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红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型诱导猪肺泡巨噬细胞炎症的作用机制
1
作者 韦兴克 徐一丹 +6 位作者 魏岩 潘诗琴 欧德渊 曾诚 彭羽 宋旭琴 杨剑 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期900-910,共11页
[目的]阐明红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型(PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)炎症的作用机制,为将红车轴草异黄酮开发成兽用抗炎药品提供理论依据。[方法]以PCV2感染诱导建立3D4/2细胞炎症模型,再以不同浓度(0.25、0.50和1.00 mg/mL)的... [目的]阐明红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型(PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)炎症的作用机制,为将红车轴草异黄酮开发成兽用抗炎药品提供理论依据。[方法]以PCV2感染诱导建立3D4/2细胞炎症模型,再以不同浓度(0.25、0.50和1.00 mg/mL)的红车轴草异黄酮溶液及地塞米松(DXMS)分别处理3D4/2细胞,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)等细胞炎症因子的分泌及其基因表达水平,同时采用Western blotting检测NF-κB信号通路和MAPK信号通路相关蛋白(p65、IκB-α和p38)的表达与磷酸化情况。[结果]经PCV2诱导后,3D4/2细胞的生长明显受到抑制,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的含量极显著升高(P<0.01,下同),对应的基因相对表达量也极显著升高;IκB-α蛋白降解水平、p38蛋白表达及p65蛋白的磷酸化与表达水平均极显著提升。以0.25、0.50和1.00 mg/mL红车轴草异黄酮处理PCV2诱导3D4/2细胞,其生长状况与空白对照组相比无明显差异,与PCV2诱导3D4/2细胞相比,促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量及其基因相对表达量呈明显下降趋势,而抗炎因子IL-10含量及其基因相对表达量呈明显上升趋势,且均呈剂量依赖性,以1.00 mg/mL红车轴草异黄酮的效果最佳;此外,不同浓度的红车轴草异黄酮均能极显著抑制p65蛋白磷酸化及IκB-α蛋白降解,同时极显著降低p65和p38蛋白的表达,且其变化趋势基本上呈剂量依赖性,即通过干扰NF-κB信号通路和MAPK信号通路的激活而发挥抗炎作用。[结论]红车轴草异黄酮对PCV2诱导3D4/2细胞具有抗炎作用,其作用机制是通过抑制炎症因子释放,促进抗炎细胞因子IL-10分泌,以及控制NF-κB信号通路和MAPK信号通路的激活来实现。 展开更多
关键词 红车轴草异黄酮 猪肺泡巨噬细胞(3D4/2) 猪圆环病毒2型(PCV2) 炎症因子 信号通路
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非洲猪瘟病毒感染过程中巨噬细胞极化表型变化的研究 被引量：1
2
作者 崔宏全 姜成刚 +6 位作者 文莉莉 范宇琴 刘英豪 都兰 王靖飞 赵东明 何希君 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期54-62,共9页
为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)对巨噬细胞极化表型的影响,本研究将100ng/mL脂多糖(LPS)+50ng/mL IFN-γ诱导猪肺泡巨噬细胞(PAM)成为M1型巨噬细胞(M1组),用50 ng/mL IL-4诱导PAM成为M2型巨噬细胞(M2组),以不做任何处理的PAM作为对照组。24 ... 为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)对巨噬细胞极化表型的影响,本研究将100ng/mL脂多糖(LPS)+50ng/mL IFN-γ诱导猪肺泡巨噬细胞(PAM)成为M1型巨噬细胞(M1组),用50 ng/mL IL-4诱导PAM成为M2型巨噬细胞(M2组),以不做任何处理的PAM作为对照组。24 h后采用荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞中M1型细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α及M2型细胞因子IL-10及其标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、几丁质酶-1(Ym-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)mRNA的转录水平;采用Luminex细胞多因子试剂盒检测各组细胞上清中M1型细胞因子TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18和M2型细胞因子IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)、IL-10的表达水平;采用NO试剂盒及流式细胞术分别检测各组细胞上清中M1型巨噬细胞代谢物NO的含量及其细胞表面标志物CD80+细胞的占比;采用western blot检测各组细胞中M2型巨噬细胞标志物Arg-1蛋白的表达。结果显示,M1组中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-αmRNA的转录和蛋白分泌水平、IL-1α的分泌水平、NO的含量及CD80+细胞的占比均显著和极显著高于其余两组。M2组中抑炎细胞因子IL-10和Arg-1 mRNA的转录和蛋白的分泌水平均极显著高于其余两组。未检测到IL-18和IL-1RA的表达。在此基础上将ASFV Pig/HLJ/2018株以MOI 1感染PAM,不同时间后(0、12 h、24 h、36 h及48 h)分别按照上述各方法检测PAM中各细胞因子及极化标志物的转录水平及蛋白的分泌水平,分析ASFV感染后巨噬细胞表型的极化方向。结果显示,与对照组相比,ASFV感染后PAM中M1型细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的转录水平均极显著升高,IL-6的转录水平一直维持在较高水平,PAM中M2型细胞因子IL-10及Arg-1的转录水平先升后降,并分别于感染后48h与12 h达到峰值,后者随后下降;Ym-1与PPAR的转录水平均在感染后24 h达到峰值,随后下降;ASFV感染后PAM中部分细胞因子蛋白的分泌水平与其转录水平的变化趋势类似;NO含量显著和极显著升高,CD80+细胞占比显著升高直至达到峰值;Arg-1的表达量均极显著升高(除了感染后48 h),在感染后36 h达到峰值后下降。上述结果表明,ASFV感染后PAM同时向M1型及M2型极化,M1型极化随着感染时间的延长持续存在,而M2型极化则呈先上升后下降的趋势。本研究为进一步探究ASFV感染对宿主免疫状态的影响及宿主如何响应ASFV感染的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 肺泡巨噬细胞 极化
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黄芩苷对多杀性巴氏杆菌感染猪巨噬细胞后炎症因子表达及信号通路影响的研究 被引量：8
3
作者 刘静 周红蕾 +4 位作者 戈文 徐一天 张一多 王丽华 安东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期78-83,共6页
为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MA... 为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路3个关键蛋白(p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK)的表达水平;采用ELISA和荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)分析检测低浓度剂量黄芩苷(L组,20μmol/L)、中浓度剂量黄芩苷(M组,40μmol/L)和高浓度剂量黄芩苷(H组,60μmol/L)对Pm感染的猪巨噬细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β分泌水平及其m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)和模型组(HN-13);利用抑制剂SCH772984阻断ERK通路,采用ELISA和RT-qPCR检测黄岑苷对Pm感染的HD11细胞内炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达及m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)、模型组(HN-13)、抑制组(HN-13+抑制剂)。结果显示:与HN-13株处理0 min组相比,随着感染时间的延长,HN-13株感染HD11细胞中p-ERK/ERK的蛋白表达量逐渐升高(P<0.01),而p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白表达量均未发生显著变化(P>0.05),表明,HN-13株可使HD11细胞炎症相关ERK通路蛋白表达增强,且与作用时间呈正相关。与模型组(HN-13)相比,3个浓度剂量的黄芩苷均显著抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌水平及m RNA转录水平(P<0.05),且抑制作用随着黄芩苷浓度升高而增强。与抑制组相比,黄芩苷与抑制剂共处理组可以显著抑制HN-13感染的HD11细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌及m RNA转录水平(P<0.05)。综上所述,黄芩苷可以抑制Pm感染的HD11细胞中ERK通路相关蛋白的表达和分泌,进而发挥抗炎作用。本研究为研制防治Pm引起的猪肺疫的新药提供了思路。 展开更多
关键词 黄芩苷 多杀性巴氏杆菌 猪巨噬细胞 炎症表达 MAPK信号通路
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基于mTOR调控肺泡巨噬细胞自噬研究清肺解毒化痰方对大鼠重症肺炎的影响
4
作者 贾茗棪 梁瀛今 +7 位作者 张康 李亚 姬文帅 杜琛 孔欣欣 谢凯 井芃祯 王海峰 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第7期1383-1391,共9页
目的:探究清肺解毒化痰方(Qingfei-Jiedu-Huatan Formula,QJHF)经mTOR调控肺泡巨噬细胞自噬治疗重症肺炎(severe pneumonia,SP)大鼠的机制。方法:60只SPF级雄性大鼠随机分为对照(control)组、模型(model)组、QJHF组、莫西沙星(moxifloxa... 目的:探究清肺解毒化痰方(Qingfei-Jiedu-Huatan Formula,QJHF)经mTOR调控肺泡巨噬细胞自噬治疗重症肺炎(severe pneumonia,SP)大鼠的机制。方法:60只SPF级雄性大鼠随机分为对照(control)组、模型(model)组、QJHF组、莫西沙星(moxifloxacin,MOX)组、雷帕霉素(rapamycin,RAPA)组、QJHF+RAPA组,每组10只。采用肺炎克雷伯杆菌制备SP大鼠模型。给药7 d,ELISA法检测BALF中IL-33、IFN-γ变化;HE染色观察肺组织病理改变;免疫荧光共定位法检测肺泡巨噬细胞自噬;qPCR法检测肺组织mTOR、beclin-1和LC3 mRNA表达;Western blot法检测p-mTOR/mTOR、beclin-1和LC3-II/LC3-I蛋白表达。结果:与control组相比,model组HE染色可见肺泡壁断裂增厚、肺泡腔内炎性细胞浸润、肺组织损伤严重(P<0.01),BALF中IL-33和IFN-γ水平升高(P<0.01),CD68和LC3免疫荧光共定位表达增加,肺组织中mTOR mRNA表达下降(P<0.01),而LC3和beclin-1 mRNA表达上升(P<0.01),p-mTOR/mTOR蛋白表达下降(P<0.01),但LC3-II/LC3-I和beclin-1蛋白表达上升(P<0.01);与model组相比,经QJHF、MOX干预后上述各项指标显著改善(P<0.01),经RAPA干预后加重(P<0.05),经QJHF联合RAPA干预稍有改善但无统计意义(P>0.05);MOX组与QJHF组相比各指标无显著差异(P>0.05);QJHF+RAPA组与RAPA组相比各指标情况显著改善(P<0.05)。结论:清肺解毒化痰方能改善重症肺炎炎症反应,机制可能与激活mTOR磷酸化活性来抑制肺泡巨噬细胞过度自噬有关。 展开更多
关键词 清肺解毒化痰方 重症肺炎 肺泡巨噬细胞 自噬 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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猪骨髓源单核巨噬细胞诱导培养方法建立及应用
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作者 张伟 李俊辉 +4 位作者 潘晓梅 曹剑 唐慧芬 毛丽萍 贺笋 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期50-59,共10页
选择不同细胞因子和培养基,比较4种培养基和细胞因子对猪骨髓细胞分化为单核巨噬细胞数量和增殖能力的影响,筛选出猪骨髓细胞诱导单核巨噬细胞的最佳培养条件。结果显示,在含10%胎牛血清的DME/F12培养基中添加粒细胞-巨噬细胞集落刺激因... 选择不同细胞因子和培养基,比较4种培养基和细胞因子对猪骨髓细胞分化为单核巨噬细胞数量和增殖能力的影响,筛选出猪骨髓细胞诱导单核巨噬细胞的最佳培养条件。结果显示,在含10%胎牛血清的DME/F12培养基中添加粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(40 ng/mL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)(50 ng/mL)能够诱导骨髓细胞诱分化成大量单核巨噬细胞,细胞数量与对照组差异显著(P<0.05),并且诱导细胞中有针对单核巨噬细胞的特异性抗原(CD64)表达,单核巨噬细胞纯度为77.57%左右。诱导后的细胞中检测到针对单核巨噬细胞的特异性Nramp1基因。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)能够在细胞中大量增殖,与未诱导的骨髓细胞差异显著(P<0.05)。以上结果表明,DME-F12培养基添加GM-CSF和L929细胞上清液能够显著增强猪骨髓细胞诱导分化成单核巨噬细胞的能力,并且能够获得高纯度、高密度、高活率的单核巨噬细胞。 展开更多
关键词 猪 骨髓 单核巨噬细胞 体外培养
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肺泡巨噬细胞对屋尘螨诱导的过敏性气道炎症的影响
6
作者 程百合 杨文婷 +1 位作者 侯飞 唐丽 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期276-280,286,共6页
目的:研究屋尘螨(HDM)诱导的过敏性气道炎症小鼠模型中免疫细胞的变化,并对肺泡巨噬细胞(AM)在其中的效应功能进行初步探索。方法:气管注射HDM诱导过敏性气道炎症,并在建模前通过气管注射氯膦酸盐脂质体(CL)特异性地对AM进行清除;心脏... 目的:研究屋尘螨(HDM)诱导的过敏性气道炎症小鼠模型中免疫细胞的变化,并对肺泡巨噬细胞(AM)在其中的效应功能进行初步探索。方法:气管注射HDM诱导过敏性气道炎症,并在建模前通过气管注射氯膦酸盐脂质体(CL)特异性地对AM进行清除;心脏灌注分离小鼠全肺免疫细胞;气管灌洗分离小鼠肺泡灌洗液免疫细胞;ELISA检测肺泡灌洗液Ⅱ型细胞因子的水平;流式细胞术检测肺脏或肺泡灌洗液免疫细胞的变化;HE染色、PAS染色评价HDM建模后肺脏炎症粒细胞浸润、杯状细胞增生以及黏液分泌情况。结果:在HDM诱导的过敏性气道炎症中,Ⅱ型免疫反应的效应细胞如Ⅱ型先天性淋巴细胞(ILC2)、嗜酸性粒细胞显著增加,组织学分析表明肺组织有大量炎症细胞浸润,杯状细胞增生,黏液分泌增加。而清除AM减缓了HDM诱导的Ⅱ型免疫反应,但促进了中性粒细胞的浸润,加重了肺脏的病理损伤。结论:AM在HDM诱导过敏性气道炎症中发挥重要作用。 展开更多
关键词 屋尘螨 过敏性气道炎症 肺泡巨噬细胞 嗜酸性粒细胞 Ⅱ型先天性淋巴细胞
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不同模式PM_(2.5)暴露下大鼠的肺泡巨噬细胞活化及其机制
7
作者 朱丽娜 杨林汇 +3 位作者 林本成 石玥 刘焕亮 袭著革 《中国环境科学》 北大核心 2025年第2期1099-1109,共11页
为探讨长期低浓度连续与高浓度间歇两种PM_(2.5)暴露模式对大鼠肺泡巨噬细胞活化的影响,将Wistar大鼠分为三组:空白对照组、4倍浓缩PM_(2.5)连续暴露组(4FC组)和8倍浓缩PM_(2.5)间歇暴露组(8FI组).采用动物全身动态暴露系统对大鼠进行染... 为探讨长期低浓度连续与高浓度间歇两种PM_(2.5)暴露模式对大鼠肺泡巨噬细胞活化的影响,将Wistar大鼠分为三组:空白对照组、4倍浓缩PM_(2.5)连续暴露组(4FC组)和8倍浓缩PM_(2.5)间歇暴露组(8FI组).采用动物全身动态暴露系统对大鼠进行染毒,共暴露84天.HE染色法观察肺组织病理变化,比色法测定肺泡灌洗液(BALF)中氧化应激指标,RT-q PCR测定肺组织中M2极化标志物的m RNA水平,Western-blot测定肺组织中巨噬细胞活化信号通路相关蛋白表达水平.结果显示,与对照组相比,实验组大鼠出现明显的肺损伤症状,BALF中氧化指标升高.大鼠肺组织中M2极化标志物的m RNA水平增加,PI3K/AKT以及JAK1/STAT6信号通路相关蛋白表达均明显上升,且8FI组高于4FC组.由此证明,长期吸入PM_(2.5)可通过激活PI3K/AKT和JAK1/STAT6信号通路促进肺泡巨噬细胞的活化,进而造成肺损伤.且高浓度间歇吸入PM_(2.5)比低浓度连续吸入PM_(2.5)对肺部造成的损伤更为严重.在细胞水平上,进一步验证了PM_(2.5)对AMs活化及相关信号通路的影响. 展开更多
关键词 PM_(2.5) 动态暴露 肺泡巨噬细胞 PI3K/AKT信号通路 JAK1/STAT6信号通路
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桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用 被引量：1
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作者 韩辰淼 王靖萱 +2 位作者 杨海峰 陈晓兰 卜仕金 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3643-3651,共9页
[目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞... [目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。[结果]与0μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR 4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P<0.01)。[结论]MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。 展开更多
关键词 桑叶多糖 猪肺泡巨噬细胞 免疫调节 细胞因子
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猪繁殖与呼吸综合征病毒促进猪链球菌2型感染猪肺泡巨噬细胞的初步研究 被引量：16
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作者 宋冬 全映颖 +5 位作者 高树基 申娅敏 高梦霞 王瑜欣 魏颖 汪洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期385-391,共7页
为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-H... 为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-HA共感染组(PRRSV-HA组)、T1/5单独感染组(T1/5组)和PRRSV-T1/5共感染组(PRRSV-T1/5组),利用该模型通过黏附试验、侵入试验和细胞内存活试验检测PRRSV对HA和T1/5黏附、侵入iPAM细胞及对该细胞存活率的影响,进一步利用荧光定量PCR方法检测各感染组iPAM模型细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平。黏附试验结果显示,HA感染2 h后,PRRSV-HA组细菌对细胞的黏附水平极显著高于HA组(P<0.01或P<0.001);T1/5感染6 h后,PRRSV-T1/5组细菌对细胞的黏附水平极显著高于T1/5组(P<0.001),表明PRRSV与HA或T1/5共感染可以促进HA和T1/5对iPAM模型细胞的黏附,且HA对iPAM细胞的黏附水平高于T1/5。侵入试验结果显示,感染4 h后,共感染组细菌侵入iPAM细胞中的数量比单独感染组极显著增多(P<0.01或P<0.001)。细胞内存活试验结果显示,感染2 h后,共感染组细菌的存活率比单独感染组极显著升高(P<0.001)。荧光定量PCR试验结果显示,感染4 h时,共感染组iPAM细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平极显著高于单独感染组(P<0.001)。本研究首次建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染i PAM的模型,基于该模型研究首次发现PRRSV感染不仅促进了不同毒力SS2对i PAM细胞的黏附、侵入及SS2在iPAM细胞内的存活,还可以协同SS2显著提高该细胞中细胞因子的转录水平。本研究为进一步探究PRRSV和SS混合感染的机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪链球菌 永生化猪肺泡巨噬细胞 共感染
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副猪嗜血杆菌和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫分子表达的影响 被引量：1
10
作者 郑新添 林成鸿 +2 位作者 李晓华 林炜明 黄翠琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第7期33-37,共5页
副猪嗜血杆菌(Hps)是猪上呼吸道常见条件致病菌之一,在临床上Hps和圆环病毒2型(PCV2)混合感染加剧了断奶仔猪多系统衰竭综合征的症状。为探讨Hps和PCV2共感染的致病机制,本试验建立了体外Hps和PCV2共感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的模型,分... 副猪嗜血杆菌(Hps)是猪上呼吸道常见条件致病菌之一,在临床上Hps和圆环病毒2型(PCV2)混合感染加剧了断奶仔猪多系统衰竭综合征的症状。为探讨Hps和PCV2共感染的致病机制,本试验建立了体外Hps和PCV2共感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的模型,分别检测感染12、24 h和36 h后的PAM细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-4和IL-10)、猪白细胞抗原(SLA)分子SLA-DR、SLA-DM以及共刺激分子CD 80和CD 86的mRNA转录水平,以探讨其动态变化规律。结果显示,与单一感染相比,Hps和PCV2共感染的PAM在感染24 h内,IL-1β和TNF-α表达水平显著上升(P<0.05),而IL-4和IL-10表达显著下降(P<0.05);在感染36 h内,CD 80、CD 86及SLA-DM、SLA-DR的表达水平显著下降(P<0.05)。结果表明,Hps和PCV2共感染增进了PAM促炎症因子表达,抑制了PAM抑炎因子表达及外源性抗原加工和递呈相关分子表达,从而消弱了其免疫功能。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 猪圆环病毒2型 共感染 肺泡巨噬细胞 免疫分子
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诱导猪肺泡巨噬细胞CD163受体表达的细胞因子筛选 被引量：1
11
作者 刘源 马卓媛 +3 位作者 樊港 楚电峰 张仕强 王妍 《动物医学进展》 北大核心 2022年第4期12-18,共7页
猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞... 猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞,因此其表达调控的研究备受关注。为了探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)、白介素3(IL-3)和地塞米松(dexamethasone)及其组合对PAM中CD163受体表达的促进作用,通过RT-qPCR和免疫荧光染色在原代PAM中从mRNA和蛋白水平对不同因子及其组合中CD163受体的表达情况进行检测。结果显示,M-CSF、GM-CSF、TGF-β1、IL-10、IL-3和dexamethasone都能在一定范围内促进CD163受体的表达,通过组合发现dexamethasone+IL-10对于CD163受体表达的促进作用最为显著,为进一步开展CD163的表达调控研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肺泡巨噬细胞 CD163 地塞米松 白介素10 猪
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基于CRISPR/Cas9技术的SIRT3基因敲除猪肺泡巨噬细胞系的构建与鉴定
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作者 王宝鑫 张文华 +4 位作者 董霞 郑好 张晶 陈洪波 周傲 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期991-1000,共10页
【目的】旨在构建稳定敲除SIRT3基因的猪肺泡巨噬细胞系,分析SIRT3敲除对病毒诱导的炎症反应的调控作用,为探究SIRT3基因在宿主抗病毒感染中的作用奠定试验基础。【方法】研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对猪SIRT3基因第2号外显子设... 【目的】旨在构建稳定敲除SIRT3基因的猪肺泡巨噬细胞系,分析SIRT3敲除对病毒诱导的炎症反应的调控作用,为探究SIRT3基因在宿主抗病毒感染中的作用奠定试验基础。【方法】研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对猪SIRT3基因第2号外显子设计sgRNA,连接pb-U6-puro-BFP质粒后转染3D4/21细胞,筛选单克隆细胞,结合Sanger测序、qPCR和Western blot技术对获得的单克隆细胞进行鉴定,进而获得SIRT3基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21-SIRT3-KO),并以流感病毒A/WSN/33为研究对象,感染野生型和3D4/21-SIRT3-KO猪肺泡巨噬细胞,利用qPCR方法检测炎症相关因子IL-6、IL-8的表达水平,初步分析SIRT3基因在流感病毒感染诱导炎症反应的影响。【结果】Sanger测序结果显示,在挑选获得的敲除SIRT3基因的猪肺泡巨噬细胞克隆中,SIRT3基因第2号外显子位点产生了碱基缺失,并导致移码突变;同时,利用qPCR和Western blot检测猪肺泡巨噬细胞中SIRT3 mRNA和蛋白水平的表达,结果显示与野生型细胞相比,3D4/21-SIRT3-KO细胞中SIRT3 mRNA和SIRT3蛋白均不表达;流感病毒感染SIRT3基因敲除的猪肺泡巨噬细胞时发现,敲除SIRT3能显著加剧流感病毒感染诱导的炎症反应。【结论】研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了SIRT3基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系,并初步分析了SIRT3在流感病毒感染中作用。 展开更多
关键词 猪肺泡巨噬细胞系 SIRT3 CRISPR/Cas9 炎症反应 抗病育种 基因编辑
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副猪嗜血杆菌ompP2基因在猪肺泡巨噬细胞中的表达
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作者 于江 杜以军 +7 位作者 李俊 丛晓燕 孙文博 时建立 陈智 陈蕾 吴家强 王金宝 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期11-14,共4页
为了进一步研究副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的功能,根据已发表的副猪嗜血杆菌核苷酸序列,设计并合成1对引物,PCR扩增HPS LZ株外膜蛋白ompP2基因,获得大小为1 158bp的核苷酸片段,该片段纯化后克隆至pEASY-Blunt载体,转化后鉴定,再与真核... 为了进一步研究副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的功能,根据已发表的副猪嗜血杆菌核苷酸序列,设计并合成1对引物,PCR扩增HPS LZ株外膜蛋白ompP2基因,获得大小为1 158bp的核苷酸片段,该片段纯化后克隆至pEASY-Blunt载体,转化后鉴定,再与真核表达质粒pCI-neo经过酶切和连接反应,转化感受态大肠杆菌Trans-T1,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。通过脂质体法将pCI-neoompP2转染猪肺泡巨噬细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测重组质粒是否表达。结果显示,成功构建了含ompP2基因的副猪嗜血杆菌真核表达载体pCI-neo-ompP2,提取转染该质粒的猪肺泡巨噬细胞的mRNA,进行RT-PCR扩增,在1 000bp^2 000bp之间可见1条明显的条带。Western blot发现在42ku处出现目的条带。试验结果为后期研究副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的机理奠定了基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 ompP2基因 真核表达载体 猪肺泡巨噬细胞 表达
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染肺泡巨噬细胞后差异表达膜蛋白的鉴定与分析 被引量：3
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作者 张玉娇 高飞 +6 位作者 曲泽慧 姜一峰 周艳君 虞凌雪 李丽薇 赵款 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期1-8,共8页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。目前,对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly-pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)引起的高发病率和高死亡率的机制仍不清楚。本研究利用1MOI的EGFP标记的HP-PRRSV毒株HuN4(rHuN4-EGFP)和其体外传代致弱毒株HuN4-F112(rHuN4-F112-EGFP)分别感染肺泡巨噬细胞(pulmonaryalveolarmacrophage,PAM),24h后通过流式细胞术,从FITC通道收集被PRRSV强弱毒感染的PAM,提取膜蛋白进行Shotgun质谱分析。试验最终获得82个在强弱毒感染PAM过程中存在差异表达的膜蛋白。感染rHuN4-EGFP的样品与未感染样品相比,有72个蛋白特异表达;感染rHuN4-F112-EGFP的样品与未感染样品相比,有12个蛋白特异表达。通过GO分析发现,这些蛋白主要参与代谢、生物调节与细胞加工过程,大多数蛋白具有结合、催化活性。进一步在MARC-145细胞上过表达部分差异膜蛋白,发现其中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein coverteases subtilism/kexin 9,PCSK9)能明显抑制PRRSV强毒株和弱毒株的复制,Clusterin、Apoliprotein C-II能促进PRRSV强毒株复制。本研究表明利用Shotgun质谱技术鉴定出的差异表达膜蛋白对PRRSV复制有影响,深入分析PRRSV感染后差异表达的膜蛋白变化将有利于进一步明确其致病机制。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 肺泡巨噬细胞 膜蛋白
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稳定表达CD163蛋白的猪肺泡巨噬细胞系的建立 被引量：3
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作者 赵凯 冯磊 +2 位作者 郑其升 侯继波 陈溥言 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期565-570,共6页
以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163 cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。使用脂质体... 以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163 cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。使用脂质体2000将pcDNA4.0-CD163转染猪肺泡巨噬细胞系3D4/21(CRL-2843),通过Zeocin抗性筛选,建立稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系。RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)检测结果表明CD163在mRNA和蛋白质水平均已表达。通过Zeocin抗性筛选,共获得8株表达CD163的重组细胞株,IFA检测结果表明表达的CD163定位于重组细胞的细胞膜表面。去除筛选抗性后连续传代10代,间接免疫荧光检测结果确定重组细胞株在10代内性状稳定,说明稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系构建成功。 展开更多
关键词 CD163 猪肺泡巨噬细胞 重组细胞系
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定量蛋白质组学技术分析猪繁殖与呼吸综合征病毒感染肺泡巨噬细胞的差异表达蛋白质 被引量：1
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作者 刘龙 陈红英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1222-1231,共10页
作者采用定量蛋白质组学方法,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)和正常PAMs的蛋白质组进行差异分析。通过高效液相色谱和电喷雾串联质谱仪定量分析PRRSV感染细胞与未感染对照细胞间的差异表达蛋白质,并运用Max-Q... 作者采用定量蛋白质组学方法,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)和正常PAMs的蛋白质组进行差异分析。通过高效液相色谱和电喷雾串联质谱仪定量分析PRRSV感染细胞与未感染对照细胞间的差异表达蛋白质,并运用Max-Quant 1.0.7.4软件结合蛋白质数据库PaxDb进行鉴定。与对照组相比,感染组共鉴定出39个差异表达蛋白质,其中30个蛋白质表达上调,9个蛋白质表达下调。通过Western blot和ELISA验证了感染的PAMs中SPP1、IFIT3、STAT3及IL-8的表达情况与质谱鉴定结果一致。通过液相色谱—串联质谱联用(LC-MS/MS)技术,筛选得到多个与PRRSV感染相关的差异表达蛋白质,为PRRSV发病的分子机制分析提供了新依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞 差异表达蛋白质 感染
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枯草芽孢杆菌突变株的构建及其对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响 被引量：1
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作者 李天瑾 杨明明 龚月生 《家畜生态学报》 北大核心 2018年第3期12-16,共5页
试验旨在研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)不萌发芽孢和不生孢营养体对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响。利用同源重组敲除B.subtilis PY79芽孢萌发基因clW-gerD和生孢早期基因spo0A,构建芽孢不萌发突变株B.subtilis cl... 试验旨在研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)不萌发芽孢和不生孢营养体对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响。利用同源重组敲除B.subtilis PY79芽孢萌发基因clW-gerD和生孢早期基因spo0A,构建芽孢不萌发突变株B.subtilis clW-gerD-和不生孢突变株B.subtilis spo0A-,提取基因组DNA进行PCR检测;结合革兰氏染色和萌发率检测,分别对构建的B.subtilis芽孢不萌发突变株和不生孢突变株进行萌发和生孢能力鉴定;将B.subtilis clW-gerD-和B.subtilis spo0A-分别与猪肺泡巨噬细胞共培养,用ELISA试剂盒检测细胞因子分泌表达水平。结果表明:(1)成功获得不萌发突变株B.subtilis clW-gerD-和不生孢突变株B.subtilis spo0A-;(2)萌发和生孢能力检测结果显示,B.subtilis clWgerD-完全丧失芽孢萌发能力;显微镜观察和生孢率检测表明不生孢突变株B.subtilis spo0A-丧失了生孢能力;(3)B.subtilis clW-gerD-极显著的促进了细胞因子IL-6的表达(P<0.01);B.subtilis clW-gerD-、B.subtilis PY79和B.subtilis spo0A-对细胞因子IL-1β、IL-10和IL-8的表达量无显著影响(P>0.05)。B.subtilis clW-gerD-可刺激巨噬细胞分泌促炎因子IL-6,增强MΦ3D4/2细胞的炎症反应,提高机体的抗感染能力。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 猪肺泡巨噬细胞 免疫功能 细胞因子
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猪瘟病毒Shimen株侵染猪肺泡巨噬细胞与猪血管内皮细胞的转录组共表达基因分析 被引量：3
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作者 龚小程 胡傲雪 +4 位作者 李雪鹏 吴中兴 何骏 郭少敏 宁蓬勃 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期1-5,共5页
猪瘟病毒(Classical swine fever,CSFV)引起的猪瘟对于全球养猪业具有广泛危害,其深层发病机制仍待阐明。该研究基于CSFV Shimen株侵染猪肺泡巨噬细胞和猪血管内皮细胞差异表达的转录组学数据,深度挖掘这两种宿主细胞共同应答CSFV Shime... 猪瘟病毒(Classical swine fever,CSFV)引起的猪瘟对于全球养猪业具有广泛危害,其深层发病机制仍待阐明。该研究基于CSFV Shimen株侵染猪肺泡巨噬细胞和猪血管内皮细胞差异表达的转录组学数据,深度挖掘这两种宿主细胞共同应答CSFV Shimen株侵染的关键基因。结果显示,真核生物起始因子4A3(eukaryotic translation initiation factor 4A3,EIF4A3)、蛋白酶体β亚基3型(proteasome subunit beta3,PSMB3)等关键基因的异常表达可能影响宿主细胞的凋亡、周期调控等生理进程。GO(Gene Ontology)和KEGG分析表明,CSFV Shimen的侵染造成NF-κB等相关调控的生物学过程改变,并且DNA复制等信号通路出现显著性应答。联合组学分析很好地提示了CSFV Shimen对巨噬细胞及血管内皮细胞可能的共性损害,为更好地开展CSFV与宿主细胞的互作机制研究提供了有价值的信息。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪肺泡巨噬细胞 猪血管内皮细胞 转录组学关联分析
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非洲猪瘟病毒对猪肺泡巨噬细胞mRNAs和microRNAs表达模式的影响
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作者 张廷焕 柴捷 +2 位作者 陈力 龙熙 郭宗义 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第S01期348-357,共10页
旨在探究非洲猪瘟(ASFV)病毒感染猪肺泡巨噬细胞后在体内的作用方式。以感染ASFV的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的mRNAs和microRNAs测序数据为基础,利用生物信息学软件对数据进行处理,得到了一批差异表达基因;利用基因功能富集和对应蛋白互作... 旨在探究非洲猪瘟(ASFV)病毒感染猪肺泡巨噬细胞后在体内的作用方式。以感染ASFV的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的mRNAs和microRNAs测序数据为基础,利用生物信息学软件对数据进行处理,得到了一批差异表达基因;利用基因功能富集和对应蛋白互作解析生物学通路;再利用mRNAs和microRNAs的互作方式确认重要的靶标关系。结果表明:ASFV改变了PAMs中1181个基因的表达量;主要调控宿主在能量代谢过程(如脂质分解、有机羟基化合物代谢、碳水化合物分解代谢、一元羧酸代谢),以及细胞周期过程(如有丝分裂细胞周期过程、细胞周期相变、细胞周期的正向调控);ASFV还引起了PAMs中25个microRNAs的差异表达,包括病毒相关的miR-27b-3p、miR-193a-3p、miR-132等;而miR-27b-3p作为表达丰度最高的差异microRNA,它与一些重要的差异基因(如PLK2、HSP90AA1等)存在着靶标关系,进而调控机体免疫和细胞周期相关通路。综上所述,ASFV感染PAMs后的作用方式包括破坏宿主在能量代谢和细胞周期方面的稳态,以及打破了机体microRNAs调节平衡;其中miR-27b-3p等小RNAs可以作为ASFV研究的靶向分子。 展开更多
关键词 猪 ASFV 猪肺泡巨噬细胞 MRNAS MICRORNAS
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IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能 被引量：4
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作者 华梦晴 高培宇 +2 位作者 方芳 苏浩宇 宋传旺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期13-18,共6页
目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激... 目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。 展开更多
关键词 白细胞介素6(IL-6) MH-S细胞 吞噬功能 Janus激酶2(JAK2) 信号转导子与转录激活子3(STAT3) 肺泡巨噬细胞
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