列测定,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行分析。结果 cps2J、gdh、ef基因包含的完整开放阅读框(ORF)分别为999bp、1 347bp、2 532bp,分别编码333、448、843个氨基酸。在线BLAST同源性分析表明,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株属于S.suis 2,3菌株cps2J、gdh、ef基因组序列之间的核苷酸同源性均为100%;进化树显示,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株与国内外猪源和人源S.suis 2菌株属于同一分支,同源性比较显示3株S.suis 2湖南分离株cps2J、gdh、ef基因与其他国内外S.suis株核苷酸序列同源性分别为99.8%~100%、96.4%~100%和99.7%~100%,氨基酸同源性分别为98.5%~100%、98.7%~100%和99.5%~100%。结论 3株人源S.suis 2湖南株cps2J、gdh、ef基因序列与国内外S.suis 2菌株相应基因序列同源性高,变异程度小。 展开更多
关键词 猪链球菌2 cps2j基因 gdh基因 ef基因 进化分析
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2型猪链球菌河南株cps2J基因的遗传进化关系分析 被引量:2
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作者 张青娴 徐引弟 +3 位作者 王治方 朱文豪 许峰 王克领 《养猪》 2020年第2期121-123,共3页
从河南某猪场断奶仔猪发生疫情的病死猪脑脊液中分离到一株细菌,经革兰氏染色初步确定为猪链球菌,应用PCR方法扩增猪链球菌谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)和荚膜多糖基因(capsular polysaccharide,cps)进行猪链球菌及血清... 从河南某猪场断奶仔猪发生疫情的病死猪脑脊液中分离到一株细菌,经革兰氏染色初步确定为猪链球菌,应用PCR方法扩增猪链球菌谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)和荚膜多糖基因(capsular polysaccharide,cps)进行猪链球菌及血清型鉴定,将阳性产物测序,并进行序列比较分析。结果表明,该分离株为2型猪链球菌,与参考菌株同源性在98%以上,其cps2J基因与人源致病性猪链球菌同源性达99.6%。 展开更多
关键词 2猪链球菌 cps2j基因 遗传进化
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猪链球菌2型荚膜多糖cps2J基因的克隆与原核表达 被引量:3
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作者 刘燕 刘军 +3 位作者 冯书章 郭学军 孙洋 祝令伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期434-437,共4页
利用PCR方法从猪链球菌2型(SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体,经酶切与表达质粒pMAL-p2x构建重组表达质粒pMALp2x-cps2J,转化至宿主菌TB1中诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了约80ku的可溶... 利用PCR方法从猪链球菌2型(SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体,经酶切与表达质粒pMAL-p2x构建重组表达质粒pMALp2x-cps2J,转化至宿主菌TB1中诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了约80ku的可溶性目的蛋白MBP-cps2J,约占菌体蛋白总量的13.5%。表达蛋白用Amylose树脂层析柱纯化,将纯化的融合蛋白MBP-cps2J免疫家兔制备抗血清,经ELISA和协同凝集试验检测,其与SS2呈特异性阳性反应。 展开更多
关键词 猪链球菌2 cps2j基因 协同凝集试验
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猪链球菌2型的Real-time PCR定量检测研究 被引量:6
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作者 蒋鲁岩 蔡潭溪 陈国强 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期843-845,850,共4页
目的 建立了基于TaqMan探针的Real-time PCR方法,实时、定量检测猪链球菌2型。针对GenBank公布的猪链球菌2型的csp2J基因序列设计一对引物和TaqMan探针,建立了Real-time PCR检测方法,制作标准曲线,定量检测猪链球菌2型。通过对6种... 目的 建立了基于TaqMan探针的Real-time PCR方法,实时、定量检测猪链球菌2型。针对GenBank公布的猪链球菌2型的csp2J基因序列设计一对引物和TaqMan探针,建立了Real-time PCR检测方法,制作标准曲线,定量检测猪链球菌2型。通过对6种细菌(9株菌株)的DNA进行扩增。结果所有4株猪链球菌2型均可产生扩增曲线,其他5株非猪链球菌2型均不产生扩增曲线。细菌纯培养物的检测敏感度为6~8CFU/PCR反应体系,相关系数均为0.99(r^2=0.99),整个试验可在1.5h内完成。建立的方法可用于猪链球菌2型的快速、定量检测。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 REAL-TIME PCR 猪链球菌csp2j基因 定量检测
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环介导等温扩增技术结合横向流动试纸条检测猪链球菌2型的应用研究 被引量:4
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作者 张莉 王利丽 +4 位作者 魏财文 杨春蕾 路超 池晶晶 鄢明华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1077-1082,1090,共7页
目的建立一种猪链球菌2型的快速检测方法。方法以猪链球菌2型cps2J基因序列为检测靶标设计6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,其中2条促环引物分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物,建立猪链... 目的建立一种猪链球菌2型的快速检测方法。方法以猪链球菌2型cps2J基因序列为检测靶标设计6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,其中2条促环引物分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物,建立猪链球菌2型LAMP-LFD检测方法。结果所建立的检测方法能够特异性的检测出猪链球菌2型,与试验对照菌株不存在交叉反应,其最低检测限为76cfu/mL,在对100份样品的检测中,LAMP-LFD方法检测出14份阳性样品,培养法检测出12份阳性样品,LAMP-LFD方法检测阳性率略高于病原培养法,两者间的P>0.05无统计学差异。结论所建立LAMP-LFD检测方法具有特异性好、敏感性高、操作简单、快速等特点,适合于动物食品中猪链球菌2型的检测。 展开更多
关键词 猪链球菌2 cps2j基因 环介导等温扩增 横向流动试纸条
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猪链球菌2型PCR-ELISA检测方法的建立与优化
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作者 方勤美 朱继昌 +1 位作者 池洪树 林天龙 《福建农业学报》 CAS 2012年第12期1275-1279,共5页
根据已发表的猪链球菌2型的cps2j基因序列,设计合成上游标记生物素的1对引物和1条标记地高辛的特异性探针,建立了该菌的PCR-ELISA检测方法。方法利用PCR仪作为杂交场所,并对几个主要条件参数进行优化,结果显示在鲑鱼精DNA浓度1.6mg·... 根据已发表的猪链球菌2型的cps2j基因序列,设计合成上游标记生物素的1对引物和1条标记地高辛的特异性探针,建立了该菌的PCR-ELISA检测方法。方法利用PCR仪作为杂交场所,并对几个主要条件参数进行优化,结果显示在鲑鱼精DNA浓度1.6mg·mL-1、变性温度为94℃、变性时间为1min、探针浓度为0.5umol·mL-1、杂交温度55℃、杂交时间1min、一抗作用时间45min、二抗作用时间40min时检测方法敏感性最好,特异性最强。通过对17个阴性样本检测,测得平均值为0.057,方差为0.047,计算得临界值为0.198。 展开更多
关键词 猪链球菌2型、PCR-ELISA cps2j基因
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