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ROS积聚在黄曲霉毒素B_(1)诱导仔猪空肠上皮细胞凋亡中的作用 被引量:1
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作者 张曼 王艳慧 +5 位作者 李寒笑 刘恩赐 李庆豪 于瑞 罗琴 金鑫 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3857-3866,共10页
【目的】探究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))诱导细胞内活性氧(ROS)的产生对猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡的影响,为AFB_(1)致病机制提供理论依据。【方法】用0、20、40、60、80和100μg/mL AFB_(1)刺激细胞12 h,使用CCK-8试... 【目的】探究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))诱导细胞内活性氧(ROS)的产生对猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡的影响,为AFB_(1)致病机制提供理论依据。【方法】用0、20、40、60、80和100μg/mL AFB_(1)刺激细胞12 h,使用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,以确定AFB_(1)对IPEC-J2细胞的毒性作用;使用0、10、20、30μg/mL AFB_(1)刺激细胞后采用ROS免疫荧光分析法检测细胞内ROS产生情况;使用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测细胞内凋亡通路相关的关键因子mRNA和蛋白表达情况,并采用ROS抑制剂N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理细胞后检测AFB_(1)对细胞内凋亡因子表达的影响情况。【结果】0~20μg/mL AFB_(1)对细胞活性无显著影响(P>0.05),但随着AFB_(1)浓度升高,与空白对照组相比,IPEC-J2细胞活性显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01)。ROS免疫荧光分析结果显示,ROS含量与AFB_(1)浓度呈高度依赖性,且随着AFB_(1)浓度的升高,与空白对照组相比,细胞内ROS含量显著或极显著增加(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,当AFB_(1)浓度为20μg/mL时Caspase-3 mRNA和蛋白表达量均显著高于空白对照组(P<0.05);当AFB_(1)浓度为30μg/mL时Caspase-3和Bax/Bcl-2 mRNA和蛋白表达量显著高于空白对照组(P<0.05),而Bax和Bcl-2蛋白表达量显著低于空白对照组(P<0.05);与AFB_(1)单独处理组相比,使用ROS抑制剂NAC预处理细胞后加入AFB_(1),凋亡因子呈现出不同程度的显著下降趋势(P<0.05)。【结论】AFB_(1)可促进IPEC-J2细胞凋亡因子Bax、Bcl-2和Caspase-3的上调,并且这一过程与细胞内ROS的积累有关。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B_(1) 活性氧 细胞凋亡 猪空肠上皮细胞
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乳酸锌对猪空肠上皮细胞IPEC-J2增殖及相关调控基因mRNA表达的影响 被引量:10
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作者 韩国全 余冰 +6 位作者 陈代文 相振田 亓宏伟 陈洪 毛倩 毛湘冰 黄志清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期740-747,共8页
旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4mRNA表达的影响。用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200mg.L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化;用实时荧光定量RT-PCR方... 旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4mRNA表达的影响。用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200mg.L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化;用实时荧光定量RT-PCR方法检测ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1及ZIP4mRNA表达,以TBPmRNA的表达水平作为内参对照。在细胞培养前36h,乳酸锌对IPEC-J2细胞基本没有影响,随锌浓度递增细胞增殖幅度升高;乳酸锌处理IPEC-J2细胞后,ZnT2、DMT1、IREG-1及MT1mRNA表达随锌浓度增高而升高,ZIP4mRNA表达则随锌浓度增高而降低。添加乳酸锌可以促进IPEC-J2细胞增殖,上调ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1mRNA表达,下调ZIP4mRNA表达。 展开更多
关键词 乳酸锌 猪空肠上皮细胞IPEC-J2 MRNA表达 相关调控基因
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壳寡糖对脂多糖诱导猪空肠上皮细胞氧化损伤的作用 被引量:11
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作者 肖定福 钟佳 +1 位作者 刘进辉 李文平 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期2090-2095,共6页
本试验旨在通过脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化应激模型,探讨壳寡糖(COS)的抗氧化作用效果。采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS和COS对IPEC-J2作用12、24、48 h后细胞增殖活性的变化;选择适宜浓度LPS(1.0μg/m L)和COS(200μ... 本试验旨在通过脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化应激模型,探讨壳寡糖(COS)的抗氧化作用效果。采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS和COS对IPEC-J2作用12、24、48 h后细胞增殖活性的变化;选择适宜浓度LPS(1.0μg/m L)和COS(200μg/m L)作用于IPEC-J2,分为对照组、LPS组、COS组、LPS+COS组。采用Western Blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果表明:1.0μg/m L的LPS对IPEC-J2作用24 h,细胞增殖的抑制率为41.6%,为造模的最适浓度和作用时间;COS在一定浓度范围内对IPEC-J2有增殖作用,其浓度为200μg/m L时效果最佳,作用时间为24 h时,细胞增殖率达到126.3%。LPS+COS组较对照组的SOD、CAT活性和M DA含量差异不显著(P>0.05),Nrf2和HO-1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);LPS+COS组较LPS组的Nrf2蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),HO-1有升高趋势,但差异不显著(P>0.05),SOD、CAT活性显著升高(P<0.05),M DA含量显著降低(P<0.05)。由此可见,LPS诱导IPEC-J2氧化应激,而COS可进一步促进Nrf2和HO-1蛋白的高表达,并提高抗氧化酶的活性,降低氧化产物含量,从而增强细胞对氧化应激的抵抗力,起到保护作用。 展开更多
关键词 壳寡糖 脂多糖 猪空肠上皮细胞 氧化应激 抗氧化作用
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苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响 被引量:4
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作者 韩国全 余冰 +4 位作者 陈代文 相振田 陈渝 陈洪 毛倩 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期487-496,共10页
本研究旨在探讨苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒(PRV)猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响。试验选用IPEC-J2细胞为细胞模型,分为4个处理,对照组为未经PRV感染、苏氨酸浓度53.45 mg/L,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,均经PRV感染,苏氨酸浓度分... 本研究旨在探讨苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒(PRV)猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响。试验选用IPEC-J2细胞为细胞模型,分为4个处理,对照组为未经PRV感染、苏氨酸浓度53.45 mg/L,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,均经PRV感染,苏氨酸浓度分别为53.45、106.90、160.35 mg/L,每组3个重复,每个重复4孔。37℃、5%CO2培养后1、6、12、24 h每组取1个重复采集细胞,用实时荧光定量PCR方法检测白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达量。结果表明:1)PRV感染极显著降低了IL-1βmRNA表达量(P=0.001),苏氨酸水平(P=0.830)、时间与苏氨酸水平交互作用(P=0.249)的影响均不显著;2)PRV感染对IL-6 mRNA表达量影响不显著(P=0.162),随苏氨酸水平升高,IL-6 mRNA表达量极显著地先升高后降低(P=0.002),时间与苏氨酸水平交互作用的影响显著(P=0.012);3)PRV感染极显著提高了IL-15 mRNA表达量(P=0.000),提高苏氨酸水平极显著提高了IL-15 mRNA表达量(P=0.000),时间与苏氨酸水平交互作用的影响亦极显著(P=0.000);4)PRV感染极显著提高了TNF-αmRNA表达量(P=0.000),苏氨酸水平(P=0.113)、时间与苏氨酸水平交互作用(P=0.195)的影响均不显著;5)PRV感染极显著提高了TGF-β1 mRNA表达量(P=0.000),时间与苏氨酸水平交互作用的影响显著(P=0.015),苏氨酸水平的影响不显著(P=0.055)。结果提示,补充苏氨酸对感染PRV的IPEC-J2细胞先天性免疫功能具有分子表达水平的调控作用,总体上能够抑制IL-1β、TNF-α、TGF-β1基因表达,加强IL-6、IL-15基因表达,但影响具有时间效应。 展开更多
关键词 苏氨酸 猪空肠上皮细胞 伪狂犬病毒 免疫相关基因
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T-2毒素激活活性氧/核转录因子-κB信号通路诱导猪空肠上皮细胞发生炎性反应 被引量:4
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作者 康瑞芬 王猛 +2 位作者 沈家鲲 金晓明 李春梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期474-483,共10页
本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型细胞,探讨T-2毒素诱导IPEC-J2炎性反应的影响及相关作用机制。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定细胞活力,选择适宜的T-2毒素和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)浓度。试验分为4个组,分别为对照组、NAC组(4.... 本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型细胞,探讨T-2毒素诱导IPEC-J2炎性反应的影响及相关作用机制。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定细胞活力,选择适宜的T-2毒素和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)浓度。试验分为4个组,分别为对照组、NAC组(4.0 mmol/L NAC)、T-2组(4.0 ng/mL T-2毒素)和T-2+NAC组(4.0 ng/mL T-2毒素+4.0 mmol/L NAC),处理12 h后测定各组IPEC-J2中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、活性氧(ROS)水平、细胞炎症相关基因和核转录因子-κB(NF-κB)的相对表达量。结果表明:1)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中CAT、T-SOD活性极显著降低(P<0.01),IPEC-J2中MDA含量和ROS水平极显著升高(P<0.01)。与T-2组相比,T-2+NAC组IPEC-J2中CAT和T-SOD活性极显著升高(P<0.01),IPEC-J2中MDA含量和ROS水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。2)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(P<0.05)、白细胞介素-6(IL-6)(P<0.01)、白细胞介素-10(IL-10)(P>0.05)的mRNA相对表达量升高。3)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中NF-κB蛋白相对表达量极显著升高(P<0.01)。与T-2组相比,T-2+NAC组IPEC-J2中NF-κB蛋白相对表达量极显著降低(P<0.01)。由此可见,T-2毒素通过诱导IPEC-J2产生过量的ROS,促进炎症相关基因及NF-κB蛋白的表达,导致IPEC-J2发生炎性反应。 展开更多
关键词 T-2毒素 猪空肠上皮细胞 活性氧 炎性反应
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谷氨酰胺对呕吐毒素诱导IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响 被引量:7
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作者 李若楠 康瑞芬 +3 位作者 沈丹 戴鹏远 唐倩 李春梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期740-747,共8页
[目的]本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,探讨谷氨酰胺(Gln)对呕吐毒素(DON)诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响。[方法]通过MTT方法测定细胞活力来选择适宜的Gln浓度,以不添加Gln和DON的细胞为空白对照组,试验组分别为0.75 mmol&... [目的]本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,探讨谷氨酰胺(Gln)对呕吐毒素(DON)诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响。[方法]通过MTT方法测定细胞活力来选择适宜的Gln浓度,以不添加Gln和DON的细胞为空白对照组,试验组分别为0.75 mmol·L^-1 Gln组,2.0μg·mL^-1 DON组和2.0μg·mL^-1 DON+0.75 mmol·L^-1 Gln组,处理24 h后测定各组细胞凋亡率、活性氧自由基(ROS)及细胞凋亡和炎症相关基因和蛋白的表达水平。[结果]与对照组相比,DON处理24 h细胞凋亡比例和ROS含量(ROS荧光密度/细胞总数)显著升高(P<0.01);与DON组相比,DON+Gln组显著降低细胞的凋亡比例和ROS含量(P<0.01)。与对照组相比,DON组上调IPEC-J2细胞白细胞介素1β(IL^-1β)、白细胞介素6(IL-6)、环氧合酶2(COX-2)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)炎症相关基因和Caspase-3及Caspase-8凋亡相关基因的表达水平;与DON组相比,DON+Gln组下调IPEC-J2细胞IL^-1β、COX-2、Caspase-3、Caspase-8、BAK和Bcl-2基因的表达水平。蛋白免疫荧光结果显示,与对照组相比,DON组上调IPEC-J2细胞Caspase-3,核转录因子κB(NF-κB)和磷酸化核转录因子κB(phospho-NF-κB)蛋白的表达,而添加Gln后(DON+Gln组)下调了相关蛋白的表达。[结论]Gln通过清除DON诱导的IPEC-J2细胞中过量的ROS及调节炎症和凋亡相关基因及蛋白的表达量来缓解由DON引起的肠道上皮细胞损伤。 展开更多
关键词 谷氨酰胺 呕吐毒素 猪空肠上皮细胞 炎症 凋亡
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