期刊文献+
共找到3篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究 被引量:1
1
作者 王春燕 陈国华 +6 位作者 何小兵 曾爽 贾怀杰 房永祥 冯园 李守杰 景志忠 《动物医学进展》 北大核心 2016年第10期34-40,共7页
本实验室前期研究发现猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和TCR Vβ6基因家族,为进一步研究其体外表达情况,应用RT-PCR从猪外周血单个核细胞中扩增其全长基因序列,并构建TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒,将其转染293T细胞... 本实验室前期研究发现猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和TCR Vβ6基因家族,为进一步研究其体外表达情况,应用RT-PCR从猪外周血单个核细胞中扩增其全长基因序列,并构建TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒,将其转染293T细胞。结果显示,TCR Vα5和TCR Vβ6全长基因分别为816bp和945bp,双酶切和核酸序列测定证实TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染293T细胞24h后荧光显微镜下可以看到70%以上的细胞表达EGFP蛋白。此外,实时荧光定量PCR可检测到TCR Vα5和TCR Vβ6基因的表达,单独转染组和共同转染组Western blot均可检测到EGFP蛋白的表达,且蛋白杂交带强度相似。研究结果表明,CSFV-C株特异性的TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP真核表达质粒可同时转染到293T细胞中,实现体外共表达。 展开更多
关键词 猪瘟病毒c株 TcR Vα/Vβ基因 脂质体转染 增强绿色荧光蛋白
在线阅读 下载PDF
猪瘟病毒C株截短E2基因在大肠杆菌中表达及免疫原性初步检测 被引量:4
2
作者 郑仲华 李东升 +6 位作者 姚俊庸 常艳 勾红潮 刘文俊 赵明秋 毛晶丹 陈金顶 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期12-16,共5页
本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB... 本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板,挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE,在约39ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后,分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临床检测阳性的猪抗CSFV阳性血清进行Western blotting检测,可见在39ku处有单一条带,表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结果为下一步ELSIA试剂盒的组装奠定基础,方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。 展开更多
关键词 猪瘟病毒c株 A D主要抗原区 截短表达
在线阅读 下载PDF
猪瘟病毒C株检测用国家核酸标准物质的研制 被引量:7
3
作者 王英超 高晓龙 +6 位作者 梅力 高敏 宋彦军 韦海涛 赵启祖 李翠 冯小宇 《中国动物检疫》 CAS 2020年第10期114-120,共7页
为研制均匀、稳定的猪瘟病毒(CSFV)核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评... 为研制均匀、稳定的猪瘟病毒(CSFV)核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4℃条件下可稳定存放4周,25℃可稳定存放1周,-20℃可稳定存放11个月,量值结果为(5.1±0.7)×10^5 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。 展开更多
关键词 猪瘟病毒c株 微滴式数字PcR 核酸标准物质
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部