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伏马毒素B1对猪肾上皮细胞增殖的影响被引量：2: 1; 作者袁巧玲范颖 +2 位作者宁玲忠苏建明雷红宇《饲料博览》 2019年第7期1-3,9,共4页; 研究旨在探究伏马毒素B1(FB1)对猪肾上皮细胞增殖的影响,通过MTT检测FB1对PK15细胞活力和qPCR检测周期相关基因的mRNA表达水平.结果表明,FB1显著减少细胞活力,降低细胞核增殖抗原PCNA和周期蛋白Cyclin B和Cyclin D的mRNA表达水平,升高P2... 展开更多; 关键词伏马毒素B1 猪肾上皮细胞细胞活力增殖周期; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪肾上皮细胞SLA-1基因的克隆及分子结构特征分析: 2; 作者王宝宝金行 +2 位作者鲜钰涵冯宏盛高凤山《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第5期1671-1678,共8页; 【目的】利用猪肾上皮细胞15(PK15)建立系统的猪白细胞抗原1(SLA-1)抗原表位筛选系统。【方法】提取PK15细胞总RNA,设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增SLA-1基因(SLA-1*PK15),将该基因克隆到pMD18-T载体上,并进行双酶切及测序鉴定;利用D... 展开更多; 关键词猪肾上皮细胞15(PK15) 猪白细胞抗原1(SLA-1) 克隆生物信息学分析同源模建; 在线阅读下载PDF 职称材料

他莫昔芬对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响被引量：1: 3; 作者邢嘉友樊文杰 +5 位作者王昱旻鲁秀香宋月褚贝贝王江王梦迪《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4503-4512,共10页; 【目的】研究他莫昔芬(Tamoxifen)在PK15细胞模型上对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染的抗病毒作用。【方法】以PK15细胞为模型,采用CCK-8细胞计数法检测他莫昔芬对细胞活力的影响;利用ANNEXIN V-FITC/PI凋亡试剂盒检测他... 展开更多; 关键词他莫昔芬伪狂犬病病毒(PRV) 猪肾上皮细胞抗病毒作用; 在线阅读下载PDF 职称材料

凋亡相关斑点样蛋白敲除PK-15细胞系的建立及对PRV感染的影响被引量：3: 4; 作者翟云云李佳佳 +4 位作者张爽任子昱金前跃杜永坤万博《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期478-487,共10页; 本试验旨在研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞的影响。以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞(PK-15)ASC基因稳定敲除细胞系,通过T7核酸酶检测靶基因的敲除效率;CCK-8试剂盒... 展开更多; 关键词伪狂犬病病毒凋亡相关斑点样蛋白先天性免疫猪肾上皮细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

血根碱对雄性小鼠的生殖毒性研究被引量：1: 5; 作者林海张明军 +1 位作者杨佳亮郭静《中兽医医药杂志》 2015年第6期31-35,共5页; 研究血根碱对雄性小鼠的生殖毒性。采用MTS法检测血根碱对猪肾上皮细胞(PK-15)和猪睾九细胞(ST)的增殖抑制作用。将120只3周龄普通级ICR雄性小鼠随机分为5组:空白对照组(蒸馏水)、溶媒对照组(蒸馏水:丙二醇为2:1)、低剂量组(5mg/kg)、... 展开更多; 关键词血根碱猪肾上皮细胞猪睾丸细胞 ICR小鼠细胞增殖抑制作用生殖毒性; 在线阅读下载PDF 职称材料

Toll样受体7基因敲除对水疱性口炎病毒增殖的影响: 6; 作者孟洁洁宋月 +6 位作者樊文杰杨乐邢嘉友王江褚贝贝杨国宇王梦迪《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第6期2011-2021,共11页; 【目的】探究敲除Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)基因对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)复制的影响。【方法】利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TLR7基因敲除的稳定猪肾上皮细胞(porcine renal epi... 展开更多; 关键词 CRISPR/Cas9 TLR7基因猪肾上皮细胞(PK15) 水疱性口炎病毒(VSV); 在线阅读下载PDF 职称材料

题名伏马毒素B1对猪肾上皮细胞增殖的影响被引量：2: 1; 作者袁巧玲范颖宁玲忠苏建明雷红宇; 机构湖南农业大学; 出处《饲料博览》 2019年第7期1-3,9,共4页; 基金湖南省畜禽安全生产2011协同创新中心国家自然科学基金项目(31571432); 文摘研究旨在探究伏马毒素B1(FB1)对猪肾上皮细胞增殖的影响,通过MTT检测FB1对PK15细胞活力和qPCR检测周期相关基因的mRNA表达水平.结果表明,FB1显著减少细胞活力,降低细胞核增殖抗原PCNA和周期蛋白Cyclin B和Cyclin D的mRNA表达水平,升高P21和P27的mRNA表达水平.说明FB1可通过调控细胞周期相关基因的表达抑制猪肾上皮细胞增殖.; 关键词伏马毒素B1 猪肾上皮细胞细胞活力增殖周期; Keywords fumonisin B1 PK15 cell viability proliferation cycle; 分类号 S852.2 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪肾上皮细胞SLA-1基因的克隆及分子结构特征分析: 2; 作者王宝宝金行鲜钰涵冯宏盛高凤山; 机构大连大学生命科学与技术学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第5期1671-1678,共8页; 基金国家自然科学基金项目(31672525) 大连大学创新团队项目(XLJ202005)。; 文摘【目的】利用猪肾上皮细胞15(PK15)建立系统的猪白细胞抗原1(SLA-1)抗原表位筛选系统。【方法】提取PK15细胞总RNA,设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增SLA-1基因(SLA-1*PK15),将该基因克隆到pMD18-T载体上,并进行双酶切及测序鉴定;利用DNAMAN 5.2.2、Mega 5.0、Multalin及同源建模进行系统进化树、二级结构、三级结构分析。【结果】RT-PCR扩增获得约1400 bp条带,质粒提取和酶切鉴定结果表明SLA-1成功插入pMD18-T载体;测序结果证实该基因共1419 bp,其中2-1087 bp为编码区,共编码361个氨基酸,信号肽为21个氨基酸,符合SLA-1基因特征。进化树分析结果显示,SLA-1*PK15与SLA-1*wxd(中国梅山猪)和SLA-1*0401(中国巴马小型猪)进化关系最近,而与SLA-1*lr02(丹麦长白猪)及SLA-1*0509(中国西藏野猪)进化关系较远。胞外区氨基酸比较分析表明,PK15细胞SLA-1基因与其他SLA-1基因胞外区主要变异位点存在于α1区和α2区,α3区的变异位点较少,无特征性氨基酸变异位点。PK15细胞SLA-1蛋白的二级结构主要以α-螺旋和β-折叠为主。同源建模结果显示,SLA-1蛋白具有SLA classⅠ典型的三级结构,α1区和α2区构成抗原多肽结合区。【结论】SLA-1基因稳定存在于PK15细胞,PK15细胞具有作为SLA-1抗原表位筛选系统的潜在应用价值。; 关键词猪肾上皮细胞15(PK15) 猪白细胞抗原1(SLA-1) 克隆生物信息学分析同源模建; Keywords porcine renal epithelial cells 15(PK15) swine leukocyte antigen(SLA-1) cloning bioinformatic analysis homology modeling; 分类号 S852.4 [农业科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名他莫昔芬对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响被引量：1: 3; 作者邢嘉友樊文杰王昱旻鲁秀香宋月褚贝贝王江王梦迪; 机构河南农业大学河南牧业经济学院食品与生物工程学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4503-4512,共10页; 基金国家自然科学基金项目(32072858)。; 文摘【目的】研究他莫昔芬(Tamoxifen)在PK15细胞模型上对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染的抗病毒作用。【方法】以PK15细胞为模型,采用CCK-8细胞计数法检测他莫昔芬对细胞活力的影响;利用ANNEXIN V-FITC/PI凋亡试剂盒检测他莫昔芬对细胞周期和凋亡的影响;利用CytoFLEX流式细胞仪和荧光显微镜检测他莫昔芬处理细胞感染PRV-GFP后病毒增殖的差异;利用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测他莫昔芬处理细胞感染PRV-QXX后PRV gB基因mRNA和蛋白表达水平的变化;利用病毒滴度测定法检测他莫昔芬处理细胞感染PRV-QXX后对病毒的抑制情况。【结果】他莫昔芬用药浓度在6μmol/L时对细胞活力无影响;在6μmol/L以下时,与空白组相比,他莫昔芬处理组对细胞周期与凋亡没有显著影响(P>0.05)。在同一时间点,他莫昔芬处理组PRV-GFP在PK15细胞中的增殖速度极显著低于对照组(P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明,他莫昔芬处理后极显著抑制了PRV gB基因mRNA在PK15细胞中的表达(P<0.01);Western blotting结果显示,不同给药浓度同一时间点,他莫昔芬都显著或极显著抑制了PRV gB蛋白的表达(P<0.05;P<0.01);病毒滴度测定结果表明,在PK15细胞中,同一时间点他莫昔芬处理组的PRV-QXX子代病毒的复制速度显著或极显著低于对照组(P<0.05;P<0.01)。【结论】他莫昔芬能显著抑制PRV在PK15细胞中的增殖。; 关键词他莫昔芬伪狂犬病病毒(PRV) 猪肾上皮细胞抗病毒作用; Keywords Tamoxifen Pseudorabies virus(PRV) PK15 cell antiviral effect; 分类号 S859.7 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名凋亡相关斑点样蛋白敲除PK-15细胞系的建立及对PRV感染的影响被引量：3: 4; 作者翟云云李佳佳张爽任子昱金前跃杜永坤万博; 机构河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心河南省动物免疫学重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期478-487,共10页; 基金河南省重点研发与推广专项(科技攻关)(192102110191,202102110100)。; 文摘本试验旨在研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞的影响。以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞(PK-15)ASC基因稳定敲除细胞系,通过T7核酸酶检测靶基因的敲除效率;CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ASC基因对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测PK-15以及PK15-ASC-/-细胞感染PRV-GFP病毒的增殖差异;RT-PCR检测PRV-gB及IFN-β、ISG15、IL^-1βmRNA表达水平;Western blot检测PRV gE蛋白的表达;TCID50检测子代病毒感染力的滴定。结果表明:两对特异性sgRNA均能对ASC进行基因编辑,但经过T7核酸酶酶切检测进行基因编辑效率分析,结果表明,sgRNA2的基因编辑效率最高;CCK-8试剂盒检测细胞活力结果表明,PK-15以及PK15-ASC-/-细胞活力无影响;流式细胞仪检测结果表明PRV-GFP在PK15-ASC-/-细胞中的增殖显著低于PK-15细胞;定量RT-PCR结果表明,PRV-gB基因在PK15-ASC-/-细胞中的转录水平显著低于PK-15细胞,而IFN-β、ISG15基因在PK15-ASC-/-细胞中的转录水平显著高于PK-15细胞;Western blot结果表明,PRV的gE蛋白在PK15-ASC-/-细胞中的表达显著低于PK-15细胞;滴度测定结果表明敲除ASC基因能够显著抑制子代病毒的增殖能力。本研究成功构建了PK15-ASC-/-细胞系,并通过PRV感染试验证实敲除ASC基因可以抑制PRV在PK-15细胞中的增殖。; 关键词伪狂犬病病毒凋亡相关斑点样蛋白先天性免疫猪肾上皮细胞; Keywords pseudorabies virus apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD innate immunity porcine kidney epithelial cells; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名血根碱对雄性小鼠的生殖毒性研究被引量：1: 5; 作者林海张明军杨佳亮郭静; 机构湖南农业大学湖南省宁乡县动物疫病预防控制中心; 出处《中兽医医药杂志》 2015年第6期31-35,共5页; 基金湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室科学基金项目(12KFXM02); 文摘研究血根碱对雄性小鼠的生殖毒性。采用MTS法检测血根碱对猪肾上皮细胞(PK-15)和猪睾九细胞(ST)的增殖抑制作用。将120只3周龄普通级ICR雄性小鼠随机分为5组:空白对照组(蒸馏水)、溶媒对照组(蒸馏水:丙二醇为2:1)、低剂量组(5mg/kg)、中剂量组(10mg/kg)和高剂量组(20mg/kg),血根碱用量为0.1 mL/10g,连续灌胃37d,并于开始灌胃后的第24、31和37天分别采集样品并检测。结果表明,微量的血根碱对猪肾上皮细胞(PK-15)和猪睾九细胞(ST)可产生显著的增殖抑制作用(对ST的MIC为0.25μmol/L,对PK-15的MIC为0.5μmol/L);在体试验结果显示,试验组小鼠各项指标与对照组无显著差异,说明血根碱对雄性小鼠无显著生殖毒性。; 关键词血根碱猪肾上皮细胞猪睾丸细胞 ICR小鼠细胞增殖抑制作用生殖毒性; Keywords sanguinarine porcine kidney epithelial cells porcine testicular cells ICR mice inhibition of cell proliferation reproductive toxicity; 分类号 S859.82 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Toll样受体7基因敲除对水疱性口炎病毒增殖的影响: 6; 作者孟洁洁宋月樊文杰杨乐邢嘉友王江褚贝贝杨国宇王梦迪; 机构河南农业大学河南牧业经济学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第6期2011-2021,共11页; 基金国家自然科学基金面上项目(32072858)。; 文摘【目的】探究敲除Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)基因对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)复制的影响。【方法】利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TLR7基因敲除的稳定猪肾上皮细胞(porcine renal epithelial cells,PK15)系。通过构建pTLR7-sgRNA重组质粒并转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选后得到PK15-TLR7^(-/-)多克隆细胞,并在Western blotting鉴定后通过有限稀释法获得PK15-TLR7^(-/-)单克隆稳定细胞系。为验证敲除TLR7基因稳定细胞系是否构建成功,分别利用光学显微镜和细胞毒性检测(cell counting kit 8,CCK-8)观察并检测PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞的形态与活力;利用荧光倒置显微镜和流式细胞术观察VSV-GFP感染PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞后病毒增殖情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测VSV-GFP感染PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞后GFP蛋白和VSV-N基因mRNA水平的表达情况;利用病毒滴度检测VSV-GFP感染PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞后子代病毒产生情况。【结果】采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建的3种sgRNA均对TLR7进行了有效的编辑,其中sgRNA2的基因编辑效率最高,但敲除TLR7基因并不影响PK15细胞的形态及活力;当感染VSV-GFP后,通过荧光显微镜观察发现,荧光强度随着时间逐次增加,且PK15-TLR7^(-/-)细胞的GFP荧光强度强于PK15细胞。流式细胞术检测结果显示,相同时间点的PK15-TLR7^(-/-)细胞感染VSV-GFP的比例显著或极显著高于PK15细胞(P<0.05;P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明,感染4~36 h VSV-N基因mRNA相对表达量随着时间逐渐增加,且PK15细胞中VSV-N基因的mRNA相对表达量显著或极显著低于PK15-TLR7^(-/-)细胞(P<0.05;P<0.01);Western blotting结果表明,PK15与PK15-TLR7^(-/-)细胞中的VSV-GFP GFP蛋白均从6 h开始表达,表达量随时间逐渐增多,且在PK15-TLR7^(-/-)细胞中VSV-GFP GFP蛋白含量比PK15细胞更高;感染VSV-GFP 6 h后子代病毒开始释放,此时PK15细胞中VSV-GFP子代病毒滴度低于PK15-TLR7^(-/-)细胞(P>0.05),但PK15细胞中VSV-GFP子代病毒滴度随着感染时间的增加显著或极显著低于PK15-TLR7^(-/-)细胞(P<0.05;P<0.01)。【结论】TLR7基因的敲除可以促进VSV在PK15细胞中的复制,初步验证了TLR7在天然免疫中的作用,为VSV等RNA病毒性疾病的防控提供新思路。; 关键词 CRISPR/Cas9 TLR7基因猪肾上皮细胞(PK15) 水疱性口炎病毒(VSV); Keywords CRISPR/Cas9 TLR7 gene porcine renal epithelial cells(PK15) Vesicular stomatitis virus(VSV); 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	伏马毒素B1对猪肾上皮细胞增殖的影响	袁巧玲范颖宁玲忠苏建明雷红宇	《饲料博览》	2019	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪肾上皮细胞SLA-1基因的克隆及分子结构特征分析	王宝宝金行鲜钰涵冯宏盛高凤山	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022		在线阅读下载PDF 职称材料
3	他莫昔芬对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响	邢嘉友樊文杰王昱旻鲁秀香宋月褚贝贝王江王梦迪	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	凋亡相关斑点样蛋白敲除PK-15细胞系的建立及对PRV感染的影响	翟云云李佳佳张爽任子昱金前跃杜永坤万博	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2021	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	血根碱对雄性小鼠的生殖毒性研究	林海张明军杨佳亮郭静	《中兽医医药杂志》	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	Toll样受体7基因敲除对水疱性口炎病毒增殖的影响	孟洁洁宋月樊文杰杨乐邢嘉友王江褚贝贝杨国宇王梦迪	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料