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猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
10
1
作者
王伟
符芳
+3 位作者
陈欣
李雪松
李海忠
李曦
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期854-857,共4页
为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSF...
为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSFV野毒和疫苗株的最低检出量为10拷贝;检测牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型4种病毒均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法检测从黑龙江省各地区猪场采集的600份样品,结果表明野毒株的阳性率为30.5%。该方法可应用于CSFV野毒株和C株的鉴别检测。
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关键词
SYBRGreenⅠ实时荧光PCR
猪瘟病毒野毒株
C
株
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职称材料
鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
3
2
作者
王淑娟
班付国
+8 位作者
王东方
刘影
赵雪丽
谢彩华
王翠
马震原
杨海波
柴茂
闫若潜
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期177-184,共8页
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建...
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示:建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10~0~10~6拷贝·μL~(-1)模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL~(-1);利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。
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关键词
非洲
猪瘟
病毒
猪瘟病毒野毒株
二重TaqMan
MGB
FQ-PCR
检测
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职称材料
题名
猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
10
1
作者
王伟
符芳
陈欣
李雪松
李海忠
李曦
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期854-857,共4页
基金
黑龙江省自然基金重点项目(ZJN0503-02)
文摘
为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSFV野毒和疫苗株的最低检出量为10拷贝;检测牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型4种病毒均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法检测从黑龙江省各地区猪场采集的600份样品,结果表明野毒株的阳性率为30.5%。该方法可应用于CSFV野毒株和C株的鉴别检测。
关键词
SYBRGreenⅠ实时荧光PCR
猪瘟病毒野毒株
C
株
Keywords
SYBR GreenⅠreal-time PCR
classical swine fever virus
C-strain
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
3
2
作者
王淑娟
班付国
王东方
刘影
赵雪丽
谢彩华
王翠
马震原
杨海波
柴茂
闫若潜
机构
河南省动物疫病预防控制中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期177-184,共8页
基金
河南省科技创新领军人才(204200510012)。
文摘
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示:建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10~0~10~6拷贝·μL~(-1)模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL~(-1);利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。
关键词
非洲
猪瘟
病毒
猪瘟病毒野毒株
二重TaqMan
MGB
FQ-PCR
检测
Keywords
African swine fever virus
classical swine fever virus wild strains
duplex TaqMan MGB FQ-PCR
detection
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
王伟
符芳
陈欣
李雪松
李海忠
李曦
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
10
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
王淑娟
班付国
王东方
刘影
赵雪丽
谢彩华
王翠
马震原
杨海波
柴茂
闫若潜
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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