猪I类白细胞抗原单克隆抗体的制备及其在非洲猪瘟病毒感染机制研究中的初步应用

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作者 王可欣 Weldu Tesfagaber +7 位作者 王婉 尹丽 孔惠 张振江 李芳 高彩霞 步志高 赵东明 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期90-95,共6页

猪I类白细胞抗原(SLA I)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子。在机体内,SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体... 猪I类白细胞抗原(SLA I)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子。在机体内,SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体(MAb),本研究将SLA I-1*04:01等位基因胞外区序列与麦芽糖结合蛋白(MBP)序列连接,在大肠杆菌原核表达系统中表达,获得可溶性重组蛋白MBP-SLA I。经亲和层析纯化后,采用MBP-SLA I免疫BALB/c小鼠3次,采用ELISA检测小鼠血清抗体水平,对血清抗体效价在1:10 000以上的小鼠进一步冲击免疫后,分离小鼠脾脏B淋巴细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合。采用ELISA方法筛选阳性的杂交瘤细胞进行3次克隆纯化,最终筛选得到稳定分泌SLA I抗体的杂交瘤细胞株MAb-1A11。经ELISA检测纯化后的MAb-1A11效价可达1:3 200,经小鼠MAb抗体亚类鉴定试剂盒鉴定其重链为IgG2b,轻链为κ。采用western blot检测该抗体的特异性,结果显示,MAb-1A11能够识别猪肺泡巨噬细胞(PAM)表达的内源性SLA I,在42 ku处出特异性条带,而对HEK293T细胞中表达的同源物人白细胞抗原无交叉识别作用。利用MAb-1A11为一抗,采用western blot进一步检测非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/18-6GD株感染的PAM中SLA I的表达水平,结果显示,随着ASFV感染时间的延长,SLA I表达水平出现轻微下降。本研究制备了SLA I的MAb,并初步将其应用于ASFV感染机制的研究中,为深入了解SLA I所受调控的机制提供了可靠工具。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原I 单克隆抗体 WESTERNBLOT 非洲猪瘟病毒

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猪白细胞分化抗原32B的原核表达与单克隆抗体制备

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作者 赵治钤 郑丹阳 +1 位作者 赵谜 穆杨 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期32-38,共7页

为制备猪白细胞分化抗原32B(CD32B)的单克隆抗体(mAb),以猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆猪CD32B基因,将不含信号肽编码序列的猪CD32B胞外区基因片段插入pET-28a(+)载体构建重组表达质粒,用大肠埃希氏菌表达系统表达猪C... 为制备猪白细胞分化抗原32B(CD32B)的单克隆抗体(mAb),以猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆猪CD32B基因,将不含信号肽编码序列的猪CD32B胞外区基因片段插入pET-28a(+)载体构建重组表达质粒,用大肠埃希氏菌表达系统表达猪CD32B重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的目的蛋白后大量表达并用镍柱纯化。用纯化的猪CD32B重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用细胞融合技术制备猪CD32B的mAb,并对获得的mAb进行鉴定。结果获得了全长894 bp的猪CD32B基因和537 bp的截短基因,构建的重组质粒pET-28a-pCD32B转入BL21(DE3)感受态细胞经过IPTG诱导,获得了约25 ku的猪CD32B重组蛋白,多轮亚克隆筛选后获得了1株能稳定分泌猪CD32B mAb的杂交瘤细胞3E12,该mAb重链为IgG 2a,轻链为κ型,不仅能与原核表达的猪CD32B重组蛋白结合,IFA结果显示该mAb也能与HEK 293T细胞表达的全长猪CD32B结合,为探究CD32B在猪免疫抑制性疾病中的作用积累了材料。 展开更多

关键词 猪白细胞分化抗原32B 原核表达 蛋白纯化 细胞融合 单克隆抗体

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猪白细胞Ⅱ类抗原基因多态性研究进展 被引量：18

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作者 周波 王林云 +1 位作者 谈永松 张似青 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期611-614,共4页

本文对SLAⅡ类基因的染色体图谱定位、分子结构、基因分型及其多态性的研究进展作了介绍。重点介绍了SLAⅡ类基因的RFLP基因分型及其多态性研究。猪的主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原基因座位存在不同程度的等位基因多态性。RFLP技术是一... 本文对SLAⅡ类基因的染色体图谱定位、分子结构、基因分型及其多态性的研究进展作了介绍。重点介绍了SLAⅡ类基因的RFLP基因分型及其多态性研究。猪的主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原基因座位存在不同程度的等位基因多态性。RFLP技术是一种简便而快捷的SLAⅡ类等位基因分型方法。SLAⅡ类基因的多态性和抗原肽结合位点密切相关,这些位点能结合处理过的抗原,然后递呈给T细胞。另外,在编码β1链的SLA DRB1基因和SLA DQB基因中有4个富含GC序列区。 展开更多

关键词 猪 白细胞Ⅱ类抗原基因 多态性 RFLP

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甘肃合作猪白细胞抗原经典Ⅱ类分子DR基因克隆及生物信息学分析 被引量：5

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作者 莫斯科 房永祥 +1 位作者 冯海燕 景志忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1662-1668,共7页

为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登... 为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登录号分别为FJ905823和FJ9058258),再用NCBI中的BLAST和ExPASy等相关软件进行生物信息学分析。发现在猪-人异种移植中,近亲繁殖的合作猪种在与人类主要组织相容性复合体遗传基因水平相似性方面有一定优势,也可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原 合作猪 RT-PCR 生物信息学

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五指山猪白细胞抗原血清学研究 被引量：5

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作者 韦习会 王林云 +3 位作者 徐银学 冯书堂 蔡正华 王端云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期199-206,共8页

用２４支标准血清对２５头五指山猪进行白细胞抗原的血清学分型，根据标准微量淋巴细胞毒试验结果，按国际ＳＬＡ－Ａ、Ｃ、Ｂ抗原血清学分型标准，共检出２１种单倍型，另有８条、占１６％的单倍型不能确定。在所检出的单倍型中，Ｈ４... 用２４支标准血清对２５头五指山猪进行白细胞抗原的血清学分型，根据标准微量淋巴细胞毒试验结果，按国际ＳＬＡ－Ａ、Ｃ、Ｂ抗原血清学分型标准，共检出２１种单倍型，另有８条、占１６％的单倍型不能确定。在所检出的单倍型中，Ｈ４、Ｈ３２含量较高，频率分别达０．１２和０．１０；Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１７、Ｈ２３、Ｈ３５、Ｈ４２、Ｈ５３等单倍型为中等频率分布，频率从０．０４～０．０８；Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ６、Ｈ８、Ｈ２０、Ｈ２２、Ｈ２９、Ｈ３０、Ｈ３３、Ｈ３４、Ｈ６０等单倍型为低频率分布，频率均为０．０２。在２６号猪的白细胞抗原中，其Ｃ位点出现Ｗ２抗原、Ｂ位点出现Ｗ６抗原，这种组成在其它品种猪的白细胞抗原中没有出现。 展开更多

关键词 猪 白细胞抗原 血清学分型

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脂质体包裹猪白细胞介素6基因对猪带绦虫抗原基因免疫小鼠的影响 被引量：8

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作者 龙章富 高荣 +4 位作者 孟民杰 武梅 郑勇 刘昆 刘世贵 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第3期25-29,共5页

比较研究了BALb/c小鼠分别肌肉注射猪带绦虫抗原基因VTS76、猪白细胞介素 6(VPIL 6)联合VTS76及其阳离子脂质体包裹质粒等 5个处理的免疫效应。结果表明 ,VTS76联合VPIL 6共注射小鼠的IgG含量和抗体滴度 ,脾细胞增殖反应和IL 2诱生活性... 比较研究了BALb/c小鼠分别肌肉注射猪带绦虫抗原基因VTS76、猪白细胞介素 6(VPIL 6)联合VTS76及其阳离子脂质体包裹质粒等 5个处理的免疫效应。结果表明 ,VTS76联合VPIL 6共注射小鼠的IgG含量和抗体滴度 ,脾细胞增殖反应和IL 2诱生活性以及免疫细胞数量 ,均比注射VTS76的显著增强。经阳离子脂质体包裹的VTS76+VPIL 6在减少质粒用量 80 %时 ,免疫应答水平仍显著高于脂质体包裹VTS76,且明显高于VTS76+VPIL 6,证明VPIL 6能显著增强基因疫苗 (VTS76)免疫小鼠的免疫应答。 展开更多

关键词 小鼠 猪 白细胞介素-6基因 阳离子脂质体 猪带绦虫抗原基因 免疫应答 免疫增强剂 疫苗

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猪白细胞抗原和生殖激素水平对产仔性能的影响 被引量：6

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作者 季海峰 刘彦 +2 位作者 莫余忠 高羽军 张春英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期128-132,共5页

对 2 32头经产母猪进行了SLA分型、生殖激素水平和产仔性状测定 ,其中 ,D型母猪的产仔性能显著高于其他类型 ,表明SLA分型可以成为猪繁殖性能的辅助选择遗传标记 ;在母猪泌乳阶段 ,促黄体素 (LH)　雌激素 (E2 )和孕酮 (P4 )的水平都较... 对 2 32头经产母猪进行了SLA分型、生殖激素水平和产仔性状测定 ,其中 ,D型母猪的产仔性能显著高于其他类型 ,表明SLA分型可以成为猪繁殖性能的辅助选择遗传标记 ;在母猪泌乳阶段 ,促黄体素 (LH)　雌激素 (E2 )和孕酮 (P4 )的水平都较低 ,在配种阶段 ,雌激素分泌达到峰值 ,在怀孕 15d时 ,促黄体素和孕酮的分泌达到峰值 ;高产、中产和低产母猪在各生理阶段的激素水平差异不显著 。 展开更多

关键词 猪 白细胞抗原 生殖激素 产仔性能

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广西巴马小型猪白细胞抗原经典Ⅱ类基因克隆及生物信息学分析 被引量：5

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作者 刘子展 王在贵 +4 位作者 李奎 郭亚芬 王爱德 张玉琼 杨述林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1353-1359,共7页

为探讨广西巴马小型猪SLA经典Ⅱ类基因分子结构特征及其在猪-人异种器官移植研究中的应用前景,本研究采集4头广西巴马小型猪的耳组织,经抽提RNA和反转录得到cDNA,通过PCR扩增,对SLA经典Ⅱ类基因(SLA-DRA、SLA-DRB1、SLA-DQA、SLA-DQB1)... 为探讨广西巴马小型猪SLA经典Ⅱ类基因分子结构特征及其在猪-人异种器官移植研究中的应用前景,本研究采集4头广西巴马小型猪的耳组织,经抽提RNA和反转录得到cDNA,通过PCR扩增,对SLA经典Ⅱ类基因(SLA-DRA、SLA-DRB1、SLA-DQA、SLA-DQB1)纯化和克隆,进行双向测序。结果,在4个SLA经典Ⅱ类座位中得到基因序列共8条,利用NCBI服务器中BLAST分析发现,8条基因序列中5条为已知的等位基因,另3条为新的等位基因。通过核苷酸和氨基酸水平的同源性比对,构建亲缘进化树,分析发现,广西巴马小型猪具有与人同源性较高的MHC遗传结构,显示该猪种在人-猪异种移植领域中有着潜在的利用价值。 展开更多

关键词 主要组织相容性复合体 猪白细胞抗原 异种移植 小型猪

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猪白细胞抗原复合体与胴体瘦肉率关系的初步研究 被引量：3

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作者 王林云 孔令勇 +2 位作者 何正东 黄瑞华 王伦雄 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期50-53,共4页

对33头长白猪的白细胞抗原复合体(SLA)和胴体瘦肉率之间的关系进行了研究。单因子最小二乘方差分析表明,血清单倍型H8(3.19)、H23(2.89)、H12(2.63)、H22(1.96)和H34(1.74)等对胴体瘦肉率表现出正效应值,而H1(-4.33)、H19(-4.28)、H33(-... 对33头长白猪的白细胞抗原复合体(SLA)和胴体瘦肉率之间的关系进行了研究。单因子最小二乘方差分析表明,血清单倍型H8(3.19)、H23(2.89)、H12(2.63)、H22(1.96)和H34(1.74)等对胴体瘦肉率表现出正效应值,而H1(-4.33)、H19(-4.28)、H33(-2.15)和H3(-1.57)等表现出负效应值。Q检验结果,具有单倍型H12、H22的肉猪其胴体瘦肉率高于具有单倍型H1、H19、H33、H3的肉猪(P<0.01),具有单倍型H8、H23、H34和H42的肉猪其胴体瘦肉率高于具有单倍型H1、H19和H33的肉猪(P<0.05)。 展开更多

关键词 猪 白细胞 抗原复合体 瘦肉率

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猪白细胞抗原与产仔性能的关系 被引量：9

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作者 王林云 刘根桃 李汝敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期308-312,共5页

采用微量淋巴细胞毒试验对９０头经产母猪（二花脸６５头，大约克猪２５头）进行了血清学分型，计算了单倍型在两品种中的分布频率，运用单因子和双因子最小二乘分析法分析了ＳＬＡ单倍型与产活仔数之间的相关性。结果发现：（１）不同... 采用微量淋巴细胞毒试验对９０头经产母猪（二花脸６５头，大约克猪２５头）进行了血清学分型，计算了单倍型在两品种中的分布频率，运用单因子和双因子最小二乘分析法分析了ＳＬＡ单倍型与产活仔数之间的相关性。结果发现：（１）不同单倍型对猪产活仔数影响有明显的差异，Ｈ６、Ｈ１０有明显的正效应，Ｈ２、Ｈ１２、Ｈ３１有负效应。（２）单倍型对产活仔数影响在品种间有差异，在太湖猪中Ｈ６、Ｈ７、Ｈ１０和Ｈ２３几种单倍型频率与大约克猪不同，且二花脸猪的Ｈ６（＋０．７７）、Ｈ７（＋０．３６）单倍型对产活仔数有较大的正效应值。 展开更多

关键词 猪 白细胞抗原 产仔数 成活率

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CpG序列和猪白细胞介素6基因转染表达对猪囊尾蚴基因疫苗免疫影响的研究 被引量：6

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作者 李江凌 高荣 +9 位作者 武梅 孟明杰 龙章富 唐漫书 沈翼 谢鸿观 王丽焕 巫雪艳 殷雪 刘世贵 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第6期26-30,共5页

以猪囊尾蚴VTS76抗原基因和质粒VPIL 6、pUCl8 CpG免疫接种小鼠 ,检测了小鼠的体液及细胞免疫反应。结果发现 ,VPIL 6或pUC CpG与VTS76共同免疫小鼠的特异性抗体滴度、IgG含量、淋巴细胞白细胞介素 2诱生活性、脾细胞增殖反应和血液免... 以猪囊尾蚴VTS76抗原基因和质粒VPIL 6、pUCl8 CpG免疫接种小鼠 ,检测了小鼠的体液及细胞免疫反应。结果发现 ,VPIL 6或pUC CpG与VTS76共同免疫小鼠的特异性抗体滴度、IgG含量、淋巴细胞白细胞介素 2诱生活性、脾细胞增殖反应和血液免疫细胞数量显著高于VTS76免疫组和对照组。证明VPIL 6和CpG序列能显著增强动物对DNA疫苗的细胞和体液免疫反应 。 展开更多

关键词 疫苗 免疫 免疫应答 猪白细胞介素-6基因 CPG序列 猪囊尾蚴 抗原基因 免疫增强剂 基因表达

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湖南沙子岭猪SLA-DR基因克隆及生物信息学分析 被引量：8

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作者 唐医亚 邢晓为 +2 位作者 薛立群 黄生强 王维 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1491-1496,共6页

为了克隆湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,分析SLA基因特性和抗原多态性,评价湖南沙子岭猪在异种移植中的应用前景奠定基础。应用RT-PCR分别扩增湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,鉴定后克隆到PUCm-T载体并进行测序,用NCBI中的BLAST... 为了克隆湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,分析SLA基因特性和抗原多态性,评价湖南沙子岭猪在异种移植中的应用前景奠定基础。应用RT-PCR分别扩增湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,鉴定后克隆到PUCm-T载体并进行测序,用NCBI中的BLAST和ExPASY中相关软件进行生物信息学分析。得到的湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因特异性基因片段,大小分别为1 177 bp和909 bp。生物信息学分析发现,所扩增的SLA-DRA和SLA-DRB基因片段均包含完整的开放阅读框,分别编码252和266个氨基酸残基。将湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因在GenBank登录,登录号分别为EF143987和EF143988。同源性分析发现,湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB与人类相应的DRA、DRB相比,核苷酸序列同源性分别为83%和83%,编码氨基酸同源性分别为83%和79%。与GenBank登录的其他猪种相比,SLA-DRA基因同源性最高可达100%,而SLA-DRB基因具有多态性。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原 沙子岭猪 基因克隆 异种移植

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托佩克猪SLA-2与β2m复合体的构建 被引量：6

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作者 陈兆华 周巧妮 +3 位作者 刘昌华 刘腾飞 赵德 高凤山 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第11期10-13,共4页

以托佩克猪重链基因SLA-2和轻链基因β2m为研究对象,体外通过剪接重叠延伸PCR(spli-cing overlap extension PCR,SOE-PCR)技术重构复合体,并将复合体基因链克隆入p2X表达质粒,导入受体菌TB1并进行表达。结果显示,体外重构的托佩克猪SLA-... 以托佩克猪重链基因SLA-2和轻链基因β2m为研究对象,体外通过剪接重叠延伸PCR(spli-cing overlap extension PCR,SOE-PCR)技术重构复合体,并将复合体基因链克隆入p2X表达质粒,导入受体菌TB1并进行表达。结果显示,体外重构的托佩克猪SLA-2与β2m复合体基因以融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m的形式表达,大小为84.1ku。为进一步在体外进行该品系猪复合体与多肽结合研究奠定了基础。 展开更多

关键词 托佩克猪 猪白细胞抗原2 Β2M 复合体

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烟台黑猪SLA-2-YTH原核表达载体的构建及表达 被引量：4

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作者 姜巍 董宋鹏 +3 位作者 李子彬 姜龙 冯磊 高凤山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期85-89,共5页

为构建烟台黑猪SLA-2-YTH基因原核表达载体,本研究设计引物PCR扩增SLA-2-YTH胞外区,将其克隆至pMD?19-T Simple载体,筛选阳性克隆。阳性克隆经酶切后,进一步与表达载体pET-28a(+)连接,转化BL21(Rosseta)感受态细胞并进行诱导表达,SDS-P... 为构建烟台黑猪SLA-2-YTH基因原核表达载体,本研究设计引物PCR扩增SLA-2-YTH胞外区,将其克隆至pMD?19-T Simple载体,筛选阳性克隆。阳性克隆经酶切后,进一步与表达载体pET-28a(+)连接,转化BL21(Rosseta)感受态细胞并进行诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,SLA-2-YTH胞外区亚克隆大小为834bp,酶切鉴定证实其成功插入pET-28a(+)表达载体。SDS-PAGE结果显示,SLA-2-YTH基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小约31.0ku,与预期结果相符,优化后蛋白相对表达量达25%以上。本研究成功构建了烟台黑猪SLA-2-YTH原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后进一步的结构和功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 烟台黑猪 猪白细胞抗原 原核表达 载体

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猪5个群体SLA微卫星遗传多样性 被引量：1

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作者 于辉 刘荣辉 +3 位作者 李华 左启祯 李岩 吴珍芳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1427-1433,共7页

文章旨在比较广东地方猪、华南野猪(S.s.chirodontus)和引入品种白细胞抗原复合体(Swine leukocyteantigen complex,SLA)的遗传多样性,为猪的抗病选育提供理论依据。在SLA区域内选取18个多态性丰富的微卫星(SLA-MS),分别对皮特兰、杜洛... 文章旨在比较广东地方猪、华南野猪(S.s.chirodontus)和引入品种白细胞抗原复合体(Swine leukocyteantigen complex,SLA)的遗传多样性,为猪的抗病选育提供理论依据。在SLA区域内选取18个多态性丰富的微卫星(SLA-MS),分别对皮特兰、杜洛克、大花白、蓝塘猪以及华南野猪进行遗传分型。结果表明,SLA不同区域平均遗传多样性高低依次为SLAⅡ(He=0.628,PIC=0.581)>SLAⅠ(He=0.530,PIC=0.474)>SLAⅢ(He=0.526,PIC=0.458);5个群体间分子多样性指数(MDI)依次为华南野猪(0.716)>蓝塘猪(0.614)>大花白(0.559)>皮特兰(0.550)>杜洛克(0.507)。总体看来,SLA-MS的遗传多样性高低依次为华南野猪>广东地方猪>引入品种。基于Garza-Williamson指数(GWI)分析,杜洛克和大花白相较于华南野猪瓶颈效应严重;遗传距离分析表明蓝塘猪和华南野猪首先聚为一类,然后与大花白聚为一大类,而皮特兰和杜洛克则单独聚为一支。文章为广东地方猪种质资源的保护、抗病选育和配套系的生产提供了理论基础。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原复合体 微卫星 遗传多样性

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荷包猪SLA-1重链四聚体前体链的构建及表达研究 被引量：1

16

作者 高花 郭杨 +2 位作者 翟晓鑫 张宗辉 高凤山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3453-3458,共6页

试验旨在构建荷包猪猪白细胞抗原1(swine lymphocyte antigen 1,SLA-1)重链四聚体前体链并研究其在表达载体pET-21a(+)中蛋白的表达情况。以SLA-1全基因序列为模板,结合表达载体的特点设计引物,利用PCR扩增技术在SLA-1-HB01胞外区序列C... 试验旨在构建荷包猪猪白细胞抗原1(swine lymphocyte antigen 1,SLA-1)重链四聚体前体链并研究其在表达载体pET-21a(+)中蛋白的表达情况。以SLA-1全基因序列为模板,结合表达载体的特点设计引物,利用PCR扩增技术在SLA-1-HB01胞外区序列C-末端加载上可生物素酰化序列(BirA substrate peptide,BSP)。将PCR扩增产物SLA-1-HB01-BSP克隆到pEASY T1载体上,筛选出阳性克隆菌SLA-1-HB01-BSP/pEASY T1,经双酶切后进一步与表达载体pET-21a(+)连接,再转化到E.coli BL21感受态细胞中构建pET-21a(+)/SLA-1-HB01-BSP重组表达菌,通过IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE检测蛋白的大小及表达情况,提取包涵体检测蛋白的纯度。PCR扩增结果显示,SLA-1-HB01-BSP大小为898bp,与理论值相符,扩增片段成功克隆至pEASY T1载体构建克隆菌,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选及测序,成功获得阳性克隆菌株SLA-1-HB01-BSP/pEASY T1,插入的目的基因片段大小为876bp。阳性克隆菌株与pET-21a(+)表达载体经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后进行连接,转化E coli BL21感受态细胞后获得pET-21a(+)/SLA-1-HB01-BSP重组表达菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小为31.4ku。进一步检测分析发现,目的蛋白以包涵体形式存在,且蛋白纯度达到80%以上。本研究成功构建了荷包猪SLA-1-HB01重链四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达体系,为下一步进行猪SLAⅠ类分子四聚体的检测奠定基础。 展开更多

关键词 荷包猪 猪白细胞抗原1 四聚体 可生物素酰化序列

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荷包猪SLA-3-HB 01基因四聚体前体链的构建及表达

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作者 高花 翟晓鑫 +4 位作者 姜平 甘慧 张宗辉 许崇波 高凤山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期2691-2699,共9页

为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因... 为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因连接至表达载体pET-21a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况,提取包涵体并进行检测。结果显示,PCR成功扩增得到SLA-3-HB01-BSP,大小为896bp左右。酶切鉴定证实,目的基因成功克隆至pMD19-T载体中,插入片段大小为876bp,阳性克隆经测序后所获序列与原序列一致,并在3′端带有BSP标签序列。酶切鉴定进一步证实成功构建SLA-3-HB01-BSP/pET-21a(+)重组表达载体,经转化及诱导表达,SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子质量在33.5ku左右。包涵体蛋白分子质量约33.5ku,与菌体中目的蛋白大小一致,经凝胶成像系统UVP扫描分析,包涵体蛋白纯度接近于90%,符合进行相关结构和功能研究的要求。本研究成功构建了荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达系统,并获得了一定纯度的包涵体蛋白。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原(sla) 原核构建 密码子优化 表达 包涵体

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版纳微型猪近交系SLA-DOA基因克隆、mRNA表达及蛋白质功能生物信息学分析

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作者 王配 王淑燕 +5 位作者 霍金龙 李罗刚 张永云 李卫真 朱宏涛 姚茂东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期873-878,共6页

目的:克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)白细胞抗原DO座位alpha亚基(SLA-DOA)的编码序列,并对其19个重要组织mRNA表达作半定量分析。方法:RT-PCR方法获得SLA-DOA的全长cDNA序列;半定量RTPCR方法分析其在BMI重要组织... 目的:克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)白细胞抗原DO座位alpha亚基(SLA-DOA)的编码序列,并对其19个重要组织mRNA表达作半定量分析。方法:RT-PCR方法获得SLA-DOA的全长cDNA序列;半定量RTPCR方法分析其在BMI重要组织的mRNA表达谱,并运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,构建系统进化树。结果:BMI SLA-DOA cDNA长度为1 079 bp,编码250个氨基酸,蛋白质分子量为27.81 k D,等电点为6.48;位于猪7号染色体,由4个外显子和3个内含子构成;其mRNA高表达于淋巴结和胃,低表达于心脏、皮肤和十二指肠,在其他14种组织中不表达;SLA-DOA蛋白存在1个信号肽,1个跨膜螺旋,3个保守域,4个O连接的糖基化位点,18个磷酸化位点,位于细胞质的概率是94.1%;系统进化分析表明,在所选择的6个物种中,BMI(猪)与牛的亲缘关系最近。结论:本研究成功克隆了版纳微型猪近交系SLA-DOA基因并进行了生物信息学功能分析和多种组织表达分析,为版纳微型猪近交系的异种器官移植研究奠定基础。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原DO座位alpha亚基 版纳微型猪近交系 组织表达 生物信息学

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实验用SPF大白猪和长白猪SLAⅡ类基因多态性研究 被引量：3

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作者 江新杰 权金强 +4 位作者 李昌文 路小野 陈洪岩 杨春文 高彩霞 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期404-413,共10页

目的研究实验用SPF大白猪和长白猪SLA II类基因的多态性。方法分别采集15头SPF大白猪和22头长白猪抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,反转录后RT-PCR扩增DQB1、DRB1和DQA基因并进行测序,分析获得的SLA II类等位基因序列多态性。结果 ... 目的研究实验用SPF大白猪和长白猪SLA II类基因的多态性。方法分别采集15头SPF大白猪和22头长白猪抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,反转录后RT-PCR扩增DQB1、DRB1和DQA基因并进行测序,分析获得的SLA II类等位基因序列多态性。结果 3个基因共获得25个等位基因,包括8个DQB1,10个DRB1和7个DQA,全部获得ISAG SLA命名委员会的官方命名,其中3个等位基因首次提交完整序列,命名为DQB1*02:12(KU754590)、DQB1*02:03(KU754591)和DRB1*06:07(KU754601),3个DQA等位基因为新发现等位基因。SPF大白猪和长白猪DQB1等位基因与外源性抗原结合的15个氨基酸中,共有5个氨基酸具有高度保守性;DRB1等位基因的16个外源性抗原识别位点中,仅1个位点高度保守;DQA等位基因19个抗原结合位点中,有11个高度保守。SLA II类基因氨基酸序列分子进化树表明,3个基因分别聚为两大类,与国外Yucatan小型猪具有较近的亲缘关系,而与其他猪种未表现明显遗传距离相隔。结论成功鉴定了大白猪和长白猪的25个SLA II类等位基因,发现其具有较为丰富的多态性,所获得SLA II类等位基因在其他品种猪也广泛分布,具有多样性,这一研究结果对大白猪和长白猪发展为经典实验动物模型具有重要作用。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原 SPF大白猪 SPF长白猪 sla II类等位基因 多态性

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基于重测序的民猪与大白猪SLAⅠ类基因多态性及抗病潜能差异分析 被引量：2

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作者 李婧娜 疏泽 +3 位作者 吴俊超 程锋 王立刚 王立贤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1820-1830,共11页

不同中外猪种对疾病的抵抗能力有一定差异,原因之一是不同猪种猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)分子的多样性不同。本研究旨在探究中外猪种的SLA基因差异,为阐明地方猪的抗病机理提供重要参考。本研究首先对健康的8头民猪以及... 不同中外猪种对疾病的抵抗能力有一定差异,原因之一是不同猪种猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)分子的多样性不同。本研究旨在探究中外猪种的SLA基因差异,为阐明地方猪的抗病机理提供重要参考。本研究首先对健康的8头民猪以及4头大白猪进行基因组重测序,并对所获得的SNP进一步质控用于后续分析。使用VCFtools、GEVALT软件分析SLAⅠ类基因的SNP以及单倍型,并将SNP利用ENSEMBL中的VEP工具进行注释,在全局层面阐述两个猪种的SLAⅠ类基因多样性。通过Mega软件比对两猪种的经典SLAⅠ类基因外显子2和3的核苷酸及编码氨基酸序列,利用Expasy服务器上的ProtParam工具和Protscale程序分析蛋白质特性,并利用DnaSP软件计算核苷酸多样性,分析两个猪种经典SLAⅠ类基因抗原递呈能力的差异。结果表明,民猪的SLAⅠ类基因具有更多的SNPs和长度较短的单倍型块,并且错义突变的碱基数量较多。在经典SLAⅠ类基因的外显子2和3可分别鉴定出2个等位基因,民猪在等位基因上的核苷酸多样性要明显高于大白猪,并且民猪具有更多的碱基突变以及位于抗原结合位点上的氨基酸突变。两个猪种的经典SLAⅠ类基因氨基酸表现为亲水性,民猪的亲水性要强于大白猪。综上所述,SLAⅠ类基因在民猪上有更强的多态性。民猪经典SLAⅠ类基因的碱基突变数量和抗原结合位点上氨基酸突变的数量都要多于大白猪。本研究所检测到的民猪在经典SLAⅠ类基因ARSs上的变异可为猪抗病育种标记的筛选提供参考。 展开更多

关键词 民猪 大白猪 slaⅠ类基因 抗原结合位点 抗病力

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