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猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化
被引量：
1
1
作者
王小敏
何孔旺
+7 位作者
张文文
王东田
周忠涛
张雪寒
周俊明
汪伟
倪艳秀
温立斌
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期38-43,共6页
为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到...
为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上,构建表达载体pcold-ORF1,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白在BL21中高效表达,以包涵体形式表达为主,分子质量约为39 kDa。蛋白表达量随诱导时间增加而有所增加,在15℃时表达量最高,而IPTG浓度对蛋白的表达量没有显著影响。Western Blotting结果表明,重组蛋白与猪TTV2阳性血清特异性反应,具有很好的免疫原性。成功获得TTV2-ORF1基因,构建了原核表达载体并获得高效表达,为TTV的ELISA检测方法的建立提供抗原。且重组蛋白在15℃条件下,加入0.2 mmol/L浓度的IPTG,诱导24 h,表达条件最佳。
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关键词
猪输血传播病毒2型
基因克隆
原核表达
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职称材料
题名
猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化
被引量：
1
1
作者
王小敏
何孔旺
张文文
王东田
周忠涛
张雪寒
周俊明
汪伟
倪艳秀
温立斌
机构
江苏省农业科学院兽医研究所
南京农业大学动物医学院
山东省蓬莱市村里集镇畜牧兽医工作站
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期38-43,共6页
基金
国家基金面上项目(31272574)
江苏省自主创新专项(CX(11)2060)
文摘
为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上,构建表达载体pcold-ORF1,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白在BL21中高效表达,以包涵体形式表达为主,分子质量约为39 kDa。蛋白表达量随诱导时间增加而有所增加,在15℃时表达量最高,而IPTG浓度对蛋白的表达量没有显著影响。Western Blotting结果表明,重组蛋白与猪TTV2阳性血清特异性反应,具有很好的免疫原性。成功获得TTV2-ORF1基因,构建了原核表达载体并获得高效表达,为TTV的ELISA检测方法的建立提供抗原。且重组蛋白在15℃条件下,加入0.2 mmol/L浓度的IPTG,诱导24 h,表达条件最佳。
关键词
猪输血传播病毒2型
基因克隆
原核表达
Keywords
Torque teno virus type
2
（TTV
2
）
Gene cloning
Prokaryotic expression
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化
王小敏
何孔旺
张文文
王东田
周忠涛
张雪寒
周俊明
汪伟
倪艳秀
温立斌
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2013
1
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