猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球...猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。然而,PRRS至今仍没有安全有效的疫苗和药物进行防治。全面深入理解PRRSV生命周期可以为PRRS防控提供新的思路。因此,本文在简述PRRSV生命周期的基础上,重点对病毒侵入、复制与转录、翻译及翻译后修饰、组装等过程的研究进展进行综述,以期为PRRSV致病机制及防控研究提供参考。展开更多
为了净化福建省某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征疾病,该试验对临床发病的猪血清提取核酸后,通过荧光定量PCR、RT-PCR、ORF5基因测序等实验方法进行病原检测,使用DNAStar软件与14种参考序列进行ORF5比对确定毒株类型。采集发病猪血清及...为了净化福建省某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征疾病,该试验对临床发病的猪血清提取核酸后,通过荧光定量PCR、RT-PCR、ORF5基因测序等实验方法进行病原检测,使用DNAStar软件与14种参考序列进行ORF5比对确定毒株类型。采集发病猪血清及检测常见病原后,通过敏感性实验和建立标准曲线确定发病猪血清病毒量。将采集的血清按1∶50、1∶100和1∶150比例稀释后分3组对21头试验猪肌注,通过测量肌注后10 d内试验猪的体温和第30、60、90天PRRSV抗体变化后确定血清驯化最佳稀释比例。结果显示:本场分离毒株ORF5序列与参考序列比对后确定感染为JXA1样毒株。病猪血清病原检测PRRSV为阳性,PRV、CSFV、PCV2、ASFV、H1和H3亚型SIV、FMDV阴性。将病毒量为10^(5.4)拷贝/μL的猪血清稀释试验后确定最佳驯化稀释比例为1∶100。将后备母猪转移至新的生产基地、加强生物安全防控、闭群管理、检测淘汰等,同时跟踪母猪血清驯化后35、150、350和420 d PRRSV抗原和抗体,血清驯化后420 d母猪在第2胎时母猪和所产仔猪抗原抗体均为阴性。可见,通过敏感性实验和建立标准曲线确定血清病毒量及通过猪群试验确定血清稀释比例的方法对猪繁殖与呼吸综合征的净化是可行的。展开更多
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndr...猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)JXA1-R株ORF1a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的保守区域为靶序列,利用pSilencer2.1-U6neo构建shRNA表达载体并转染Marc-145细胞。经实时荧光定量PCR、细胞病变及病毒滴度分析,结果显示,ORF1a-4-shRNA、ORF3-1-shRNA、ORF6-2-shRNA干扰质粒能明显抑制病毒基因的转录,并有效抑制PRRSV在Marc-145上的增殖,显著降低病毒滴度。最后筛选ORF6-2-shRNA表达质粒转染猪胎儿成纤维细胞,构建稳定转染细胞株,为抗PRRSV转基因猪的生产奠定了基础。展开更多
文摘猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。然而,PRRS至今仍没有安全有效的疫苗和药物进行防治。全面深入理解PRRSV生命周期可以为PRRS防控提供新的思路。因此,本文在简述PRRSV生命周期的基础上,重点对病毒侵入、复制与转录、翻译及翻译后修饰、组装等过程的研究进展进行综述,以期为PRRSV致病机制及防控研究提供参考。
文摘为了净化福建省某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征疾病,该试验对临床发病的猪血清提取核酸后,通过荧光定量PCR、RT-PCR、ORF5基因测序等实验方法进行病原检测,使用DNAStar软件与14种参考序列进行ORF5比对确定毒株类型。采集发病猪血清及检测常见病原后,通过敏感性实验和建立标准曲线确定发病猪血清病毒量。将采集的血清按1∶50、1∶100和1∶150比例稀释后分3组对21头试验猪肌注,通过测量肌注后10 d内试验猪的体温和第30、60、90天PRRSV抗体变化后确定血清驯化最佳稀释比例。结果显示:本场分离毒株ORF5序列与参考序列比对后确定感染为JXA1样毒株。病猪血清病原检测PRRSV为阳性,PRV、CSFV、PCV2、ASFV、H1和H3亚型SIV、FMDV阴性。将病毒量为10^(5.4)拷贝/μL的猪血清稀释试验后确定最佳驯化稀释比例为1∶100。将后备母猪转移至新的生产基地、加强生物安全防控、闭群管理、检测淘汰等,同时跟踪母猪血清驯化后35、150、350和420 d PRRSV抗原和抗体,血清驯化后420 d母猪在第2胎时母猪和所产仔猪抗原抗体均为阴性。可见,通过敏感性实验和建立标准曲线确定血清病毒量及通过猪群试验确定血清稀释比例的方法对猪繁殖与呼吸综合征的净化是可行的。
文摘猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)JXA1-R株ORF1a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的保守区域为靶序列,利用pSilencer2.1-U6neo构建shRNA表达载体并转染Marc-145细胞。经实时荧光定量PCR、细胞病变及病毒滴度分析,结果显示,ORF1a-4-shRNA、ORF3-1-shRNA、ORF6-2-shRNA干扰质粒能明显抑制病毒基因的转录,并有效抑制PRRSV在Marc-145上的增殖,显著降低病毒滴度。最后筛选ORF6-2-shRNA表达质粒转染猪胎儿成纤维细胞,构建稳定转染细胞株,为抗PRRSV转基因猪的生产奠定了基础。
