【目的】探讨猪链球菌2型超氧化物歧化酶A(SodA)、硫氧还蛋白A(TrxA)和TrxC基因在调控氧化应激和参与致病过程中的生物学功能。【方法】比较猪链球菌2型3个突变菌株ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC对抗应激能力和毒力的调控作用。通过应激存活试...【目的】探讨猪链球菌2型超氧化物歧化酶A(SodA)、硫氧还蛋白A(TrxA)和TrxC基因在调控氧化应激和参与致病过程中的生物学功能。【方法】比较猪链球菌2型3个突变菌株ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC对抗应激能力和毒力的调控作用。通过应激存活试验,分别检测SodA、TrxA和TrxC基因对不同氧化应激处理(0.04%过氧化氢(H 2O 2)、10 mol/L百草枯(PQ))的抗氧化应激能力以及不同温度(4、43℃)的抗温度应激能力;将不同基因缺失株与猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)、小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,探究3个基因对细胞黏附和抗吞噬功能的影响;通过小鼠攻毒试验,测定各组织载菌量和血清抗氧化酶与肝功能指标,探明SodA、TrxA和TrxC基因在抗氧化应激以及致病过程中的作用。【结果】抗应激试验结果显示,在不同氧化应激和不同温度应激条件下,ΔSodA和ΔTrxC菌株存活能力均极显著低于野生菌株(P<0.01),ΔTrxA菌株在43℃高温刺激下存活能力极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞黏附试验结果显示,SodA和TrxA基因缺失导致细菌黏附能力降低55%~65%,极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞抗吞噬试验结果显示,ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株在吞噬细胞中的存活率极显著或显著低于野生菌株(P<0.01;P<0.05)。动物攻毒试验结果显示,与野生菌株相比,ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株毒力均极显著下降(P<0.01);ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株组小鼠死亡率分别为10%、50%和20%,组织载菌量分别为3.6 lg CFU/g~4.4 lg CFU/g、4.2 lg CFU/g~5.1 lg CFU/g和3.1 lg CFU/g~4.1 lg CFU/g;野生菌株组小鼠死亡率为90%,组织载菌量为6.4 lg CFU/g~7.8 lg CFU/g。小鼠感染ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株后血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于野生菌株(P<0.01),天门冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性极显著低于野生菌株(P<0.01)。【结论】猪链球菌2型SodA和TrxC基因通过中和菌体内超氧根离子和维持蛋白稳态对抗氧化应激引起的损伤,从而介导细菌毒力,而TrxA可能作为一个调控基因参与抗氧化应激反应。展开更多
猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原体,猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)1954年首次在英国分离鉴定,在我国和其他养猪业发达的国家已多次流行,已成为危害我国养猪业和公共卫生安全的一个重要传染病。...猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原体,猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)1954年首次在英国分离鉴定,在我国和其他养猪业发达的国家已多次流行,已成为危害我国养猪业和公共卫生安全的一个重要传染病。本研究用SS2-ZY05719株按10^(9)、10^(8)、10^(6)CFU腹腔注射途径人工感染健康的新西兰兔,3种剂量均可引起发病并死亡,新西兰兔临床症状明显,感染组平均体温升高1℃~2℃。同时分析了SS2在兔体各组织中的分布,结果显示,高剂量感染组出现明显的临床症状且快速死亡,感染剂量与发病程度有正相关性,对各试验组新西兰兔内脏组织进行检测发现,SS2主要集中在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异,本文研究了SS2感染新西兰兔后的临床症状和各组织载菌量,为猪链球菌的防治及致病机理研究提供参考。展开更多
试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,...试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。展开更多
猪链球菌2型（Streptococcussuis type 2,SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌,严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组...猪链球菌2型（Streptococcussuis type 2,SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌,严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增SsnA基因片段,将该片段克隆到表达载体pET-28a（＋）中,在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达,获得大小为46 ku的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白质具有抗原反应活性。以纯化的融合蛋白作为包被抗原,建立了SsnA-ELISA鉴别诊断方法。对已知背景的人工感染及疫苗免疫血清和临床血清进行检测,比较感染血清和免疫血清的检测结果,结果发现两者差异显著（P〈0.05）,表明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的检测效果。利用该方法对采集自8个省份的1 446份血清进行检测,显示SS2的阳性率为0%~14.77%,平均阳性率为5.39%。本研究结果表明：猪链球菌2型SsnA可以作为一个良好的鉴别感染的分子诊断标识;对临床血清的检测结果表明感染及流行与气候环境存在明显的关系。展开更多
为建立稳定的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)人工发病模型,本试验以天津某发病猪场分离的SS2 Y15293株为研究对象,经腹腔注射感染昆明小鼠,测定其LD_(50),确定造模感染剂量,通过观察感染后小鼠的临床症状和病理变化,测定...为建立稳定的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)人工发病模型,本试验以天津某发病猪场分离的SS2 Y15293株为研究对象,经腹腔注射感染昆明小鼠,测定其LD_(50),确定造模感染剂量,通过观察感染后小鼠的临床症状和病理变化,测定试验期间各组小鼠体重和采食量的变化及细菌回归等试验对模型进行评估。结果显示,SS2 Y15293株致昆明小鼠的LD_(50)为6.7×10~7 CFU/mL。以1个LD_(50)的剂量攻毒,与对照组相比,试验小鼠主要发病表现为攻菌后24 h出现精神沉郁、被毛逆立、眼睛有分泌物,72～96 h出现头颈歪斜、翻滚、震颤等神经症状,死亡高峰在48～72 h。3次重复试验中,试验组小鼠的发病率均为100%,死亡率为50%～70%,神经症状小鼠出现比率20%～30%。与对照组相比,试验组小鼠采食量和体重显著下降(P<0.05),临床症状分值显著升高(P<0.05)。组织病理检查发现,试验组小鼠心脏、肺脏组织均有不同程度出血、炎性细胞浸润;脑膜炎,脑室出血,充满炎性细胞。细菌回归试验结果表明,试验组死亡小鼠脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有细菌定植,且形态、染色和分子生物学特性与攻毒菌一致。以上结果证实,SS2 Y15293株能感染昆明小鼠并致其发病,感染动物发病规律性强,重复性好,临床症状典型,说明SS2 Y15293株感染昆明小鼠可作为SS2的候选人工感染模型。展开更多
文摘【目的】探讨猪链球菌2型超氧化物歧化酶A(SodA)、硫氧还蛋白A(TrxA)和TrxC基因在调控氧化应激和参与致病过程中的生物学功能。【方法】比较猪链球菌2型3个突变菌株ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC对抗应激能力和毒力的调控作用。通过应激存活试验,分别检测SodA、TrxA和TrxC基因对不同氧化应激处理(0.04%过氧化氢(H 2O 2)、10 mol/L百草枯(PQ))的抗氧化应激能力以及不同温度(4、43℃)的抗温度应激能力;将不同基因缺失株与猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)、小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,探究3个基因对细胞黏附和抗吞噬功能的影响;通过小鼠攻毒试验,测定各组织载菌量和血清抗氧化酶与肝功能指标,探明SodA、TrxA和TrxC基因在抗氧化应激以及致病过程中的作用。【结果】抗应激试验结果显示,在不同氧化应激和不同温度应激条件下,ΔSodA和ΔTrxC菌株存活能力均极显著低于野生菌株(P<0.01),ΔTrxA菌株在43℃高温刺激下存活能力极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞黏附试验结果显示,SodA和TrxA基因缺失导致细菌黏附能力降低55%~65%,极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞抗吞噬试验结果显示,ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株在吞噬细胞中的存活率极显著或显著低于野生菌株(P<0.01;P<0.05)。动物攻毒试验结果显示,与野生菌株相比,ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株毒力均极显著下降(P<0.01);ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株组小鼠死亡率分别为10%、50%和20%,组织载菌量分别为3.6 lg CFU/g~4.4 lg CFU/g、4.2 lg CFU/g~5.1 lg CFU/g和3.1 lg CFU/g~4.1 lg CFU/g;野生菌株组小鼠死亡率为90%,组织载菌量为6.4 lg CFU/g~7.8 lg CFU/g。小鼠感染ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株后血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于野生菌株(P<0.01),天门冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性极显著低于野生菌株(P<0.01)。【结论】猪链球菌2型SodA和TrxC基因通过中和菌体内超氧根离子和维持蛋白稳态对抗氧化应激引起的损伤,从而介导细菌毒力,而TrxA可能作为一个调控基因参与抗氧化应激反应。
文摘猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原体,猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)1954年首次在英国分离鉴定,在我国和其他养猪业发达的国家已多次流行,已成为危害我国养猪业和公共卫生安全的一个重要传染病。本研究用SS2-ZY05719株按10^(9)、10^(8)、10^(6)CFU腹腔注射途径人工感染健康的新西兰兔,3种剂量均可引起发病并死亡,新西兰兔临床症状明显,感染组平均体温升高1℃~2℃。同时分析了SS2在兔体各组织中的分布,结果显示,高剂量感染组出现明显的临床症状且快速死亡,感染剂量与发病程度有正相关性,对各试验组新西兰兔内脏组织进行检测发现,SS2主要集中在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异,本文研究了SS2感染新西兰兔后的临床症状和各组织载菌量,为猪链球菌的防治及致病机理研究提供参考。
文摘试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。
