鸡白细胞介素2真核表达质粒的构建、表达及对AIV疫苗免疫增强作用研究 被引量：9

1

作者 由振强 于涟 +2 位作者 翁继锋 许健 徐根亮 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第6期350-353,共4页

将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和... 将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和外周血淋巴细胞(PBLC),荧光显微镜观察到融合蛋白在体外能稳定表达。HI试验显示,pCI-ChIL-2-EGFP与AIV疫苗共注射可明显提高AIV疫苗的免疫原性。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素2 EGFP 真核表达 AIV

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猪IL-2真核表达质粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠细胞免疫增强作用的研究 被引量：7

2

作者 陈希文 程安春 +6 位作者 汪铭书 希尼尼根 豆文波 张平英 李雪梅 王刚 刘伍梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期60-63,共4页

目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小... 目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小鼠 ,以空载质粒pcDNA为阴性对照 ,PBS为空白对照 ;采用流式细胞仪 (FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法 )分别对小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行了检测。结果 :pcDNA IL 2与pcDNA PRRSV ORF5共同免疫小鼠后外周血对ConA有明显的反应性 ,CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数在免疫后 7天显著超过对照组 ,共同组与单独pcDNA PRRSV ORF5组有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :pcDNA PRRSV ORF5免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的细胞免疫应答 ,猪pcDNA IL 2能够显著增强pcDNA PRRSV ORF5诱导小鼠细胞免疫的能力。 展开更多

关键词 猪白细胞介素2真核表达质粒 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 细胞免疫 小鼠

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鼠白细胞介素-2受体α、β链基因反义RNA真核表达质粒的构建 被引量：1

3

作者 何承伟 梁念慈 +3 位作者 朱振宇 何晓顺 黄洁夫 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第2期113-116,共4页

【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或... 【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或PCR法鉴定正反连接。【结果】得到 4个反向连接的重组质粒 :pcAnti mIL 2Rα ,pcAnti mIL 2Rβ,pcAnti mIL 2Rαβ及pciAnti mIL 2Rαβ。前三者由CMV强启动子指导鼠IL 2R基因反义RNA的表达 ,后者由CMV启动子与鼠IL 2靶向可诱导型启动子组成的融合启动子指导反义RNA的表达。【结论】成功构建了 4个不同类型的鼠IL 2R基因反义RNA真核表达质粒。 展开更多

关键词 白细胞介素2 受体 反义RNA 真核表达质粒

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猪α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量：11

4

作者 闫若潜 吴志明 +3 位作者 张志凌 盛敏 刘光辉 赵明军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期248-255,共8页

为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleuk... 为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleukin-2,PoIL-2)成熟肽基因连接,构建成PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因,并克隆入pGEM-T Easy载体,将PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体进行原核表达。通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中的PoIFN-α在不同细胞系上对不同病毒增殖活性的抑制作用;分别采用MTT法和PoIL-2 ELISA试验方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中PoIL-2的生物学活性。结果表明成功构建并克隆PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中得到高效表达,表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白相对分子质量约36.7 ku,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在细胞上具有与单一rPoIFN-α蛋白相近的抑制病毒增殖活性,其中在PK-15细胞上抗VSV的活性单位为1.891×104I U.mL-1,在Marc-145细胞上抑制高致病性PRRSV增殖的活性单位为905 U.mL-1;rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有与单一rPoIL-2蛋白对照相近的生物学活性,可明显促进CTLL-2细胞的增殖,并可与抗PoIL-2单抗发生特异性免疫反应。这表明rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有rPoIFN-α和rPoIL-2蛋白双重的生物学活性,为基因工程抗病毒制剂的开发以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征等病毒性疾病的预防和治疗等研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪Α干扰素 猪白细胞介素2 重叠延伸PCR 嵌合基因 融合表达 活性

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猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达 被引量：10

5

作者 严琳 陈焕春 +2 位作者 覃雅丽 何启盖 肖少波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期208-212,共5页

将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株... 将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20KD),其表达量可达到80mg/L。用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106IU/ml。对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2。本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据。 展开更多

关键词 猪 白细胞介素-2 甲醇酵母 基因表达 阳性克隆子

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鸡白细胞介素-2基因的克隆与酵母表达质粒的构建 被引量：4

6

作者 张辉华 毕英佐 +2 位作者 曹永长 马静云 周庆丰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期102-105,共4页

从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT PCR)扩增出鸡白细胞介素 2(IL 2)cDNA片断.PCR产物克隆至pGEM TEasy载体,重组质粒命名为IL 2 T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为43... 从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT PCR)扩增出鸡白细胞介素 2(IL 2)cDNA片断.PCR产物克隆至pGEM TEasy载体,重组质粒命名为IL 2 T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为432bp,与预期大小一致,为鸡IL 2基因的编码区全长.将IL 2 T克隆重组质粒进行双酶切(ClaI与XbaI),回收IL 2片断插入同样酶切的毕赤酵母表达质粒pPICZα C,构建重组IL 2 C表达质粒,为鸡IL 2在毕赤酵母中的表达奠定基础. 展开更多

关键词 IL-2 白细胞介素-2 酵母表达 克隆 表达质粒 重组质粒 基因 毕赤酵母 酶切 菌落PCR

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人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量：3

7

作者 程小款 杜恺 +2 位作者 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 1995年第5期326-332,共7页

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打... 删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。 展开更多

关键词 白细胞介素2 受体 重组克隆 真核基因表达

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猪白细胞介素2与融合白细胞介素4/6基因共表达的免疫效应研究 被引量：2

8

作者 杨璐一 肖永乐 +5 位作者 万小平 罗公明 王晔 陈义辉 孙文魁 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第2期167-173,共7页

目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染... 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。 展开更多

关键词 猪融合白细胞介素4 6基因 猪白细胞介素2基因 共表达 免疫 小鼠

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猪白细胞介素-2的原核表达及其生物学活性研究 被引量：2

9

作者 吴志明 闫若潜 +3 位作者 谢彩华 刘梅芬 刘光辉 黄清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第4期89-92,共4页

本研究采用RT-PCR方法自刀豆素(Con A)刺激的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪白细胞介素-2(por-cine interleutin-2,PoIL-2)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪白细胞介素-2(rPoIL-2)蛋白通过尿素变... 本研究采用RT-PCR方法自刀豆素(Con A)刺激的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪白细胞介素-2(por-cine interleutin-2,PoIL-2)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪白细胞介素-2(rPoIL-2)蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用MTT法测定rPoIL-2蛋白促小鼠细胞毒性淋巴样系CTLL-2株细胞增殖活性以评价rPoIL-2的活性。结果表明,成功克隆了rPoIL-2的成熟肽基因,基因全长405 bp,编码134个氨基酸;表达的rPoIFN-α蛋白分子质量大小约为16.5 ku,与预期大小相一致;经纯化后的蛋白质纯度在96%以上;纯化的rPoIL-2蛋白促小鼠CTLL-2株细胞增殖活性最高值是对照细胞的3倍。本研究成功表达了具有生物学活性的PoIL-2蛋白,为新型基因工程抗病毒制剂和免疫增强剂的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素2 原核表达 纯化 活性

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长毛兔和獭兔白细胞介素-2基因的克隆与真核表达 被引量：2

10

作者 郑晶 杨光友 +5 位作者 赖松家 张晓谦 廖艳 古小彬 安晓雪 牟静 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期234-240,共7页

采用RT-PCR法从ConA诱导培养的德系安哥拉长毛兔和白色獭兔外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到白细胞介素-2基因(IL-2),经序列测定表明,长毛兔和獭兔IL-2基因大小均为462 bp,两序列碱基组成无差异,该基因编码一个由153个氨基酸组成的多肽,包... 采用RT-PCR法从ConA诱导培养的德系安哥拉长毛兔和白色獭兔外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到白细胞介素-2基因(IL-2),经序列测定表明,长毛兔和獭兔IL-2基因大小均为462 bp,两序列碱基组成无差异,该基因编码一个由153个氨基酸组成的多肽,包括20个氨基酸残基的信号肽和133个氨基酸残基的成熟肽。德系安哥拉长毛兔和白色獭兔IL-2基因间同源性为100%,与欧洲野兔及中国白兔的IL-2基因同源性分别为99.4%和98.9%。与GenBank中报道的猿、人、猕猴、狒狒、猫、马、大熊猫、犬、猪、水牛、山羊和鼠的IL-2核苷酸同源性分别为86.9%、86.7%、86.2%、86.1%、84.3%、84.3%、82.8%、82.6%、81.4%、76.9%、76.7%、75.0%。进化树分析发现,兔和猿的IL-2亲缘关系最近。通过脂质体法转染COS-7细胞,获得具有一定生物学活性的IL-2蛋白。 展开更多

关键词 长毛兔 獭兔 白细胞介素2 克隆 真核表达

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猪白细胞介素-2在BHK-21细胞中表达及其活性分析 被引量：1

11

作者 王大伟 乔军 +3 位作者 张辉 胡圣伟 丁波 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期378-382,共5页

为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用... 为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用实时定量PCR及ELISA测定PoIL-2在BHK-21细胞内的表达,同时以淋巴细胞增殖试验(MTT)检测PoIL-2蛋白活性。试验结果表明稳定整合PoIL-2基因的BHK-21细胞系其PoIL-2mRNA的转录效率是阴性对照组1.43倍,蛋白表达量是阴性对照组1.29倍。MTT试验表明真核表达的PoIL-2促淋巴细胞增殖活性与阴性对照组相比差异极显著(p<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIL-2具有良好的生物学活性。本研究为开发新型基因工程疫苗佐剂和抗病毒制剂奠定了基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素2 真核表达 实时定量PCR 淋巴细胞增殖试验

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鸡白细胞介素2和白细胞介素18基因的原核及真核表达 被引量：3

12

作者 张艳雯 张鹤曦 +2 位作者 覃静 周晴云 唐子琼 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第12期2975-2982,共8页

【目的】克隆并原核和真核表达无特定病原(SPF)鸡白细胞介素2(ChIL-2)和白细胞介素18(ChIL-18)基因,为后续开展ChIL-2和ChIL-18蛋白功能、生物学活性及联合应用的免疫佐剂研究打下基础。【方法】运用RT-PCR扩增ChIL-2和ChIL-18基因,并... 【目的】克隆并原核和真核表达无特定病原(SPF)鸡白细胞介素2(ChIL-2)和白细胞介素18(ChIL-18)基因,为后续开展ChIL-2和ChIL-18蛋白功能、生物学活性及联合应用的免疫佐剂研究打下基础。【方法】运用RT-PCR扩增ChIL-2和ChIL-18基因,并进行测序和序列比对分析,分别构建其重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18及重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18,并将重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18分别转化大肠杆菌BL21,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18分别转染非洲绿猴肾(Vero)细胞。【结果】重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18经IPTG诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在大肠杆菌中获得高效表达,表达的蛋白分子量分别为27和23 kD;重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18转染Vero细胞24 h后进行倒置荧光显微镜检测,结果显示融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在Vero细胞中均有较高表达。【结论】克隆获得的ChIL-2和ChIL-18基因可在原核和真核细胞中高效表达。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素2 鸡白细胞介素18 克隆 原核表达 真核表达

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小鼠白细胞介素18真核表达质粒的构建及基因多态性分析

13

作者 时阳 谭岩 +5 位作者 刘力华 太京华 方艳秋 段秀梅 姜艳芳 许淑芬 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期206-208,共3页

目的 :构建小鼠白细胞介素 1 8(m IL - 1 8)的重组真核表达质粒 ,制备有效的免疫佐剂。方法 :通过RT- PCR分别从 BAL B/c小鼠和 Swiss小鼠肝组织总 RNA中扩增 m IL - 1 8,并将其连接于载体 pc DNA3中 ,再用双酶切及测序方法鉴定重组质... 目的 :构建小鼠白细胞介素 1 8(m IL - 1 8)的重组真核表达质粒 ,制备有效的免疫佐剂。方法 :通过RT- PCR分别从 BAL B/c小鼠和 Swiss小鼠肝组织总 RNA中扩增 m IL - 1 8,并将其连接于载体 pc DNA3中 ,再用双酶切及测序方法鉴定重组质粒。结果 :构建出两组重组质粒 ,其中从 BAL B/c小鼠中获得的 m IL - 1 8序列与Genbank中序列完全一致 ,而从 Swiss小鼠中获得的 m IL - 1 8序列有两个点突变。结论 :重组质粒 pc IL - 1 8构建成功 ,且发现 m IL - 1 8具有未见报道的点突变 ,已登录于 Genbank。这为研制抗肿瘤 DNA疫苗 。 展开更多

关键词 白细胞介素18 真核表达质粒 佐剂 免疫 多态现象(遗传学)

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人白细胞介素-3基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

14

作者 赵秀荣 周晓春 +3 位作者 米术斌 段一娜 徐大为 王庆林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期734-735,共2页

目的:克隆人白细胞介素-3(hIL-3)基因cDNA,构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-3。方法:从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IL-3基因cDNA,通过T/A克隆法,首先构建pUCm-T/hIL-3,然后构建其真核表达型载体p... 目的:克隆人白细胞介素-3(hIL-3)基因cDNA,构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-3。方法:从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IL-3基因cDNA,通过T/A克隆法,首先构建pUCm-T/hIL-3,然后构建其真核表达型载体pcDNA3/IL-3。结果:pUCm-T/hIL-3内插入片段序列与hIL-3基因序列一致;pcDNA3/IL-3经酶切鉴定与预期结果一致。结论:成功完成了hIL-3基因克隆和pcDNA3/IL-3真核表达质粒的构建。 展开更多

关键词 白细胞介素-3 基因克隆 真核表达质粒

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小鼠白细胞介素33真核表达质粒的构建及表达

15

作者 朱俊丰 桑力轩 +7 位作者 杨芳丽 李岩 翟景波 高植鹏 邓芳博 孙逊 王大南 吕昌龙 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期60-63,共4页

克隆小鼠IL-33基因构建其真核表达质粒,并转染COS-7细胞检测其表达。提取C57BL/6小鼠肺组织总RNA,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增小鼠IL-33基因,酶切后插入pc DNATM3.1/myc-His A构建其真核表达质粒pc DNA-3.1-IL-33,重组质粒转染C... 克隆小鼠IL-33基因构建其真核表达质粒,并转染COS-7细胞检测其表达。提取C57BL/6小鼠肺组织总RNA,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增小鼠IL-33基因,酶切后插入pc DNATM3.1/myc-His A构建其真核表达质粒pc DNA-3.1-IL-33,重组质粒转染COS-7细胞,RT-PCR和免疫印迹法(western blotting)检测目的基因表达。结果显示,pc DNA3.1-IL-33中插入的片段序列测定结果与小鼠IL-33c DNA序列一致,重组质粒转染COS-7细胞后检测到相应mRNA及蛋白表达。成功克隆了小鼠IL-33基因c DNA,并构建其真核表达质粒。 展开更多

关键词 白细胞介素33 基因克隆 表达质粒构建 真核表达

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小鼠白细胞介素-18的克隆及真核表达质粒的构建

16

作者 陈勇 赵雪花 +4 位作者 何丽娅 成彩莲 夏瑞明 朱汉荣 王海燕 《武汉科技大学学报》 CAS 2006年第2期200-202,共3页

克隆小鼠白细胞介素-18(m IL-18),并与真核表达质粒pcDNA3.1/H isB重组,构建真核表达重组质粒。采用RT-PCR,从小鼠肝细胞中扩增IL-18的全长cDNA。经H indⅢ,EcoR I双酶切,将该cDNA片断插入表达载体pcDNA3.1/H isB。通过酶切、PCR及测序... 克隆小鼠白细胞介素-18(m IL-18),并与真核表达质粒pcDNA3.1/H isB重组,构建真核表达重组质粒。采用RT-PCR,从小鼠肝细胞中扩增IL-18的全长cDNA。经H indⅢ,EcoR I双酶切,将该cDNA片断插入表达载体pcDNA3.1/H isB。通过酶切、PCR及测序对重组体进行鉴定。经鉴定,重组质粒构建正确,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/m IL-18,为下一步进行IL-18的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞介素-18 RT-PCR 真核表达质粒

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猪白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达及其生物学活性测定

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作者 郭小参 陈红英 +4 位作者 崔沛 贾艳艳 崔保安 方剑玉 王振亚 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第11期1-6,共6页

【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素-2(pIL2),并鉴定其生物学活性。【方法】以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增IL-2基因。将猪IL-2基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)... 【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素-2(pIL2),并鉴定其生物学活性。【方法】以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增IL-2基因。将猪IL-2基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-pIL2,并应用甲基噻唑基四唑(MTT)试验测定融合蛋白的生物学活性。【结果】以含有猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增出1条约420bp的带。所获重组质粒pGEX-pIL2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。SDS-PAGE电泳结果显示,可检测到相对分子质量约为42ku的GST-pIL2,Western-blot证实GST-pIL2能与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋白经薄层层析扫描分析,表达量约占菌体总蛋白的40%。MTT试验证实,表达产物经变性、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖。【结论】猪IL-2基因在大肠杆菌中得到表达,表达的蛋白具有一定的生物学活性。 展开更多

关键词 猪白细胞介素-2 原核表达 生物学活性

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鸡白细胞介素-2（IL-2）基因与真核表达质粒及禽类疫苗的免疫增强剂

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《家禽科学》 2007年第10期47-48,共2页

内容介绍：本发明提供了一种鸡白细胞介素-2（IL-2）基因。本发明还提供一种含有IL-2基因的真核表达质粒，它以pC工作为真核表达载体，含有上述白IL-2基因的编码序列的重组载体。本发明还提供了一种禽类疫苗的免疫增强剂。它为上述真核... 内容介绍：本发明提供了一种鸡白细胞介素-2（IL-2）基因。本发明还提供一种含有IL-2基因的真核表达质粒，它以pC工作为真核表达载体，含有上述白IL-2基因的编码序列的重组载体。本发明还提供了一种禽类疫苗的免疫增强剂。它为上述真核表达质粒的水溶液。其浓度为1～20μg／μl；或为含有上述真核表达质粒在真核细胞或动物体内所表达的鸡白细胞介素-2蛋白。鸡白细胞介素-2蛋白所占重量比为1％～20％。 展开更多

关键词 白细胞介素-2 真核表达质粒 IL-2基因 免疫增强剂 种鸡 疫苗 禽类 真核表达载体

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猪白细胞介素-2重组蛋白的原核表达及其生物学活性分析 被引量：1

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作者 宋世斌 《畜牧兽医杂志》 2015年第3期34-38,共5页

用已构建好的重组表达载体pET30-IL2转化BL-21E.coli,挑取单克隆,利用诱导剂IPTG诱导表达;通过改变诱导剂的浓度、诱导的时间来摸索最佳诱导条件,在最佳诱导条件下大量表达,并利用镍层析柱纯化重组蛋白,用MTS法测定其生物学活性。结果表... 用已构建好的重组表达载体pET30-IL2转化BL-21E.coli,挑取单克隆,利用诱导剂IPTG诱导表达;通过改变诱导剂的浓度、诱导的时间来摸索最佳诱导条件,在最佳诱导条件下大量表达,并利用镍层析柱纯化重组蛋白,用MTS法测定其生物学活性。结果表明,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出25ku的融合蛋白,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳的诱导剂浓度为0.1mM,最佳的诱导时间为4h;对表达产物的包涵体处理后,用镍琼脂糖凝胶FF纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。通过透析除去部分尿素,复性后在体外利用MTS法检测其生物学特性,结果表明其仍具有较好的生物学活性,这为进一步大量制备和研究猪IL-2重组蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素2 原核表达 纯化 活性分析

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荣昌猪白细胞介素-2基因的原核表达 被引量：9

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作者 张芳 郭万柱 吴华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期355-358,共4页

应用DNA重组技术,将克隆的荣昌猪白细胞介素-2基因亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,构建重组表达载体。酶切鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用1 mM的HPTG诱导表达重组蛋白。RT-PCR方法检测表明白细胞介素-2基因得到了转录;对表达蛋... 应用DNA重组技术,将克隆的荣昌猪白细胞介素-2基因亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,构建重组表达载体。酶切鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用1 mM的HPTG诱导表达重组蛋白。RT-PCR方法检测表明白细胞介素-2基因得到了转录;对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳,发现在相对分子质量约37 Ku处有明显的蛋白质条带,而对照组无相应条带产生。最后用MTT法检测表达蛋白的生物学活性,表明所获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,这为利用该蛋白及其基因研制高效抗病免疫制剂和基因工程疫苗奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 荣昌猪 白细胞介素-2 表达

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