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猪IL-2真核表达质粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠细胞免疫增强作用的研究 被引量：7
1
作者 陈希文 程安春 +6 位作者 汪铭书 希尼尼根 豆文波 张平英 李雪梅 王刚 刘伍梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期60-63,共4页
目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小... 目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小鼠 ,以空载质粒pcDNA为阴性对照 ,PBS为空白对照 ;采用流式细胞仪 (FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法 )分别对小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行了检测。结果 :pcDNA IL 2与pcDNA PRRSV ORF5共同免疫小鼠后外周血对ConA有明显的反应性 ,CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数在免疫后 7天显著超过对照组 ,共同组与单独pcDNA PRRSV ORF5组有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :pcDNA PRRSV ORF5免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的细胞免疫应答 ,猪pcDNA IL 2能够显著增强pcDNA PRRSV ORF5诱导小鼠细胞免疫的能力。 展开更多
关键词 猪白细胞介素2真核表达质粒 猪繁殖与呼吸综合征病毒orf5基因疫苗 细胞免疫 小鼠
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基因枪与肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠体液及细胞免疫的比较研究 被引量：10
2
作者 陈希文 程安春 +6 位作者 汪铭书 刘菲 希尼尼根 豆文波 刘伍梅 李雪梅 张平英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期812-818,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)以不同免疫途径(基因枪和肌肉注射)免疫BALB/c小鼠,以PBS和空载质粒pcDNA3.1(+)为对照,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对小鼠外周血中CD4+、C... 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)以不同免疫途径(基因枪和肌肉注射)免疫BALB/c小鼠,以PBS和空载质粒pcDNA3.1(+)为对照,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对小鼠外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化进行了检测。结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗接种小鼠后外周血对ConA有明显的反应性,试验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4+T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组(P<0.01),CD8+T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组,不同途径基因疫苗接种小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG。在诱导细胞免疫方面,基因枪和肌肉注射各组间无明显差异;在诱导体液免疫方面,基因枪法优于肌肉注射。研究表明制备的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答,基因枪法较肌肉注射更能诱导体液免疫应答的产生。 展开更多
关键词 基因枪 肌肉注射 猪 繁殖呼吸综合征 orf5基因疫苗 小鼠 体液免疫 细胞免疫
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不同剂量猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗肌肉注射诱导仔猪细胞免疫的研究
3
《今日畜牧兽医》 2009年第9期67-67,共1页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）0RF5基因疫苗（pcDNA—PRRSV-SC2—ORF5）分别以200微克、100微克和50微克3种剂量肌肉注射免疫21日龄仔猪，同时设空载体对照和生理盐水空白对照。于免疫后7天、5天、30天、45天、60天和70天采用流式... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）0RF5基因疫苗（pcDNA—PRRSV-SC2—ORF5）分别以200微克、100微克和50微克3种剂量肌肉注射免疫21日龄仔猪，同时设空载体对照和生理盐水空白对照。于免疫后7天、5天、30天、45天、60天和70天采用流式细胞仪（FACS）和淋巴细胞增殖试验（MTT法）分别对免疫猪外周血中CD4＋CD8＋T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 细胞免疫 肌肉注射 基因疫苗 orf5 仔猪 剂量 诱导
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2020-2023年福建省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及ORF5基因变异分析
4
作者 黄文琳 于慧 +5 位作者 蓝欣 杨圆 陈洪博 范克伟 魏春华 刘建奎 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期9-16,共8页
为了研究2020-2023年福建省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异规律,采用荧光定量RT-PCR方法,对福建不同地区收集的240份疑似PRRSV的组织样品和血清进行PRRSV-1和PRRSV-2检测,对阳性样品采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5基因,应用... 为了研究2020-2023年福建省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异规律,采用荧光定量RT-PCR方法,对福建不同地区收集的240份疑似PRRSV的组织样品和血清进行PRRSV-1和PRRSV-2检测,对阳性样品采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5基因,应用分子生物学软件进行同源性和遗传变异分析。结果显示,福建省PRRSV总体阳性率为18.8%(45/240),其中PRRSV-2的阳性率为16.3%(39/240),PRRSV-1的阳性率为2.5%(6/240)。经RT-PCR成功扩增35个PRRSV-2 ORF5基因和3个PRRSV-1 ORF5基因。序列比对分析表明,35个PRRSV-2 ORF5基因核苷酸同源性为81.3%~99.8%,与代表毒株VR2332、NADC30、NADC34、QYYZ和JXA1的核苷酸同源性为80.9%~99.3%。3个PRRSV-1 ORF5基因核苷酸同源性为82.8%~98.5%,与代表毒株LV、Amervac PRRS、FJQEU14、FJEU13等的核苷酸序列同源性为81.5%~99.7%。遗传进化分析表明,福建省PRRSV-2可分为Lineage1、Lineage3和Lineage8,其中Lineage1占比最高,为68.6%(24/35,18株为NADC30-like毒株,6株为NADC34-like毒株),PRRSV-1均属于SubtypeⅠ。氨基酸分析表明,PRRSV-1 GP5蛋白氨基酸变异主要集中于信号肽区域(aa 1-33)和2个胞外域(aa 33-67和aa 89-109);PRRSV-2 GP5蛋白氨基酸变异主要集中于信号肽区域(aa 1-25)、aa 27-36区域和抗原表位C(aa 52-62)。综上表明,PRRSV-1和PRRSV-2同时在福建省流行,NADC30-like PRRSV-2为优势流行毒株且呈现遗传多样性,NADC34-like PRRSV-2和PRRSV-1可能已在福建省潜在流行。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 序列分析 遗传进化分析 NADC34
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天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因的克隆及遗传变异分析
5
作者 李文忠 荣新利 +4 位作者 刘野 吴庆东 张乐 孙英峰 于海 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期156-164,共9页
为了解天津地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的流行和遗传变异情况,收集2021-2022年天津地区养殖场209份临床疑似发病猪的组织进行检测及ORF5遗传变异分析。结果显示:PRRSV阳性样品总检出率为37.3%(78/209),并从阳性样本中选择15... 为了解天津地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的流行和遗传变异情况,收集2021-2022年天津地区养殖场209份临床疑似发病猪的组织进行检测及ORF5遗传变异分析。结果显示:PRRSV阳性样品总检出率为37.3%(78/209),并从阳性样本中选择15个不同地区来源具有代表性样品进行ORF5基因克隆序列。序列及遗传进化分析显示:该15株PRRSV毒株均属于美洲型,其中8条PRRSV毒株的ORF5基因与以HuN4为代表的类HP-PRRSV毒株同源性较高,核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性分别为89.4%~97.3%和80.6%~95.5%,而与NADC30、VR2332、NADC34等毒株的同源性较低,分别为77.1%~87.1%和77.1%~86.6%;6条PRRSV毒株的ORF5基因与以NADC30为代表的类NADC30毒株同源性最高,核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性分别为91.9%-92.7%和91.5%-93.0%,而与HuN4、VR2332、NADC34等毒株的同源性较低,分别为83.6%-87.8%和79.6%~86.6%;1条PRRSV毒株的ORF5基因与以NADC34为代表的类NADC34毒株同源性最高,核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性为96.4%和95.5%,而与NADC30、HuN4、VR2332等毒株的同源性为86.7%~89.9%和86.6%~92.0%。结果表明,2021-2022年天津地区以类HP-PRRSV、类NADC30 PRRSV为主要流行毒株,同时出现类NADC34毒株的流行,存在明显的遗传多样性。研究结果可为天津地区PRRS的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 orf5基因 序列分析 遗传变异 同源性分析
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2019—2022年天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因遗传演化分析 被引量：1
6
作者 李文军 王欢欢 +3 位作者 邵笑 刘野 李文忠 孙英峰 《天津农学院学报》 CAS 2024年第1期71-77,共7页
为分析研究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传进化关系,对2019—2022年收集的20份天津地区PRRSV阳性样品进行ORF5克隆测序,以开展遗传变异研究和系统发育分析。遗... 为分析研究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传进化关系,对2019—2022年收集的20份天津地区PRRSV阳性样品进行ORF5克隆测序,以开展遗传变异研究和系统发育分析。遗传进化结果显示,20株毒株有11株属于谱系1.8,3株属于谱系1.5,5株属于谱系8,1株为谱系5,表明该地区PRRSV毒株流行呈现多样性。ORF5基因及推导氨基酸同源性和位点进行分析,其中11株谱系1.8毒株与NADC30毒株核苷酸同源性为91.2%~93.0%,氨基酸同源性为89.6%~93.5%;3株1.5谱系毒株与NADC34毒株核苷酸同源性为93.4%~96.5%,氨基酸同源性为92.5%~95.5%;4株分离株与HP-PRRSV毒株同源性最高,核苷酸同源性为90.0%~95.5%,氨基酸同源性为86.6%~91.0%;1株分离株与经典毒株CH-1a同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.0%和89.1%,1株谱系5毒株与VR2332毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为97.8%和96.0%。在关键的氨基酸位点上存在一定程度突变,这些关键突变很可能造成病毒致病力差异,并导致病毒逃逸发生。本研究对天津地区PRRS防控提供数据支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5 遗传演化
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2023年华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析
7
作者 李松倍 谢永生 +5 位作者 龙晓琴 张晓晓 陈永杰 张春红 焦茂兴 郭春和 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期331-340,共10页
[目的]了解2023年华南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的遗传变异情况,为华南地区PRRSV的防控提供理论依据。[方法]采用实时荧光定量PCR方法对华南地区不同猪场采集的328... [目的]了解2023年华南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的遗传变异情况,为华南地区PRRSV的防控提供理论依据。[方法]采用实时荧光定量PCR方法对华南地区不同猪场采集的328份样品进行PRRSV检测,对来自不同猪场具有代表性的29个PRRSV阳性样品ORF5基因进行测序和遗传进化分析。[结果]所有样本中PRRSV的阳性率为54.27%(178/328),获得29株PRRSV。ORF5基因序列分析结果显示,所获得的PRRSV毒株均属于基因Ⅱ型毒株,29株PRRSV ORF5基因之间的核苷酸序列相似性为83.7%~100%,氨基酸序列相似性为83.0%~100%。其中6株属于以重组毒株NADC30-like为代表的谱系1,2株属于以经典毒株VR2332为代表的谱系5,21株属于以高致病性毒株JXA1为代表的谱系8。ORF5基因氨基酸突变主要集中在2个高变区、1个诱饵表位和3个跨膜区。谱系1的5株毒株的诱饵表位区域发生了V27A突变,谱系5的2株毒株的诱饵表位区域发生了V29A突变。在中和表位区域,谱系1的8株毒株发生了I39L突变,谱系8的5株毒株发生了I39F突变。在毒力相关位点中,部分毒株发生了R13Q、R151K、R151I、R151G突变。此外,谱系1的N-糖基化位点变异较多,主要集中在第30-32、32-34、33-35、34-36、35-37、57-59位氨基酸处,而谱系5和谱系8的N-糖基化位点相对保守。[结论]目前华南地区猪场的PRRSV阳性率仍较高,PRRSV流行以多谱基因Ⅱ型为特征,谱系8和谱系1毒株占比较高,并且变异复杂多样,需加强对PRRSV的监测,以掌握PRRSV毒株之间的遗传变异情况,及时做好防控。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 遗传变异 orf5基因 谱系
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因重组DNA疫苗的构建及其免疫效果评价 被引量：2
8
作者 魏春华 黄夏玲 +8 位作者 杨圆 何乐 林志锋 徐叶 黄文琳 柳开隆 戴爱玲 杨小燕 刘建奎 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第7期17-25,共9页
【目的】利用DNA改组技术(DNA shuffling)对不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因进行体外重组,构建具有良好交叉保护作用的DNA疫苗,为研制新型PRRSV疫苗提供参考。【方法】利用DNA改组技术对PRRSV谱系1、3、5.1、8.7毒株的... 【目的】利用DNA改组技术(DNA shuffling)对不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因进行体外重组,构建具有良好交叉保护作用的DNA疫苗,为研制新型PRRSV疫苗提供参考。【方法】利用DNA改组技术对PRRSV谱系1、3、5.1、8.7毒株的ORF5基因进行体外突变重组,筛选去除信号肽的重组突变体。将重组突变体与真核表达载体pCAGGS-HA连接,构建重组表达质粒并进行酶切和测序鉴定,经脂质体转染MARC-145细胞,利用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting试验检测目的蛋白的表达情况。将重组质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46(ORF5基因重组的DNA疫苗)免疫小鼠,试验同时设pCAGGS-HA空载体组、PBS空白对照组、弱毒疫苗组(经典弱毒疫苗Ingelvac PRRS MLV,MLV组)和pCA-ORF5-MLV组(ORF5基因来自Ingelvac PRRS MLV),评估其免疫效果。【结果】筛选到2个去除信号肽的重组突变体(ΔORF5-8和ΔORF5-46)。成功构建重组表达质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46,其可在MARC-145细胞中表达GP5蛋白。与pCAGGS-HA空载体组和PBS空白对照组相比,pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46组免疫小鼠血清白介素4(IL-4)和干扰素γ(INF-γ)含量均极显著提高(P<0.01),脾淋巴细胞增殖能力均极显著增强(P<0.01),均能产生针对GP5蛋白的抗体,血清中和试验表明,免疫组小鼠血清能对异源毒株产生交叉中和抗体(抗体平均滴度为10~16)。【结论】重组DNA疫苗pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46均能有效刺激并诱导机体产生细胞及体液免疫应答,具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 DNA改组技术 重组DNA疫苗 交叉保护
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基于ORF7基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-RAA检测方法的建立 被引量：1
9
作者 于娜 马佳镁 +6 位作者 张紫薇 黄春媛 范悦轩 郑佳馨 张艳 刘光亮 曹宗喜 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期117-119,共3页
根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)... 根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)copies/μL;与PRVBartha-K61、PCV、CSFV、PRRSVGD、PRRSVXH-GD、PRRSVGM2、PRRSVCH-1a病毒均无交叉反应。分别对157份样品进行荧光RT-RAA法与PCR方法的检测进行比对,结果显示,荧光RT-RAA法敏感性为94.0%,特异性为100%。建立的PRRSV荧光RT-RAA法操作简便,特异性强,灵敏度高。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf7基因 反转录-重组酶介导等温扩增 特异性 灵敏度
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猪繁殖与呼吸综合征病毒YA株ORF5基因的克隆与序列分析 被引量：9
10
作者 方六荣 牛传双 +3 位作者 肖少波 方兵兵 张辉 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期501-505,共5页
以猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)YA株为材料 ,采用RT -PCR扩增其ORF5基因全长cDNA并进行序列测定和比较分析。结果YA株ORF5基因cDNA编码区长 6 0 3bp ,可编码 2 0 0个氨基酸残基。与欧洲型代表株LV株、美洲型代表株VR - 2 332株在氨... 以猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)YA株为材料 ,采用RT -PCR扩增其ORF5基因全长cDNA并进行序列测定和比较分析。结果YA株ORF5基因cDNA编码区长 6 0 3bp ,可编码 2 0 0个氨基酸残基。与欧洲型代表株LV株、美洲型代表株VR - 2 332株在氨基酸水平上的同源性分别为 5 8%和 90 % ,与国内首株分离株 (CH - 1a)的同源性高达 95 % ,推测YA株属于美洲型。根据YA株ORF5基因编码的氨基酸序列 ,与具有代表性的 12株美洲型毒株和 2株欧洲型毒株绘制进化系统树 ,结果也显示YA株与美洲型分离毒株的遗传关系较近 ,而与欧洲型毒株的遗传关系较远。进一步采用序列分析软件对推导的氨基酸进行比较分析 ,发现YA株ORF5编码的E蛋白存在 5个潜在的N -糖基化位点 ,6个抗原位点 ,其糖基化位点的数目及抗原位点的分布与其它美洲型毒株均存在一定程度的差异 ,但 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 YA株 克隆 序列分析 orf5基因
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建 被引量：8
11
作者 赵娜 田宏 +4 位作者 吴锦艳 满自萍 尚佑军 何生虎 刘湘涛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期83-86,共4页
根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF5序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃LZH株的ORF5基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF5... 根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF5序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃LZH株的ORF5基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF5,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBacHTA-ORF5转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF5;并成功构建了PRRSV LZH株ORF5基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 克隆 杆状病毒表达
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新疆南疆猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因克隆与序列分析 被引量：8
12
作者 王旭哲 刘永宏 +5 位作者 赵丽 焦海宏 李龙凯 胡天成 段文婷 赵明明 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期357-364,共8页
[目的]掌握新疆南疆PRRSV流行毒株特点,为新疆南疆PRRS的有效预防和控制提供理论依据。[方法]研究利用克隆和测序获得了8个新疆南疆PRRSV ORF5基因全序列,并进行序列分析。[结果]8个新疆南疆PRRSV ORF5基因长度均为603 bp,它们之间核苷... [目的]掌握新疆南疆PRRSV流行毒株特点,为新疆南疆PRRS的有效预防和控制提供理论依据。[方法]研究利用克隆和测序获得了8个新疆南疆PRRSV ORF5基因全序列,并进行序列分析。[结果]8个新疆南疆PRRSV ORF5基因长度均为603 bp,它们之间核苷酸同源性为87.4%～100.0%;与欧洲型代表株LV、美洲型代表株ATCC VR-2332、中国代表株CH-1a和中国HP-PRRS代表株JXA1核苷酸同源性分别为60.9%～63.5%、88.4%～89.9%、88.9%～94.7%和87.4%～98.7%;与中国猪养殖场常用的几种弱毒疫苗株核苷酸同源性为87.4%～94.7%;与美洲型毒株和欧洲型毒株氨基酸同源性为84.5%～98.0%和50.0%～59.5%。[结论]研究的8株新疆南疆PRRSV株均属于美洲型亚群Ⅱ毒株。利用新疆南疆PRRSV分子流行病学调查结论,可为新疆南疆PRRS防制疫苗的选择等做进一步的调整或指导奠定基础。 展开更多
关键词 新疆南疆 猪繁殖与呼吸综合征 orf5基因 序列分析
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2006—2012年鲁豫冀地区15株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF5/Nsp2基因的遗传变异分析 被引量：6
13
作者 唐娜 管宇 +10 位作者 魏凤 王金良 曲光刚 肖跃强 李峰 谢金文 张松林 张倩 于新友 沈志强 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期26-32,共7页
为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,对2006—2012年来自3省区发病猪场的42份样品进行PRRSV分离鉴定,并进行了生物学特性研究和PCR鉴定,结果显示先后... 为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,对2006—2012年来自3省区发病猪场的42份样品进行PRRSV分离鉴定,并进行了生物学特性研究和PCR鉴定,结果显示先后分离到15株PRRSV。分别采用RT-PCR扩增其ORF5基因和部分Nsp2基因并测序,与GenBank中68个ORF5序列和40个Nsp2序列的推导氨基酸序列进行比对,遗传变异分析结果表明,15株分离株均属于美洲型毒株,其中13个毒株Nsp2基因推导的氨基酸序列均存在氨基酸的不连续缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列与JXA1株有较高的同源性(95.5%～97.5%);SDDY2007株与疫苗株RespPRRS MLV和VR2332株亲缘关系相近,处于同一个亚群中;而HN25-2009分离株Nsp2基因推导的氨基酸序列有30个氨基酸的特征性缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析结果显示该分离株处于VR2332所在亚群(氨基酸同源性97.5%),具有一定特殊性。本试验结果表明,2006—2012年高致病性PRRSV是鲁豫冀地区的优势流行毒株,且存在疫苗毒株,3省区流行毒株间有一定遗传差异,但无明显地域特征。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 遗传变异 orf5基因 NSP2基因
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贵州省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析 被引量：5
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作者 汤德元 赵启祖 +5 位作者 李春燕 刘霞 邹兴启 范运峰 曾智勇 朱永兴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1271-1275,共5页
为了调查猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异情况，笔者收集了贵州省16家规模化养殖场153份疑似PRRS的样品，通过RT-PCR检测和ORF5基因序列的测定，结果表明：所有样品之间ORF5基因的同源性为98.7%～100%，氨基酸的同源性为98.5%～1... 为了调查猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异情况，笔者收集了贵州省16家规模化养殖场153份疑似PRRS的样品，通过RT-PCR检测和ORF5基因序列的测定，结果表明：所有样品之间ORF5基因的同源性为98.7%～100%，氨基酸的同源性为98.5%～100%；与美洲型代表毒株VR-2332、国内标准毒株CH-1a和欧洲型代表毒株LV基因序列的同源性分别为89.2%～90%、94.8%～95.6%、59.7%～60.2%，氨基酸序列同源性分别为88.8%～89.3%、92.7%～94.2%、54.9%～55.3%，遗传衍化关系分析表明流行毒株属于美洲型。ORF5基因发生离散性变异，可以分为3个簇，与中国其他地区分离的高致病性PRRS病毒关系密切，而与早期分离的PRRS毒株关系疏远，说明猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因存在变异现象。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 orf5基因 变异分析
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2014年～2015年河南省南部地区新近猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株ORF5基因的变异分析 被引量：5
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作者 董建国 王瑞 +2 位作者 曲哲会 赵瑜 刘涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期869-873,共5页
为研究河南省南部地区新近猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行株ORF5基因的变异情况，本研究采用RT-PCR方法对2014年-2015年采自河南省南部地区猪场疑似PRRS猪肺脏样品中的ORF5基因进行了扩增，并对其核苷酸和氨基酸序列进行了生物信... 为研究河南省南部地区新近猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行株ORF5基因的变异情况，本研究采用RT-PCR方法对2014年-2015年采自河南省南部地区猪场疑似PRRS猪肺脏样品中的ORF5基因进行了扩增，并对其核苷酸和氨基酸序列进行了生物信息学分析。本研究扩增出5株PRRSV流行株的ORF5全基因片段。遗传进化分析表明，流行病毒株与国内2006年-2015年分离病毒株亲缘关系较近，而且该地区的病毒株已经发生广泛变异，出现新的NADC30．1ike株。氨基酸序列比对结果表明新出现的NADC30-like病毒株与NADC30和其他NADC30-like株相比存在3个关键氨基酸位点的变异。这些研究结果不仅揭示了信阳地区流行的PRRSVORF5基因的变异特征，而且为该地区PRRS疫情的防控提供了一定的参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 变异分析
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1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析 被引量：6
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作者 付向晶 王丹阳 +9 位作者 王兴龙 张渭东 宋祥军 刘阳坤 唐文雅 慕国辉 刘海金 贺生芳 杜恩岐 杨增岐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1773-1779,共7页
为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533... 为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 GP5基因缺失 序列分析
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新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其Nsp2和ORF5基因遗传变异分析 被引量：5
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作者 张美玲 陆桂丽 +3 位作者 薛晶 刘丽雅 简子健 夏俊 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期106-110,2,共5页
为探索新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异特征,利用RT-PCR、ORF5和部分NSP2基因序列进行分析,鉴定从新疆某猪场疑似猪高热病死亡猪肺脏分离出的一株病毒.分离的病毒株被鉴定为PRRSV美洲型,命名为XJ-Q株.该株病毒与香港分离株H... 为探索新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异特征,利用RT-PCR、ORF5和部分NSP2基因序列进行分析,鉴定从新疆某猪场疑似猪高热病死亡猪肺脏分离出的一株病毒.分离的病毒株被鉴定为PRRSV美洲型,命名为XJ-Q株.该株病毒与香港分离株HK13亲缘关系最近,与国内变异株（HUB1和JXA1）同源性较为亲近.与美洲型标准毒株VR-2332相比,该分离株在481位和532～560位共有30个氨基酸缺失;与国内分离的PRRSV变异株相比,在487～489位有3个氨基酸的独特缺失.结果表明,新疆分离株为PRRSV美洲型,属于新缺失的PRRSV毒株. 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRS) orf5基因 NSP2基因 序列分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1R株致弱过程中ORF5基因遗传变异分析 被引量：5
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作者 吴国军 蔡雪辉 +6 位作者 刘永刚 王洪峰 王淑杰 石文达 马平 张琪 李成君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期665-670,共6页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行R... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行RFLP分析,发现了一个特异性的内切酶酶切位点-TspEⅠ。根据该酶切位点,可以区分CH-1R株、CH-1a株、其它野生型毒株和参考毒株。ORF5基因的变异分析显示,该致弱毒株与CH-1a株以及其它8株参考毒株存在着差异,并且它们的氨基酸同源性在88.5%～97.0%之间。系统进化树研究表明该弱毒株仍属于CH-1a亚支。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 CH—1R株 orf5 变异分析
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2016年-2017年广东省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析 被引量：6
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作者 于林洋 董建国 +4 位作者 张乐宜 刘燕玲 梁鹏帅 王磊 宋长绪 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期23-28,共6页
为研究广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株ORF5基因的遗传演化情况,采用RT-PCR方法对2016年-2017年采自广东省地区猪场疑似PRRS猪肺脏组织样品中的PRRSV ORF5基因进行了扩增,并对这些毒株的核苷酸和氨基酸序列进行了生物信息... 为研究广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株ORF5基因的遗传演化情况,采用RT-PCR方法对2016年-2017年采自广东省地区猪场疑似PRRS猪肺脏组织样品中的PRRSV ORF5基因进行了扩增,并对这些毒株的核苷酸和氨基酸序列进行了生物信息学分析。结果表明,成功扩增出12株PRRSV流行毒株的ORF5基因片段。遗传演化分析表明,扩增出的毒株有10株与国内高致病性毒株亲缘关系较近,属于同一分支;2株与广东地区新报道的毒株QYYZ和GM2亲缘关系较近,属于同一分支。氨基酸序列比对结果表明,新分离的毒株在GP5抗原表位上存在广泛的变异。结果表明,该地区PRRSV毒株已经发生广泛变异。研究结果不仅揭示了广东地区流行的PRRSV ORF5基因的遗传演化特性,也为该地区PRRS的防控提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 变异分析
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河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-4(hs)株ORF5-7基因变异分析 被引量：5
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作者 刘涛 陈赛娟 +5 位作者 孙继国 苏霞 王娇 赵泽坤 张平 付琦 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第4期32-36,共5页
为了给河北地区预防和控制猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）提供理论数据，根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株和JXA1株的核苷酸序列，设计并合成三对特异性引物。应用RT-PCR方法分别扩增PRRSV HB-4（hs）株的ORF5，ORF6，ORF7基因片段。分别将... 为了给河北地区预防和控制猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）提供理论数据，根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株和JXA1株的核苷酸序列，设计并合成三对特异性引物。应用RT-PCR方法分别扩增PRRSV HB-4（hs）株的ORF5，ORF6，ORF7基因片段。分别将片段克隆入pGmT载体后进行测序，并与多株GenBank中发表的PRRSV毒株ORF5—7基因的核苷酸序列进行比较和变异分析。结果表明，PRRSV HB-4（hs）株属于美洲型，其与近两年流行的毒株群相似性高达98．8％～99．5％；与早些年流行毒株群相似性较低，为91．9％～92．6％。系统进化树表明：HB-4（hs）株及近两年流衍的毒株可能均由早期分离的河北HB-1（sh）株进化而来。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5—7基因 遗传变异分析
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