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题名猪白细胞分化抗原32B的原核表达与单克隆抗体制备
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作者
赵治钤
郑丹阳
赵谜
穆杨
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机构
西北农林科技大学动物医学院
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出处
《动物医学进展》
北大核心
2025年第8期32-38,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31972675)
陕西省动物防疫专项(2023-33)。
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文摘
为制备猪白细胞分化抗原32B(CD32B)的单克隆抗体(mAb),以猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆猪CD32B基因,将不含信号肽编码序列的猪CD32B胞外区基因片段插入pET-28a(+)载体构建重组表达质粒,用大肠埃希氏菌表达系统表达猪CD32B重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的目的蛋白后大量表达并用镍柱纯化。用纯化的猪CD32B重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用细胞融合技术制备猪CD32B的mAb,并对获得的mAb进行鉴定。结果获得了全长894 bp的猪CD32B基因和537 bp的截短基因,构建的重组质粒pET-28a-pCD32B转入BL21(DE3)感受态细胞经过IPTG诱导,获得了约25 ku的猪CD32B重组蛋白,多轮亚克隆筛选后获得了1株能稳定分泌猪CD32B mAb的杂交瘤细胞3E12,该mAb重链为IgG 2a,轻链为κ型,不仅能与原核表达的猪CD32B重组蛋白结合,IFA结果显示该mAb也能与HEK 293T细胞表达的全长猪CD32B结合,为探究CD32B在猪免疫抑制性疾病中的作用积累了材料。
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关键词
猪白细胞分化抗原32b
原核表达
蛋白纯化
细胞融合
单克隆抗体
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Keywords
Porcine CD32b
Prokaryotic expression
Protein purification
Cell fusion
Monoclonal antibody
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分类号
S852.4
[农业科学—基础兽医学]
S858.28
[农业科学—临床兽医学]
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