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2023年华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析
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作者 李松倍 谢永生 +5 位作者 龙晓琴 张晓晓 陈永杰 张春红 焦茂兴 郭春和 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期331-340,共10页
[目的]了解2023年华南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的遗传变异情况,为华南地区PRRSV的防控提供理论依据。[方法]采用实时荧光定量PCR方法对华南地区不同猪场采集的328... [目的]了解2023年华南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的遗传变异情况,为华南地区PRRSV的防控提供理论依据。[方法]采用实时荧光定量PCR方法对华南地区不同猪场采集的328份样品进行PRRSV检测,对来自不同猪场具有代表性的29个PRRSV阳性样品ORF5基因进行测序和遗传进化分析。[结果]所有样本中PRRSV的阳性率为54.27%(178/328),获得29株PRRSV。ORF5基因序列分析结果显示,所获得的PRRSV毒株均属于基因Ⅱ型毒株,29株PRRSV ORF5基因之间的核苷酸序列相似性为83.7%~100%,氨基酸序列相似性为83.0%~100%。其中6株属于以重组毒株NADC30-like为代表的谱系1,2株属于以经典毒株VR2332为代表的谱系5,21株属于以高致病性毒株JXA1为代表的谱系8。ORF5基因氨基酸突变主要集中在2个高变区、1个诱饵表位和3个跨膜区。谱系1的5株毒株的诱饵表位区域发生了V27A突变,谱系5的2株毒株的诱饵表位区域发生了V29A突变。在中和表位区域,谱系1的8株毒株发生了I39L突变,谱系8的5株毒株发生了I39F突变。在毒力相关位点中,部分毒株发生了R13Q、R151K、R151I、R151G突变。此外,谱系1的N-糖基化位点变异较多,主要集中在第30-32、32-34、33-35、34-36、35-37、57-59位氨基酸处,而谱系5和谱系8的N-糖基化位点相对保守。[结论]目前华南地区猪场的PRRSV阳性率仍较高,PRRSV流行以多谱基因Ⅱ型为特征,谱系8和谱系1毒株占比较高,并且变异复杂多样,需加强对PRRSV的监测,以掌握PRRSV毒株之间的遗传变异情况,及时做好防控。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 遗传变异 ORF5基因 谱系
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谱系1和8重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定与遗传进化分析
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作者 邹舟 黎颖 +2 位作者 韦莹莹 刘惠僮 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期29-37,共9页
2023年从广西疑似发生猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场的病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,将其命名为GXWZ20230831。采用RT-PCR扩增其全基因组序列并测序,分析遗传进化特点。结果显示,GXWZ20230831能够在Marc-145细胞上增殖,且产... 2023年从广西疑似发生猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场的病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,将其命名为GXWZ20230831。采用RT-PCR扩增其全基因组序列并测序,分析遗传进化特点。结果显示,GXWZ20230831能够在Marc-145细胞上增殖,且产生明显的细胞病变;该毒株全基因组长度为15019个核苷酸(nt),与基因2型PRRSV谱系1 NADC30-like毒株的同源性最高,为94.0%,与基因1型PRRSV代表毒株Lelystad virus同源性最低,仅为60.0%;通过Nsp2氨基酸序列比对,结果发现GXWZ20230831存在NADC30-like典型的131(111+1+19)个氨基酸的不连续缺失模式;与美洲型代表株VR2332相比,GXWZ20230831的GP5蛋白在非中和抗原表位发生了V27A、V185A以及R191K 3处突变,同时在GP5蛋白中存在4个潜在的N-糖基化位点;构建的全基因组序列、nsp2基因、ORF5基因遗传进化树均显示该毒株处于谱系1的分支;重组分析表明,GXWZ20230831是1株以谱系1经典毒株NADC30为骨架,谱系8毒株提供重组片段的重组毒株,重组断点位于基因组的nsp1(458-1821 nt)和Nsp4(5405-8179 nt)中。研究结果可为掌握广西地区的PRRSV遗传变异规律提供参考,为制定防控措施提供科学依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 重组 遗传进化分析
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桂附散对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制作用
3
作者 常可欣 刘博文 +7 位作者 周波 吴琼 张华 崔德凤 刘岩琪 宋嘉芸 张永红 童津津 《北京农学院学报》 2025年第1期62-67,共6页
【目的】基于网络药理学探讨桂附散(GFS)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抑制作用。【方法】通过TCMSP、HERB和ETCM数据库筛选GFS的有效成分及作用靶点,结合CTD、OMIM、GeneCards数据库查找PRRSV的相关靶点,通过STRING数据库构建蛋... 【目的】基于网络药理学探讨桂附散(GFS)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抑制作用。【方法】通过TCMSP、HERB和ETCM数据库筛选GFS的有效成分及作用靶点,结合CTD、OMIM、GeneCards数据库查找PRRSV的相关靶点,通过STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络;运用Cytoscape 3.7.2软件筛选出核心靶点,导入DAVID数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并构建药物-疾病-靶点-通路网络。【结果】结果表明,GFS中发挥抗PRRSV的活性成分有槲皮素、美迪紫檀素、山柰酚、刺芒柄花素、5-甲基-7-甲氧基异黄酮等共136个,核心作用靶点有肿瘤坏死因子、核转录激活蛋白1、细胞肿瘤抗原p53、胱天蛋白酶3和丝裂原激活蛋白激酶14,GO功能和KEGG通路富集分析显示,靶点作用包含生物过程190条、细胞组分14条和分子功能36条,参与趋化因子信号通路、黏着斑、生长激素合成分泌和作用、坏死性凋亡等代谢通路。【结论】综上所述,通过筛选GFS抑制PRRSV的有效成分、关键作用靶点及代谢通路,为GFS抗PRRSV的应用提供了参考依据。 展开更多
关键词 桂附散 猪繁殖与呼吸综合征病毒 网络药理学
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猪繁殖与呼吸综合征病毒的持续感染和传播特点及防控出路 被引量:3
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作者 蔡雪辉 徐敏 汤艳东 《猪业科学》 2024年第4期28-31,6,共5页
1PRRS简述。1987年,美国首次暴发猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),随后在世界各国陆续暴发该病,截至目前PRRS已遍布世界主要的养猪业国家,成为各国养猪业最为严重的疫病之一,每年给全球养猪业造成数十亿甚至上百亿美元的经济损失。
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 养猪业 持续感染 传播特点 PRRS 疫病 暴发 经济损失
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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立
5
作者 覃建光 姚静 +7 位作者 刘文波 刘嘉琪 陈国昌 任同伟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期1-6,共6页
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pE... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白纳米抗体的筛选及其对病毒复制的抑制效应
6
作者 宋雯妍 张瀚文 +5 位作者 吴澳迪 张丽燕 刘照 叶桐桐 陈创夫 盛金良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期258-270,共13页
为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组... 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组GP5蛋白免疫羊驼,并于第0、14、28、42天时采血,检测羊驼体内抗体效价后分离全血淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录后使用巢式PCR扩增出重链抗体可变区(VHH)片段,并与pCANTAB-5E载体相连后转化入TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库。经连续三轮特异性噬菌体的筛选与富集后,淘选出与PRRSV-GP5蛋白高结合力的纳米抗体,通过间接ELISA方法鉴定其反应原性,后将所获的纳米抗体基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用Lipofectamine3000转染至Marc^(-1)45细胞内,与PRRSV分别共孵育0、24、36、48、60、72 h,以探究所筛针对PRRSV-GP5蛋白的纳米抗体于胞内对病毒复制与转录产生的影响。结果表明,成功对PRRSV-GP5蛋白进行原核表达并纯化,得到浓度为2.16 mg·mL^(-1)的重组蛋白,对羊驼三次免疫14 d后,其体内抗体效价高达1∶819200,构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库,库容量达2.93×107 CFU·mL^(-1),插入率为98%。经对噬菌体抗体文库连续三轮淘选富集后,最终获得2株不同氨基酸序列的纳米抗体。间接ELISA结果显示,2株纳米抗体均与PRRSV-GP5蛋白具有良好的亲和力。将2株纳米抗体转染至Marc^(-1)45细胞内,它们分别于36与60 h时显著阻碍PRRSV的复制与转录,展现出了较好的阻碍病毒复制的能力。本研究首次筛选出针对PRRSV-GP5蛋白的特异性纳米抗体,且经验证所筛纳米抗体具备抑制PRRSV在细胞内复制的能力,研究结果为抗PRRSV新型药物的研发奠定了试验依据与物质基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 纳米抗体 噬菌体展示技术 病毒复制
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2013—2021年云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行与混合感染状况调查 被引量:3
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作者 邓珺文 毕峻龙 +4 位作者 李永能 程美玲 沈学文 杨贵树 尹革芬 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期95-100,共6页
【目的】调查云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行规律和混合感染情况。【方法】采用分子生物学方法对2013—2021年间的3112份血液样品进行PRRSV核酸检测,并进一步分析其... 【目的】调查云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行规律和混合感染情况。【方法】采用分子生物学方法对2013—2021年间的3112份血液样品进行PRRSV核酸检测,并进一步分析其流行和混合感染情况。【结果】检测样品中,有801份样品为PPRSV阳性,阳性率为25.74%,二重、三重和四重混合感染率分别为41.20%、12.48%和1.87%;不同生长阶段猪群的PRRSV感染程度差异较大,生长育肥猪感染最严重(33.24%);相对于育肥场和散养户,种猪场的感染程度较轻,三者的感染率分别为27.94%、28.94%和14.29%。对不同毒株类型分析发现:高致病性毒株和经典毒株仍是主要的流行毒株,分别占毒株数的58.49%和22.64%,但占比呈逐年下降趋势。于2019年和2021年在云南省内分别发现了类NADC30毒株和类NADC34毒株,分别占毒株数的15.09%和3.77%,其感染率呈逐渐上升趋势。【结论】猪繁殖与呼吸综合征仍是影响云南省生猪产业健康发展最重要的疫病之一,表现形式以和其他疾病混合感染为主。随着新毒株的发现,云南省PRRSV基因更加多样,防控形势愈加复杂。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 流行情况 混合感染 新发毒株
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基于ORF7基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-RAA检测方法的建立
8
作者 于娜 马佳镁 +6 位作者 张紫薇 黄春媛 范悦轩 郑佳馨 张艳 刘光亮 曹宗喜 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期117-119,共3页
根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)... 根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)copies/μL;与PRVBartha-K61、PCV、CSFV、PRRSVGD、PRRSVXH-GD、PRRSVGM2、PRRSVCH-1a病毒均无交叉反应。分别对157份样品进行荧光RT-RAA法与PCR方法的检测进行比对,结果显示,荧光RT-RAA法敏感性为94.0%,特异性为100%。建立的PRRSV荧光RT-RAA法操作简便,特异性强,灵敏度高。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基因 反转录-重组酶介导等温扩增 特异性 灵敏度
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青蒿抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的机制分析
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作者 张玲珑 贺晓霜 +5 位作者 李佳明 黄鹤 杨鸿玮 董虹 王建舫 周双海 《北京农学院学报》 2024年第4期76-81,共6页
【目的】应用网络药理学方法探明青蒿抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用机制。【方法】用TCMSP数据库检索青蒿的可能活性成分和药物作用靶点,通过CTD数据库和GeneCards数据库收集猪繁殖与呼吸综合征病毒疾病靶点,筛选出药物和疾病靶点的交... 【目的】应用网络药理学方法探明青蒿抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用机制。【方法】用TCMSP数据库检索青蒿的可能活性成分和药物作用靶点,通过CTD数据库和GeneCards数据库收集猪繁殖与呼吸综合征病毒疾病靶点,筛选出药物和疾病靶点的交集来构建蛋白质互作网络并进行GO功能与KEGG通路富集分析,对筛选出的主要活性成分与核心靶点进行分子对接验证。【结果】青蒿有19种可能活性成分和268个药物靶点,主要可能活性成分有槲皮素、山奈酚和木犀草素。PRRSV疾病靶点有3366个,其与青蒿的交集靶点有126个。青蒿抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的核心靶点有白介素-6、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-1β、前列腺素内过氧化物合成酶2、基质金属蛋白酶9、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和AP-1转录因子亚单位等。GO功能富集涉及对外源性物质刺激的反应、基因表达正调控、细胞外间隙、细胞表面、酶结合及蛋白结合等,KEGG通路主要涉及TNF、白介素-17(IL-17)等信号通路。分子对接结果显示青蒿主要活性成分与核心靶点均能实现自发结合。【结论】青蒿抗猪繁殖与呼吸综合征病毒主要有效成分可能为槲皮素、山奈酚、木犀草素,可能通过作用于IL-17和TNF信号通路发挥抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用。 展开更多
关键词 青蒿 猪繁殖与呼吸综合征病毒 网络药理学 作用机制
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连翘抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的机制分析
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作者 杨鸿玮 张玲珑 +5 位作者 黄鹤 李佳明 刘雪威 王建舫 董虹 周双海 《北京农学院学报》 2024年第4期70-75,共6页
【目的】用网络药理学方法探明连翘抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的潜在有效成分和作用机制。【方法】在TCMSP数据库收集连翘的潜在活性成分与作用靶点,在CTD数据库和GeneCards数据库收集PRRSV疾病靶点,获取两者的交集靶点后构建蛋白... 【目的】用网络药理学方法探明连翘抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的潜在有效成分和作用机制。【方法】在TCMSP数据库收集连翘的潜在活性成分与作用靶点,在CTD数据库和GeneCards数据库收集PRRSV疾病靶点,获取两者的交集靶点后构建蛋白-蛋白互作网络,并进行基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路分析,之后对筛选出的主要活性成分和核心靶点进行分子对接验证。【结果】连翘有24种潜在活性成分和243个潜在作用靶点,PRRSV疾病有3368个作用靶点,两者有122个交集靶点。GO功能富集得到890个条目,主要涉及基因表达的正向调控、对外源性刺激的反应、细胞外空间、胞外区等、酶的结合及相同蛋白的结合等。KEGG通路分析共获得176个条目,主要涉及磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、白介素-17(IL-17)和肿瘤坏死因子(TNF)等信号通路。进一步分析显示,连翘抗PRRSV的主要潜在活性成分有槲皮素、山奈酚、木犀草素及连翘酯苷A等,核心靶点有TNF、白细胞介素6、白细胞介素1β、肿瘤蛋白p53、基质金属蛋白酶9、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、前列腺素内过氧化物合成酶2和表皮生长因子受体。分子对接结果显示连翘的潜在主要活性成分与核心靶点之间均能实现良好结合。【结论】连翘抗PRRSV主要活性成分可能为槲皮素、山奈酚、木犀草素及连翘酯苷A,可能主要通过PI3K-Akt、MAPK、IL-17和TNF等信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 连翘 猪繁殖与呼吸综合征病毒 网络药理学 作用机制
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不同疫苗接种对商品猪群感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的影响
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作者 王江平 彭小红 +1 位作者 龙娉 李润成 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期57-63,共7页
为评价不同免疫方案对商品猪猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的防控效果,在一规模化猪场选取240头未经PRRS疫苗免疫且无PRRSV感染的断奶仔猪分成3组,组内包含15头耳牌跟踪猪。其中混合免疫组、弱毒疫苗组在25 d免疫PRRS经典毒株弱毒... 为评价不同免疫方案对商品猪猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的防控效果,在一规模化猪场选取240头未经PRRS疫苗免疫且无PRRSV感染的断奶仔猪分成3组,组内包含15头耳牌跟踪猪。其中混合免疫组、弱毒疫苗组在25 d免疫PRRS经典毒株弱毒疫苗,混合免疫组在50 d免疫PRRS经典毒株灭活疫苗;对照组不接种PRRS疫苗。试验前称重并记录各组耗料情况,于44 d(首免后20 d)或猪群出现PRRSV感染后每隔10 d采血监测PRRSV病毒血症以及抗体产生情况,试验后称取各组试验猪重量。结果显示,2个组猪在首免后抗体出现上升,于99 d(二免后49 d)猪群产生了较高的抗体水平,并持续到试验结束。而混合免疫组在二免后20 d,对照组在69 d监测到有猪开始出现PRRSV病毒血症,弱毒疫苗组于89 d发现有猪出现病毒血症。表明对试验猪免疫1次PRRS弱毒疫苗,可显著降低猪只感染PRRSV后的病毒血症几率,以及病毒血症持续时间;与未接种疫苗的猪相比,接种PRRS疫苗的猪在料肉比方面没有表现出明显的差异;接种该弱毒疫苗免疫25 d的基础上,加免1针灭活疫苗没有显示出明显优势。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 弱毒疫苗 灭活疫苗 抗体 病毒血症
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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GD2022株的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 邓可辉 王修武 +3 位作者 郭智轩 韩淑杰 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期34-41,共8页
为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-... 为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-1和PRRSV-2参考毒株序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,成功分离1株PRRSV-1,命名为GD2022株,其接种PAMs可引起典型的细胞病变,从出现病变的F5细胞中提取核酸,用PCR分段扩增出PRRSV-1 GD2022株10个基因组片段,分别连接到pCE2 TA/Blunt-Zero载体进行测序,拼接后获得PRRSV-1 GD2022株全基因组长15058个核苷酸(不包含polyA尾)。同源性分析显示,该分离株全基因组序列与PRRSV-1参考毒株(LV株)和PRRSV-2参考毒株(VR2333株)核苷酸序列同源性分别为87%和59.7%。遗传进化树分析显示,全基因序列和ORF5基因与国内外PRRSV-1毒株为同一进化分支,且与疫苗毒分支较远,推断分离株为1株PRRSV-1,属于基因亚型1。氨基酸序列比对分析显示,ORF3和ORF4重叠区域缺失3个核苷酸,导致GP3蛋白和GP4蛋白分别在第245和第65氨基酸位点缺失了1个氨基酸,且与LV株比对,GD2022毒株GP5的氨基酸序列在中和抗原表位第33氨基酸位点(D→A)出现点突变,在高变区第56氨基酸位点(D→A)和第63氨基酸位点(G→D)出现两处突变。重组分析显示,GD2022毒株未发生重组事件。成功分离鉴定1株PRRSV-1毒株,为国内PRRSV-1生物学特性研究提供了材料,也为了解广东省内PRRSV-1流行情况及变异特点提供参考依据。 展开更多
关键词 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 全基因组测序 遗传进化分析
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基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒快速检测方法的建立
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作者 于晶雪 韦珊珊 +9 位作者 覃绍敏 吴健敏 杨丽华 陈凤莲 许力士 秦树英 华俊 韦珏 方芳 刘金凤 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3237-3246,共10页
[目的]本研究将CRISPR/Cas12a系统与反转录重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)结合,拟建立一种基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)快速检测方法。[方法]... [目的]本研究将CRISPR/Cas12a系统与反转录重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)结合,拟建立一种基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)快速检测方法。[方法]分析不同基因型PRRSV全基因组序列,在3′-UTR端保守区设计重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)引物、crRNA及DNA报告底物分子,筛选RT-RAA最佳引物对。表达纯化AsCas12a蛋白,并以质粒为标准品,经RT-RAA扩增后,将产物加入CRISPR/Cas12a系统,建立PRRSV的CRISPR/Cas12a-RT-RAA检测方法,分别以PRRSV、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸为模板验证建立方法的特异性,以不同浓度的pMD18T-PRRSV为模板验证建立方法的敏感性。以5.62×10^(6)、5.62×10^(3)、5.62拷贝数/μL的质粒为模板进行重复性试验,最后进行临床效果评价,将所建立的方法与实时荧光定量逆转录PCR方法进行比较。[结果]本研究成功表达并纯化获得具有良好剪切活性的AsCas12a蛋白,蛋白分子质量大小为196 ku;所建立的CRISPR/Cas12a-RT-RAA方法的检测下限可达5.62拷贝/μL;该方法具有良好的特异性,可特异性检测出PRRSV,不能检出其他猪病病毒PCV2、PEDV、CSFV和PRV,并具有良好的重复性。应用该方法对121份猪组织样品进行检测,与实时荧光定量逆转录PCR的阳性符合率为93.75%,阴性符合率为99.05%,总符合率为99.17%。[结论]本研究成功建立基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的PRRSV快速检测方法,该方法特异性强、灵敏性高、重复性好且不依赖复杂设备,可在现场和基层实验室使用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 反转录重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA) CRISPR/Cas12系统
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2019—2022年天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因遗传演化分析 被引量:1
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作者 李文军 王欢欢 +3 位作者 邵笑 刘野 李文忠 孙英峰 《天津农学院学报》 CAS 2024年第1期71-77,共7页
为分析研究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传进化关系,对2019—2022年收集的20份天津地区PRRSV阳性样品进行ORF5克隆测序,以开展遗传变异研究和系统发育分析。遗... 为分析研究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传进化关系,对2019—2022年收集的20份天津地区PRRSV阳性样品进行ORF5克隆测序,以开展遗传变异研究和系统发育分析。遗传进化结果显示,20株毒株有11株属于谱系1.8,3株属于谱系1.5,5株属于谱系8,1株为谱系5,表明该地区PRRSV毒株流行呈现多样性。ORF5基因及推导氨基酸同源性和位点进行分析,其中11株谱系1.8毒株与NADC30毒株核苷酸同源性为91.2%~93.0%,氨基酸同源性为89.6%~93.5%;3株1.5谱系毒株与NADC34毒株核苷酸同源性为93.4%~96.5%,氨基酸同源性为92.5%~95.5%;4株分离株与HP-PRRSV毒株同源性最高,核苷酸同源性为90.0%~95.5%,氨基酸同源性为86.6%~91.0%;1株分离株与经典毒株CH-1a同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.0%和89.1%,1株谱系5毒株与VR2332毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为97.8%和96.0%。在关键的氨基酸位点上存在一定程度突变,这些关键突变很可能造成病毒致病力差异,并导致病毒逃逸发生。本研究对天津地区PRRS防控提供数据支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 遗传演化
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猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的炎症反应及抗炎药物研究进展
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作者 乔常宏 陈晶 +8 位作者 罗琴 刘宝玲 何振文 刘丁语 陈翔宇 王晓虎 王刚 白挨泉 蔡汝健 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3528-3539,共12页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的母猪严重繁殖障碍与仔猪呼吸困难的一种全球性疾病。感染PRRS... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的母猪严重繁殖障碍与仔猪呼吸困难的一种全球性疾病。感染PRRSV所引起疾病的严重程度与病毒载量和体内产生的细胞因子有关。PRRSV通过自身编码的结构蛋白和非结构蛋白激活炎症信号通路,导致大量细胞因子、趋化因子释放从而诱导炎症反应,但过度炎症反应特别是细胞因子风暴可能导致严重的组织损伤,导致病情加剧。因此通过抑制PRRSV引起的炎症应答可能是有效预防和控制PRRS的主要策略。目前常用的抗炎药物包括重组干扰素、非甾体抗炎药(NSAID)和类固醇等,传统的中药制剂也被证实对PRRS有一定治疗效果。然而PRRSV感染诱导炎症反应的具体条件、程度和机制以及抗炎药物作用尚未清楚。笔者拟对PRRSV诱导的炎症反应及其作用机制,以及相关抗炎药物的开发应用进行综述,以期为PRRS的预防和控制提供新的思路。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 炎症反应 细胞因子 抗炎药物
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like株的分离鉴定及基因组分析
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作者 毛丽萍 潘晓梅 +5 位作者 曹剑 李俊辉 周涛 侯红娟 郑学功 贺笋 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期11-17,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地区某猪场疑似患有PRRS的肺脏,接种至猪骨髓源巨噬细胞,分离获得1株PRRSV毒株,命名为XJYQ-2021。通过测序得到全基因组序列,对该毒株NSP2氨基酸序列缺失、ORF5及全基因组序列进行同源性、遗传进化及重组分析;利用间接免疫荧光试验进行鉴定,同时对第10、15、20代病毒液绘制生长曲线。结果显示,诱导分化的猪骨髓源巨噬细胞纯度高达90%以上,XJYQ-2021分离株在该细胞生长良好,可见明显细胞病变;通过生长曲线可观察到病毒含量随代次增加而递增,感染48 h左右病毒滴度达到峰值;该分离株基因组全长15030 nt,与美洲型NADC30同源性为90%;XJYQ-2021分离株与VR2332相比,NSP2氨基酸序列与美洲型NADC30具有相同不连续缺失(111+1+19);全基因重组分析结果表明,XJYQ-2021分离株是重组病毒,有一个重组片段,其中NADC30是亲本毒株,与JXA1之间发生重组获得。研究结果可为PRRSV的病毒分离提供优选细胞种类,同时掌握了新疆地区PRRSV流行毒株的遗传进化现状。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 猪骨髓源巨噬细胞 NSP2 重组分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组毒株GX-C4CG6致病性探究
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作者 王东东 李春梅 +5 位作者 罗小飞 叶敏慧 田小艳 欧阳海平 潘永飞 何晓明 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期104-109,共6页
为评估猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组毒株GX-C4CG6对小猪的致病性,选择PRRSV抗原、抗体均为阴性的小猪进行攻毒试验,然后通过攻毒后猪只体温变化及死亡情况、临床症状评分、血清抗体变化、攻毒后平均日增重、解剖后肺脏眼观及显微... 为评估猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组毒株GX-C4CG6对小猪的致病性,选择PRRSV抗原、抗体均为阴性的小猪进行攻毒试验,然后通过攻毒后猪只体温变化及死亡情况、临床症状评分、血清抗体变化、攻毒后平均日增重、解剖后肺脏眼观及显微病理变化、血清/肺脏病毒拷贝数等指标,对该毒株致病性进行评估。结果显示:GX-C4CG6毒株攻毒组有4头猪出现发烧,平均体温在攻毒后第12、13天大于40℃,最高体温达40.4℃,未出现死亡;被攻毒猪仅表现轻微减料,未表现出明显的呼吸障碍;攻毒后7 d,攻毒组猪只抗体开始转阳,至攻毒后14 d,攻毒组猪只ELISA抗体S/P平均值达最高;攻毒组在攻毒后第1周和对照组平均日增重差异不显著,至第2周差异显著(P<0.05),攻毒组显著低于对照组;被攻毒猪出现肺脏间质性肺炎,血清和肺脏病毒拷贝数浓度较高,分别达9.2×10^(5)和1.6×10^(7)copies/mL。结果表明,PRRSV GX-C4CG6毒株对小猪表现温和致病性。本研究为PRRSV重组毒株流行的控制提供了基础资料。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组毒株 致病性 小猪
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高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:8
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作者 安春霞 闫若潜 +4 位作者 吴志明 赵明军 赵雪丽 王东方 刘淑敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期66-70,共5页
为建立高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的HP-PRRSV与LP-PRRSV的Nsp2基因序列,分别设计了特异性的上游引物(HP-Upper-p1/LP-Upper-p2)和共用下游引物(Co-Lower-p3)。以H... 为建立高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的HP-PRRSV与LP-PRRSV的Nsp2基因序列,分别设计了特异性的上游引物(HP-Upper-p1/LP-Upper-p2)和共用下游引物(Co-Lower-p3)。以HP-PRRSV和LP-PRRSV混合物总RNA为反转录模板,建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV的二重RT-PCR检测方法;并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测。结果显示,本试验成功建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV二重RT-PCR检测方法,该方法灵敏度高,最低检出限均为100拷贝/μL;重复性好,特异性强,可特异性地扩增HP-PRRSV细胞培养物和LP-PRRSV疫苗毒,但对Marc-145细胞和其他8种病原对照扩增不出任何条带;自25份临床疑似PRRSV感染病料中共检测出了21份PRRSV阳性样品,其中HP-PRRSV阳性样品共计20份,LP-PRRSV阳性样品4份。结果表明,本研究成功建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV二重RT-PCR检测方法,可适用于高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重RT-PCR 检测 建立 应用
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立 被引量:3
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作者 陈茹 于晓璐 +6 位作者 高小博 薛春宜 宋长绪 邱杨 刘志玲 王莹 段燕喻 《动物医学进展》 北大核心 2016年第6期1-6,共6页
为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球... 为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均<10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 xMAP液相芯片
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shRNA抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1-R株在Marc-145细胞中复制及抗PRRSV细胞株的建立 被引量:1
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作者 李红梅 贺聪 +4 位作者 张茂 孟轩 张建峰 张健騑 郭鹏举 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期12-20,共9页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndr... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)JXA1-R株ORF1a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的保守区域为靶序列,利用pSilencer2.1-U6neo构建shRNA表达载体并转染Marc-145细胞。经实时荧光定量PCR、细胞病变及病毒滴度分析,结果显示,ORF1a-4-shRNA、ORF3-1-shRNA、ORF6-2-shRNA干扰质粒能明显抑制病毒基因的转录,并有效抑制PRRSV在Marc-145上的增殖,显著降低病毒滴度。最后筛选ORF6-2-shRNA表达质粒转染猪胎儿成纤维细胞,构建稳定转染细胞株,为抗PRRSV转基因猪的生产奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RNA干扰 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞株
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