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红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型诱导猪肺泡巨噬细胞炎症的作用机制
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作者 韦兴克 徐一丹 +6 位作者 魏岩 潘诗琴 欧德渊 曾诚 彭羽 宋旭琴 杨剑 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期900-910,共11页
[目的]阐明红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型(PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)炎症的作用机制,为将红车轴草异黄酮开发成兽用抗炎药品提供理论依据。[方法]以PCV2感染诱导建立3D4/2细胞炎症模型,再以不同浓度(0.25、0.50和1.00 mg/mL)的... [目的]阐明红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型(PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)炎症的作用机制,为将红车轴草异黄酮开发成兽用抗炎药品提供理论依据。[方法]以PCV2感染诱导建立3D4/2细胞炎症模型,再以不同浓度(0.25、0.50和1.00 mg/mL)的红车轴草异黄酮溶液及地塞米松(DXMS)分别处理3D4/2细胞,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)等细胞炎症因子的分泌及其基因表达水平,同时采用Western blotting检测NF-κB信号通路和MAPK信号通路相关蛋白(p65、IκB-α和p38)的表达与磷酸化情况。[结果]经PCV2诱导后,3D4/2细胞的生长明显受到抑制,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的含量极显著升高(P<0.01,下同),对应的基因相对表达量也极显著升高;IκB-α蛋白降解水平、p38蛋白表达及p65蛋白的磷酸化与表达水平均极显著提升。以0.25、0.50和1.00 mg/mL红车轴草异黄酮处理PCV2诱导3D4/2细胞,其生长状况与空白对照组相比无明显差异,与PCV2诱导3D4/2细胞相比,促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量及其基因相对表达量呈明显下降趋势,而抗炎因子IL-10含量及其基因相对表达量呈明显上升趋势,且均呈剂量依赖性,以1.00 mg/mL红车轴草异黄酮的效果最佳;此外,不同浓度的红车轴草异黄酮均能极显著抑制p65蛋白磷酸化及IκB-α蛋白降解,同时极显著降低p65和p38蛋白的表达,且其变化趋势基本上呈剂量依赖性,即通过干扰NF-κB信号通路和MAPK信号通路的激活而发挥抗炎作用。[结论]红车轴草异黄酮对PCV2诱导3D4/2细胞具有抗炎作用,其作用机制是通过抑制炎症因子释放,促进抗炎细胞因子IL-10分泌,以及控制NF-κB信号通路和MAPK信号通路的激活来实现。 展开更多
关键词 红车轴草异黄酮 肺泡细胞(3d4/2) 圆环病毒2型(PCV2) 炎症因子 信号通路
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稳定表达猪瘟病毒NS3-NS4A和NS3^(pro)-NS4A蛋白巨噬细胞系的构建及蛋白质组学分析
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作者 郑晓茹 王一丹 +6 位作者 张丽红 杨莹莹 赵欣如 李敏 黄娟 张乔亚 曹志 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5839-5851,共13页
本研究旨在通过构建稳定表达的猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)NS3-NS4A和NS3^(pro)-NS4A蛋白巨噬细胞系,以期更好地探索宿主天然免疫与CSFV的相互作用关系。利用琼脂糖凝胶电泳、连接与转化和提取质粒等方法对重组表达载... 本研究旨在通过构建稳定表达的猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)NS3-NS4A和NS3^(pro)-NS4A蛋白巨噬细胞系,以期更好地探索宿主天然免疫与CSFV的相互作用关系。利用琼脂糖凝胶电泳、连接与转化和提取质粒等方法对重组表达载体进行构建,将构建好的pCMV-CBH-GFP-2A-Puro-CSFV NS3^(pro)-NS4A、pCMV-CBH-GFP-2A-Puro-CSFV NS3-NS4A和pCMV-CBH-GFP-2A-Puro重组表达载体分别感染HEK-293T细胞包装出慢病毒。然后利用包装成功的慢病毒感染猪肺泡巨噬细胞(3D4/21),对感染细胞进行单克隆筛选得到稳定转染细胞系,最后用Western blot方法验证稳定细胞系蛋白表达。对其进行蛋白组学分析,筛选出MAPK、PI3K通路的相互作用蛋白,并进行功能分析,利用Western blot检测CDK4、CDC37、CASP3、IKBKG、NFκB1蛋白表达量。结果表明,经MegAlign分析构建的过表达CSFV非结构蛋白NS3-NS4A以及NS3^(pro)-NS4A慢病毒载体氨基酸序列全部正确,无移码;重组表达载体感染293T细胞24 h后,感染效率可达90%以上,慢病毒包装成功;Western blot分析成功获得稳定表达CSFV NS3-NS4A、NS3^(pro)-NS4A巨噬细胞系;通过蛋白组学分析,筛选出NS3-NS4A/mock组中MAPK与PI3K通路中上调蛋白11个,下调蛋白24个;经Western blot检测CSFV NS3-NS4A显著降低了MAPK通路中CASP3、NFκB1、IKBKG的表达,PI3K通路中CDK4、CDC37的表达。本研究成功构建了稳定表达NS3-NS4A、NS3^(pro)-NS4A蛋白的3D4/21细胞系,并对蛋白组学筛选的关键蛋白进行功能分析,为研究CSFV NS3-NS4A调控宿主天然免疫应答的机制提供物质基础。 展开更多
关键词 瘟病毒 NS3-NS4A NS3^(pro)-NS4A 肺泡细胞 稳定表达
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山豆根多糖对猪圆环病毒Ⅱ型感染猪肺泡巨噬细胞炎性因子水平的影响 被引量:6
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作者 贾妮娜 曹迷霞 +4 位作者 杨剑 刘梦倩 陈奇 韦英益 胡庭俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1825-1831,共7页
试验旨在研究山豆根多糖(SSP)对猪肺泡巨噬细胞3D4/2感染猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus virusⅡtype,PCV2)后炎性因子水平的影响。本试验设空白对照组、PCV2感染组、脂多糖(LPS)对照组和3种浓度(100、200和400μg/mL)的山豆根多糖... 试验旨在研究山豆根多糖(SSP)对猪肺泡巨噬细胞3D4/2感染猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus virusⅡtype,PCV2)后炎性因子水平的影响。本试验设空白对照组、PCV2感染组、脂多糖(LPS)对照组和3种浓度(100、200和400μg/mL)的山豆根多糖组,采用PCV2体外感染猪肺泡巨噬细胞,在培养液中分别加入100、200和400μg/mL山豆根多糖培养24 h后收集样品,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-8(IL-8)水平和胞内环氧合酶-1(COX-1)、环氧合酶-2(COX-2)的酶活性,实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、COX-2基因及其蛋白表达。结果显示,PCV2感染猪肺泡巨噬细胞后极显著提高了MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性(P<0.01),iNOS、COX-2 mRNA和蛋白表达水平均极显著提升(P<0.01);100、200、400μg/mL山豆根多糖处理后,3D4/2细胞MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),其中400μg/mL山豆根多糖处理后效果最显著,细胞内iNOS、COX-2基因mRNA表达水平同样显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01);100、200、400μg/mL山豆根多糖处理后,显著或极显著抑制了由PCV2诱导的iNOS蛋白表达量的增加(P<0.05;P<0.01),经200、400μg/mL山豆根多糖处理后显著抑制COX-2蛋白表达量的增加,400μg/mL山豆根多糖处理效果最佳。综上所述,山豆根多糖可在一定程度上抑制PCV2感染所引起的促炎症因子mRNA表达的升高及其蛋白的表达,起到一定的缓解炎症的作用。 展开更多
关键词 山豆根多糖 圆环病毒Ⅱ型 猪肺泡巨噬细胞3d4/2 炎性因子
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PCV2通过NF-κB/NLRP3信号通路调控体外培养PAMs分泌IL-1β 被引量:7
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作者 李海花 张蕾 +3 位作者 杨春蕾 赵向华 乔家运 王文杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2366-2372,共7页
为探讨猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)产生白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的分子机制,试验选取2头PCV2和PRRSV抗原、抗体均为阴性的6周龄普通仔猪,无菌分离P... 为探讨猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)产生白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的分子机制,试验选取2头PCV2和PRRSV抗原、抗体均为阴性的6周龄普通仔猪,无菌分离PAMs,以体外培养的PAMs为研究对象,采用ELISA方法检测PAMs培养上清液中IL-1β的生成,采用实时荧光定量PCR方法检测PAMs中NLRP3和凋亡相关点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的mRNA表达水平,分别用小干扰RNA(siRNA)方法和核因子-kappa B(NF-κB)抑制试验分析NLRP3和NF-κB对PCV2诱导PAMs产生IL-1β的调控作用。结果显示,PCV2感染PAMs后能够显著或极显著增加IL-1β、NLRP3(1h除外)和ASC(1、3h除外)的生成(P<0.05;P<0.01)。siRNA能使58.3%的NLRP3基因沉默,且NLRP3沉默后PCV2诱导PAMs产生IL-1β的水平显著下降(P<0.05)。NF-κB被抑制后PCV2诱导PAMs产生IL-1β的水平也明显下降。结果表明,PCV2通过NF-κB/NLRP3信号通路调控体外培养PAMs分泌IL-1β。 展开更多
关键词 圆环病毒2 肺泡细胞 细胞介素-1Β 核因子-KAPPA B NLRP3
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