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骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ转基因猪胚胎成纤维细胞克隆的构建与鉴定: 1; 作者袁婷刘帅 +4 位作者李小平唐成程韩晓蕾逄大欣欧阳红生《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期192-196,共5页; 目的:构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有FSⅠ-Ⅰ基因的细胞克隆,为研究FSⅠ-Ⅰ对猪骨骼肌的影响奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从猪骨骼肌中扩增FS A(包含FS N端和结构域FSⅠ)和结构域FSⅠ;... 展开更多; 关键词卵泡抑素猪胚胎成纤维细胞真核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2转基因猪胚胎成纤维细胞的构建与鉴定: 2; 作者黄海城刘欢安靓《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第2期1-6,共6页; 目的构建上皮组织特异性表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1(N-LMP1)和人补体受体2(CR2)真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有N-LMP1和CR2基因的细胞克隆,为构建与EBV感染相关的猪鼻咽癌模型奠定基础。方法通过直接合成ED-L2启动子和N... 展开更多; 关键词 N-LMP1 CR2 猪胚胎成纤维细胞鼻咽癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

三种转染试剂对PEF细胞与BHK细胞转染效率的比较被引量：10: 3; 作者张文智李亚 +1 位作者王鹏雁陈创夫《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期753-758,共6页; 【目的】比较三种转染试剂对原代细胞和传代细胞的转染效率,选择合适的转染试剂。【方法】以EGFP为报告基因,分别用脂质体、磷酸钙、罗氏试剂转染PEF细胞和BHK细胞。通过改变转染试剂和质粒DNA的剂量,利用流式细胞仪分析转染效率,从而... 展开更多; 关键词转染效率猪胚胎成纤维细胞仓鼠肾细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用: 4; 作者周杨朱建国 +6 位作者唐小春闫森宋娜张明军李莉欧阳红生逄大欣《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期196-201,F0002,共7页; 目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据。方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧... 展开更多; 关键词 Cre-pCEP4 CRE/LOXP重组系统猪胚胎成纤维细胞 MCF-7细胞系; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ转基因猪胚胎成纤维细胞克隆的构建与鉴定: 1; 作者袁婷刘帅李小平唐成程韩晓蕾逄大欣欧阳红生; 机构吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期192-196,共5页; 基金国家自然科学基金资助课题(30871841); 文摘目的:构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有FSⅠ-Ⅰ基因的细胞克隆,为研究FSⅠ-Ⅰ对猪骨骼肌的影响奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从猪骨骼肌中扩增FS A(包含FS N端和结构域FSⅠ)和结构域FSⅠ;利用PCR方法分别从鼠基因组、人血液基因组和pcDNA3.1(+)载体上扩增出MCK增强子、ACTA 1启动子和BGHpolyA。将上述4个片段分别连接到真核表达载体pGKneotpAlox2上,构建骨骼肌特异性表达FSⅠ-Ⅰ(包含FS N端和2个连续FSⅠ结构域)的载体pGK-MCK-ACTA 1-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA;用FuGENE○RHD转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果:成功构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的表达载体pGK-MCK-ACTA1 promoter-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论:获得了骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过核移植方法获得表达FSⅠ-Ⅰ转基因猪提供了供体细胞。; 关键词卵泡抑素猪胚胎成纤维细胞真核表达; Keywords follistatin porcine embryonic fibroblasts eukaryotic expression; 分类号 S852 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2转基因猪胚胎成纤维细胞的构建与鉴定: 2; 作者黄海城刘欢安靓; 机构南方医科大学肿瘤研究所深圳华大基因研究院; 出处《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第2期1-6,共6页; 基金国家高技术研究发展计划(863计划)(K1010524); 文摘目的构建上皮组织特异性表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1(N-LMP1)和人补体受体2(CR2)真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有N-LMP1和CR2基因的细胞克隆,为构建与EBV感染相关的猪鼻咽癌模型奠定基础。方法通过直接合成ED-L2启动子和N-LMP1,从人B淋巴细胞中的RNA经RT-PCR扩增出CR2,将上述3个片段逐个连接到真核表达载体pN1上,构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的载体pN1-EDL2-N-LMP1-CR2;用脂质体转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果成功构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的真核表达载体pN1-ED-L2-N-LMP1-CR2,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论获得了上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过细胞核移植方法获得表达N-LMP1和CR2转基因猪提供了供体细胞。; 关键词 N-LMP1 CR2 猪胚胎成纤维细胞鼻咽癌; Keywords N-LMP1 CR2 Porcine embryonic fibroblasts Nasopharyngeal carcinoma; 分类号 R33 [医药卫生—人体生理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名三种转染试剂对PEF细胞与BHK细胞转染效率的比较被引量：10: 3; 作者张文智李亚王鹏雁陈创夫; 机构石河子大学动物科技学院; 出处《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期753-758,共6页; 基金转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08006-003B); 文摘【目的】比较三种转染试剂对原代细胞和传代细胞的转染效率,选择合适的转染试剂。【方法】以EGFP为报告基因,分别用脂质体、磷酸钙、罗氏试剂转染PEF细胞和BHK细胞。通过改变转染试剂和质粒DNA的剂量,利用流式细胞仪分析转染效率,从而确定最佳的转染试剂。【结果】对于PEF细胞,脂质体和磷酸钙转染效果不理想,细胞死亡率高,绿色荧光表达量少。罗氏转染试剂相对较好,细胞死亡率低,并且保持原有细胞形态。对于传代细胞BHK细胞而言,各转染试剂均可达到理想转染效果。【结论】不同的细胞对转染试剂的选择也不同,传代细胞BHK用脂质体即可达到理想的效果。利用罗氏试剂可以提高转染效率,但不明显。而对于原代细胞PEF,脂质体与磷酸钙试剂的转染效率很低。相比较而言,罗氏转染试剂效果更好些,细胞毒性小,转染率在10%～12%。; 关键词转染效率猪胚胎成纤维细胞仓鼠肾细胞; Keywords transfection efficiency PEF ceils BHK ceils; 分类号 S852.16 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用: 4; 作者周杨朱建国唐小春闫森宋娜张明军李莉欧阳红生逄大欣; 机构吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期196-201,F0002,共7页; 基金国家自然科学基金资助课题(30771582 130871841); 文摘目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据。方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,将2个载体瞬时共转染PEF;经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP,在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达。而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达。结论:重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶,并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点,删除两同向loxP间的DNA片段。; 关键词 Cre-pCEP4 CRE/LOXP重组系统猪胚胎成纤维细胞 MCF-7细胞系; Keywords Cre-pCEP4； Cre／loxP syste m； porcine e mbryonic fibroblasts； MCF-7 cell line; 分类号 Q291 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ转基因猪胚胎成纤维细胞克隆的构建与鉴定	袁婷刘帅李小平唐成程韩晓蕾逄大欣欧阳红生	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2转基因猪胚胎成纤维细胞的构建与鉴定	黄海城刘欢安靓	《中国比较医学杂志》 CAS	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	三种转染试剂对PEF细胞与BHK细胞转染效率的比较	张文智李亚王鹏雁陈创夫	《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心	2013	10	在线阅读下载PDF 职称材料
4	表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用	周杨朱建国唐小春闫森宋娜张明军李莉欧阳红生逄大欣	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料