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2型猪链球菌RevS基因敲除突变株生物学特征及致病性研究 被引量:1
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作者 孙雯 郑峰 《安徽大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第1期86-93,共8页
比较2型猪链球菌(S.suis 2)ΔRevS突变株和05ZY/H33野生株生物学特性及致病性的差异.首先,通过吸光值测定和革兰染色比较△RevS突变株和05ZY/H33野生株的生长速度和菌体形态.分别对Balb/c及ICR(CD1)小鼠腹腔注射109 CFU·mL^(-1)的0... 比较2型猪链球菌(S.suis 2)ΔRevS突变株和05ZY/H33野生株生物学特性及致病性的差异.首先,通过吸光值测定和革兰染色比较△RevS突变株和05ZY/H33野生株的生长速度和菌体形态.分别对Balb/c及ICR(CD1)小鼠腹腔注射109 CFU·mL^(-1)的05ZY/H33菌液,评估两种品系小鼠对S.suis 2的易感性.分别对Balb/c小鼠腹腔注射2.5×10~9,5.0×10~8,1.0×108,2.0×10~7,4.0×10~6 CFU·mL^(-1)的05ZY/H33菌液,采用Reed法计算半数致死量.对Balb/c小鼠腹腔注射5.0×108 CFU·mL^(-1)的ΔRevS突变株和05ZY/H33野生株菌液,观察野生株和突变株对小鼠的影响.对仔猪耳缘静脉注射10~9 CFU·mL^(-1)的05ZY/H33野生株和ΔRevS突变株菌液,观察野生株和突变株对仔猪的影响.体外生物学特征分析表明,与野生株相比,突变株的生长速率和形态染色并未发现显著变化;Balb/c小鼠对S.suis 2 05ZY/H33的敏感性高于ICR(CD1)小鼠,05ZY/H33对Balb/c小鼠的LD50为4.2×10~7 CFU·mL^(-1).Balb/c小鼠攻毒试验结果显示,ΔRevS对小鼠的致病性明显减弱.仔猪攻毒试验结果显示,野生株和突变株都引发仔猪全部死亡,但ΔRevS引发仔猪死亡时间较晚.△RevS突变株保持了菌株的基本生物学特征,但对小鼠和仔猪两种动物模型的致病作用差异较大. 展开更多
关键词 猪链球菌2(s.suis 2) 二元调控转导系统 生长曲线 动物模 半数致死量
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Taqman-MGB双重探针PCR技术检测含89K毒力岛猪链球菌2型 被引量:9
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作者 朱水荣 王志刚 +4 位作者 杨婷婷 金大智 张政 徐宝祥 姚萍萍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期434-438,共5页
目的建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法。方法利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针。优化荧光定量PCR反应条件和反... 目的建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法。方法利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针。优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,并对21株猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果该技术的种特异性16S rRNA及其89K毒力岛两基因检测灵敏度分别为6个拷贝/反应(或12cfu/mL)及27拷贝/反应(或58cfu/mL);重复性实验,变异系数为0.30%~2.11%;从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。用该方法对有关菌株进行考核,21株SS2菌检测结果均为SS种特异性16S rRNA基因阳性,其中15株含有89K毒力岛的SS2菌株的89K毒力岛基因检测均阳性;而非SS菌株的16S rRNA和89K毒力岛基因检测结果均为阴性。对49份呼吸道咽拭子、血液应急样本等进行实际考核,有2份血液样本16S rRNA基因阳性,其中1份血液样本89K毒力岛基因阳性。结论本次建立的Taq Man-MGB双重探针荧光定量PCR方法特异、快速、敏感,可特异性鉴定SS2中国毒力株(含有89K毒力岛),区分SS与非SS菌以及是否含有89K毒力岛基因,该方法的建立将有益于目前针对猪链球菌2型中国毒力株快速定量检测,以及疑似猪链球菌病患者病原的早期甄别、猪链暴发疫情调查及猪群暴发或带菌调查与评估等。 展开更多
关键词 猪链球菌2 双重荧光定量PCR MGB探针 16s RDNA基因 89K毒力岛
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猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 汪伟 何孔旺 +9 位作者 倪艳秀 周俊明 张雪寒 俞正玉 吕立新 茅爱华 温立斌 王小敏 李彬 郭容利 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期560-566,共7页
为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设... 为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。 展开更多
关键词 猪链球菌2 粘附相关因子 sTREPTOCOCCUs suis 2
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猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的鉴定和特性分析 被引量:2
4
作者 祝昊丹 倪艳秀 +4 位作者 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 何孔旺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期548-553,共6页
利用PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(STP)的编码基因,克隆到表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21中进行原核表达,获得重组蛋白质rSsSTP。重组蛋白质经His蛋白质层析柱纯化后,利用pNPP分析rSsSTP的酶活性。结果显示rSs... 利用PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(STP)的编码基因,克隆到表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21中进行原核表达,获得重组蛋白质rSsSTP。重组蛋白质经His蛋白质层析柱纯化后,利用pNPP分析rSsSTP的酶活性。结果显示rSsSTP为Mn2+依赖的磷酸酶,最适离子浓度为2 mmol/L,最佳反应温度为37℃,最佳pH值为8.0。 展开更多
关键词 猪链球菌2 丝氨酸 苏氨酸磷酸酶 鉴定 sTREPTOCOCCUs suis type 2
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猪链球菌2型1910RR蛋白多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 程尧 田永祥 +6 位作者 刘泽文 周丹娜 段正赢 杨克礼 郭锐 刘威 袁芳艳 《湖北农业科学》 2015年第24期6320-6323,共4页
通过原核表达系统表达了猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)1910RR蛋白,并制备了多克隆抗体。结果表明,猪链球菌2型1910RR重组蛋白以上清形式表达,Western-blot检测证实了1910RR蛋白具有良好的免疫学活性,1910RR多克隆抗体效价... 通过原核表达系统表达了猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)1910RR蛋白,并制备了多克隆抗体。结果表明,猪链球菌2型1910RR重组蛋白以上清形式表达,Western-blot检测证实了1910RR蛋白具有良好的免疫学活性,1910RR多克隆抗体效价为1∶4,为进一步研究1910RR蛋白功能奠定了良好基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2(streptococcus suis type2 ss2) 1910RR蛋白 原核表达 多克隆抗体
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2016-2018年辽宁部分地区猪场猪链球菌2型流行病学及大环内酯类耐药基因携带情况调查 被引量:2
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作者 刘耀川 高锋 +5 位作者 郭首龙 李旭 关淼 周维 杨洺扬 申贯男 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期1-4,10,共5页
为了解辽宁地区规模化生猪养殖场猪链球菌2型(SS2)的流行情况,2016-2018年对辽宁地区19个规模化生猪饲养场开展SS2流行病学调查,并对分离株进行大环内酯类药物耐药基因筛查。结果显示,经16S rRNA及SS2分型基因测序比对,共确定451株SS2... 为了解辽宁地区规模化生猪养殖场猪链球菌2型(SS2)的流行情况,2016-2018年对辽宁地区19个规模化生猪饲养场开展SS2流行病学调查,并对分离株进行大环内酯类药物耐药基因筛查。结果显示,经16S rRNA及SS2分型基因测序比对,共确定451株SS2分离株,SS2样品阳性率为20.0%,在猪链球菌(S.suis)分离株中占比为38.9%。经特异性引物PCR扩增及序列比对,筛查到ermA、ermB、mefA三种大环内酯类药物耐药基因,未筛查到ermC基因,3种耐药基因的菌株阳性率分别为22.8%、15.7%和22.6%。21株分离株同时携带2种耐药基因,未发现同时携带3种耐药基因的菌株。表明辽宁地区SS2阳性率较高,且多数携带大环内酯类耐药基因,为该地区SS2防控及治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 猪链球菌2 16s rRNA 大环内酯类药物 耐药基因
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猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群影响的差异 被引量:1
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作者 许格 王小敏 +1 位作者 王俣棋 徐鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期586-592,共7页
目的旨在探究猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群的影响差异。方法本研究随机将3周龄的雌性BALB/c小鼠分为3组,即空白对照组、猪链球菌2型强毒株SS2-1感染组和弱毒株HA0609感染组。采用Illumina Miseq测序技术,测定了小鼠结肠粪... 目的旨在探究猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群的影响差异。方法本研究随机将3周龄的雌性BALB/c小鼠分为3组,即空白对照组、猪链球菌2型强毒株SS2-1感染组和弱毒株HA0609感染组。采用Illumina Miseq测序技术,测定了小鼠结肠粪便样品中微生物16S rRNA V3-4区序列,并对其微生物群落结构和多样性进行了比较分析。结果各组样本测序覆盖率均达到99%以上,实验数据可靠。三组小鼠在菌群丰度和构成上均存在差异,SS2-1感染组小鼠的肠道菌群OTU数量与Alpha多样性均高于HA0609感染组和Mock组,HA0609感染组与Mock组相似度较为接近。相对于HA0609感染组和Mock组,SS2-1感染组菌群结构改变,益生菌所占比例减少,致病菌或潜在致病菌增多,存在肠道菌群失调现象。根据LEfSe分析结果,预测变形杆菌门下的Alphaproteobacteria可作为猪链球菌2型感染的潜在鉴别生物标志。结论通过本研究,不仅对猪链球菌2型强弱毒株感染后小鼠的肠道菌群的丰度、多样性和构成有了一定的认识,而且筛选到了猪链球菌2型感染BALB/c小鼠后的潜在标志物Alphaproteobacteria,为通过调整肠道微生物治疗猪链球菌2型和预防猪链球菌2型感染提供了依据。 展开更多
关键词 猪链球菌2 16s rRNA 肠道菌群 BALB/C小鼠
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中缅边境猪群感染猪链球菌2型的病原特性初探 被引量:1
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作者 郑玉芳 鲁琼芬 +2 位作者 李晓红 张容萍 陈培富 《动物医学进展》 北大核心 2018年第6期29-32,共4页
2016年10月中旬,在中缅边境多个猪场暴发以呼吸困难、关节肿胀、部分仔猪拉黄水样粪便,后期伴有神经症状、败血症而死为特征的传染病。为查明病因,对采集自病死猪只的全血、肺组织、脓包及脓汁于血琼脂上划线培养,对所获溶血性菌落采用... 2016年10月中旬,在中缅边境多个猪场暴发以呼吸困难、关节肿胀、部分仔猪拉黄水样粪便,后期伴有神经症状、败血症而死为特征的传染病。为查明病因,对采集自病死猪只的全血、肺组织、脓包及脓汁于血琼脂上划线培养,对所获溶血性菌落采用革兰染色、生化试验、药敏试验和基于慢性病例血清的凝集试验做初步鉴定;随后用细菌16S rRNA基因通用引物扩增该菌株DNA片段,并对PCR扩增产物进行TA克隆及测序分析。结果发现,该菌株为革兰阳性球菌;葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、水杨苷、棉实糖利用试验呈阳性,山梨醇、七叶苷、马尿酸盐、甘露醇、65g/L NaCl、肌醇和触酶试验均呈阴性;对头孢噻肟、头孢哌酮、恩诺沙星和复方新诺明具有较高敏感性,对青霉素、阿莫西林、庆大霉素、环丙沙星等具有中度敏感性,但对四环素、多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考、阿米卡星、林可霉素等药物具有较强耐药性;凝集试验呈阳性且血清抗体效价为1∶256;PCR扩增出约1 500bp的单一条带,其核酸序列与猪链球菌(Streptococcus suis)第1核酸序列型(ST1)同源性最高(达99%),据此判定为猪链球菌2型。鉴于被调查猪群曾接种猪链球菌2型灭活疫苗,试验结果表明,当地猪群发生多重耐药性猪链球菌2型的跨境传播与感染,提示应加强对该菌抗原性、致病性及耐药性改变的监测及严格控制猪群的跨境流动。 展开更多
关键词 猪链球菌2 16s RRNA基因 血清凝集试验 多重耐药性
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S.suis 2中国强毒株烯醇化酶Enolase基因的分子克隆及蛋白生物功能研究 被引量:1
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作者 孙雯 郑峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期222-230,共9页
对中国强毒株S.suis 2烯醇化酶Enolase进行克隆表达、定位分析、酶活性检测及免疫相关功能研究,探讨Enolase在S.suis 2致病中的作用。基于S.suis 2 05ZYH33全基因组测序,对Enolase编码基因进行生物信息学分析。构建pET32a∷eno重组表达... 对中国强毒株S.suis 2烯醇化酶Enolase进行克隆表达、定位分析、酶活性检测及免疫相关功能研究,探讨Enolase在S.suis 2致病中的作用。基于S.suis 2 05ZYH33全基因组测序,对Enolase编码基因进行生物信息学分析。构建pET32a∷eno重组表达质粒,转化入E.coli BL21中诱导表达,利用His-Beads和FPLC纯化后获得Enolase重组蛋白。对纯化后的Enolase进行酶活性检测,鉴定其糖代谢功能。然后利用FCM分析Enolase在S.suis 2的定位情况,最后通过外周血单核细胞MTT实验检测Enolase对PBMCs活性的影响。同源性分析发现S.suis 2 eno与多种细菌中eno高度同源。SignalP和TMHMM分析发现Enolase没有信号肽也没有跨膜区。eno分子克隆并测序显示长度为1 308 bp。重组质粒经诱导表达并纯化后,获得75 kD的Enolase蛋白。纯化的重组Enolase有将2-PEG转化成PEP的能力。FCM分析表明Enolase也存在于细菌表面。MTT测试表明Enolase能够引发PBMCs活性的下降。Enolase不仅在S.suis 2体内参与基础代谢活动,同时也存在于S.suis 2表面,可能通过破坏单核细胞参与感染过程。 展开更多
关键词 猪链球菌2(s.suis 2) 烯醇化酶 酶活性 流式细胞术 外周血单核细胞
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新疆阿克苏地区某规模化猪场猪链球菌分离鉴定及耐药性分析 被引量:4
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作者 胡亚辉 张家浩 +4 位作者 李虎 刘祥杰 邢潇月 杨睿智 李莲瑞 《现代畜牧兽医》 2023年第2期9-13,共5页
研究旨在确定新疆阿克苏地区某猪场仔猪发病死亡具体原因并分析其具体耐药情况。试验对该猪场病死仔猪脏器进行无菌采样及细菌分离培养,并对分离株进行形态学鉴定、生化鉴定及分析其部分生物学特性。结果显示:从病死仔猪心脏、肝脏、脾... 研究旨在确定新疆阿克苏地区某猪场仔猪发病死亡具体原因并分析其具体耐药情况。试验对该猪场病死仔猪脏器进行无菌采样及细菌分离培养,并对分离株进行形态学鉴定、生化鉴定及分析其部分生物学特性。结果显示:从病死仔猪心脏、肝脏、脾脏中分离出的1株细菌,在血平板上呈圆形、隆起、半透明、光滑且湿润、边缘比较整齐的菌落,且表现出明显的β溶血环,初步鉴定为链球菌。生化鉴定及测序结果表明,分离株为2型猪链球菌。药敏试验结果表明,分离菌株对头孢哌酮、头孢曲松钠、多西环素、氧氟沙星及环丙沙星表现为敏感,对青霉素、阿米卡星、新霉素表现为中介,对阿莫西林、复方新诺明、氨苄西林、磺胺甲硝唑、四环素、米诺环素和庆大霉素等药物表现为不同程度的耐药。研究表明,新疆阿克苏地区某猪场仔猪死亡原因为2型猪链球菌感染,且该菌株对头孢哌酮、头孢曲松钠等药物敏感,建议临床可将其应用于2型猪链球菌的防治。 展开更多
关键词 2猪链球菌 分离与鉴定 16s rRNA 耐药性分析
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