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题名猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化
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作者
张锐
孙美榕
欧阳红生
张玉静
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机构
湛江海洋大学现代生化中心
深圳科安信有限公司
中国人民解放军军需大学生物化学与分子生物学教研室
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出处
《云南农业大学学报》
CAS
CSCD
2004年第3期255-259,共5页
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基金
国家自然科学基金(30070563)
军队医药卫生青年基金(98Q079)
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文摘
猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA去除信号肽后对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和SalI内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1 2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27 9%,表达的MSTN分子量为41451 3D.因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,则用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92 5%.该试验为获得较好的猪肌生成抑制素基因抗原、制备抗体打下了良好的基础。
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关键词
猪肌生成抑制索基因
成熟蛋白编码序列
表达与纯化
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Keywords
recombinant porcine myostatin gene
coding sequence for mature MSTN
expression and purifiation
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分类号
S828.2
[农业科学—畜牧学]
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