整合型诱导表达猪生长激素(pGH)载体的构建及表达研究 被引量：8

1

作者 鞠辉明 白立景 +1 位作者 姜星 李奎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1008-1013,共6页

旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过Sal I酶切位点连接到pCAGGS-rtTA载体中,构建重组载体pCAGGS-rtTA-TRE-GH12(下称pTTGH)... 旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过Sal I酶切位点连接到pCAGGS-rtTA载体中,构建重组载体pCAGGS-rtTA-TRE-GH12(下称pTTGH),将pTTGH质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,在培养液中添加诱导底物强力霉素(Doxycycline,DOX)后不同时间段通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内pGH mRNA的表达;在培养液中添加不同浓度的的DOX,通过QRT-PCR及Western blot测定细胞内pGH的表达变化。酶切及测序结果表明成功构建了pTTGH载体;QRT-PCR结果表明,和对照组相比,试验组细胞培养液中添加诱导底物后外源GH基因表达在36h时最高;在一定浓度范围内,外源GH表达水平和添加DOX的浓度呈现出正相关性,而正常细胞组中GH的表达水平不受DOX添加与否及量的影响。通过条带灰度分析Western杂交结果验证了培养基中一定范围内DOX浓度和pGH表达量呈现出正相关。试验结果表明,本研究成功构建了整合型诱导表达GH载体并能实现GH的可控表达,本研究为以后制备可控表达GH转基因动物、进一步研究GH对机体影响奠定基础。 展开更多

关键词 诱导表达 猪生长激素 整合型 真核表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

6×His-猪生长激素融合基因在家蚕生物反应器中的表达 被引量：3

2

作者 朱江 姜秀英 +5 位作者 曹广力 朱艳 彭建明 李新平 沈颂东 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 2004年第4期376-381,共6页

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA基因克隆入转移载体pBacPAK His1,构建了重组转移载体pPGH0 30 ,进而将pPGH0 30与线性化病毒Bm BacPAK6共转染BmN细胞 ,成功获得了猪生长激素重组杆状病毒Bm BacPAK6 pgh。感染重组病... 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA基因克隆入转移载体pBacPAK His1,构建了重组转移载体pPGH0 30 ,进而将pPGH0 30与线性化病毒Bm BacPAK6共转染BmN细胞 ,成功获得了猪生长激素重组杆状病毒Bm BacPAK6 pgh。感染重组病毒的细胞可溶性蛋白SDS PAGE和Western blot分析结果显示 ,感染细胞蛋白电泳带的 2 5kD处有 1条猪生长激素特异带。Bm BacPAK6 pgh的BmN细胞培养液接种家蚕 5龄幼虫和蛹 ,感病幼虫与蛹血淋巴的SDS PAGE和Western blot分析结果表明 ,6×His 猪生长激素融合基因在家蚕体内得到了表达 ,特异性条带大小约为 2 5kD。 展开更多

关键词 猪生长激素 融合基因 家蚕生物反应器 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测 被引量：2

3

作者 兰海楠 李维 郑鑫 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第11期7-12,共6页

【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模... 【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。 展开更多

关键词 猪生长激素 抗独特型抗体 信号转导

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素及其单克隆抗体的制备与纯化 被引量：4

4

作者 余慕贞 方是民 +2 位作者 王韵 何新 史瀛仙 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第5期587-592,共6页

本文介绍一种简便快捷提纯猪生长激素的方法。通过杂交瘤技术,首次获得抗猪生长激素的单克隆抗体,并讨论和比较从腹水纯化单克隆抗体的各种方法。

关键词 猪生长激素 单克隆抗体 制备 纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

基因重组猪生长激素对不同杂交肥育猪组织中IGF-ImRNA和IGF-I影响的研究 被引量：1

5

作者 熊文中 杨凤 +1 位作者 郭万柱 周安国 《动物营养学报》 CAS CSCD 2000年第3期14-18,共5页

选用长雅和长约去势公猪各12头 ,按2×2因子设计 ,每头每天分别注射基因重组猪生长激素4mg或0mg28天 ,测定生长激素对组织中IGF -ImRNA和IGF -I的影响。结果表明 ,基因重组猪生长激素分别提高长雅和长约去势公猪血浆和半腱肌中IGF -... 选用长雅和长约去势公猪各12头 ,按2×2因子设计 ,每头每天分别注射基因重组猪生长激素4mg或0mg28天 ,测定生长激素对组织中IGF -ImRNA和IGF -I的影响。结果表明 ,基因重组猪生长激素分别提高长雅和长约去势公猪血浆和半腱肌中IGF -ImRNA含量53.38 %～97.50 %和40.47 %～106.79 % ;分别提高血浆和半腱肌中IGF -I含量44.21 %～72.04 %和56.03 %～58.32 %。血浆与肌肉中IGF -ImRNA、IGF -I具有显著的正相关关系。外源生长激素对肌肉中IGF -ImRNA和IGF -I的影响 。 展开更多

关键词 基因重组猪生长激素 杂交肥育猪 IGF-ImRNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素启动子的克隆及功能分析 被引量：1

6

作者 阮楠 张明军 +2 位作者 鞠辉明 白立景 赵为民 《安徽农业科学》 CAS 2012年第6期3356-3358,共3页

[目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821～+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧... [目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821～+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧光素酶表达载体pGL3-basic上。通过重组质粒瞬时转染大鼠垂体瘤细胞(GH3)、猪髋动脉血管内皮细胞(PIEC)和猪肾细胞(PK15)和转染后细胞荧光素酶活性的测定,检测这些5’末端缺失质粒在垂体及非垂体细胞中的相对转录活性。[结果]成功扩增了猪GH基因5’上游启动区1 882 bp的片段,并构建了9个pGL3-mGH promoter报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测系统证实插入报告基因载体中的启动子具有非常强的细胞特异性。[结论]猪生长激素特异性在垂体细胞中表达,其最小启动子位于-110 bp以内,启动子区-218～-110 bp和-429～-218 bp间存在正向调控元件。 展开更多

关键词 猪生长激素启动子 基因表达 调控

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素的应用研究进展 被引量：7

7

作者 陈庄 陈平洁 《广东畜牧兽医科技》 1999年第4期7-9,共3页

关键词 猪生长激素 应用研究 去势公猪 血清胰岛素 尿素氮 饲料报酬 生长肥育猪 猪血清 剂量依赖性 血糖浓度

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素的应用及存在问题

8

作者 周芬 王恬 +1 位作者 张莉莉 丁月云 《饲料研究》 CAS 2007年第11期25-27,共3页

生长速度和胴体品质是养猪生产过程中2个重要的经济性状。猪生长激素(pGH)是一种具有广泛生理功能的生长调节素,其主要作用是通过改善营养物质在猪体内的配比,促进蛋白质合成及抑制脂肪生成,进而提高动物体增质量和瘦肉率。

关键词 猪生长激素 调节作用 安全问题

在线阅读 下载PDF 职称材料

^(125)I标记猪生长激素及其放射免疫测定初步研究

9

作者 杨根海 汪琳仙 王福钧 《核农学报》 CAS CSCD 1992年第3期179-182,共4页

本文采用温和氧化剂Iodogen标记抗原猪生长素(pGH),并应用双抗体放射免疫分析法进行沉淀反应,测定了该法的准确度和灵敏度,建立了简便易行的猪生长激素放射免疫测定法。

关键词 猪生长激素 放射免疫测定法

在线阅读 下载PDF 职称材料

兔抗猪生长激素抗血清的制备和鉴定

10

作者 汪琳仙 刘继清 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1990年第7期22-23,共2页

《中国农业百科全书·兽医卷》在中国畜牧兽医学会陈凌风理事长的主持下有些条目已写出,本刊选登部分条目,以广泛征求修改意见。

关键词 兔 抗猪生长激素 抗血清 制备 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素对不同杂交猪基因调控的影响

11

作者 关正萍 潘晓亮 《饲料研究》 CAS 2007年第6期25-29,共5页

关键词 猪生长激素基因 基因调控 杂交猪 晶体结构分析 氨基酸组成 肽类激素 垂体前叶 二级结构

在线阅读 下载PDF 职称材料

转猪生长激素基因家兔的研究

12

作者 魏平华 王建忠 +3 位作者 邱伦和 陈清轩 曹颉 宋德秀 《草食家畜》 1992年第S1期133-136,共4页

微注射法向家兔受精卵原核注入重组猪生长激素基因(pSMTPGH/BglI片段)。449枚注射卵经移植后共成胎和产仔56只。采集其中50只仔兔耳组织(约1克)提取总体DNA,用经Djgoxigenin-11-dUTP标记的3-5KbSMT-PGH探针对总体DNA斑点杂交,结果表明... 微注射法向家兔受精卵原核注入重组猪生长激素基因(pSMTPGH/BglI片段)。449枚注射卵经移植后共成胎和产仔56只。采集其中50只仔兔耳组织(约1克)提取总体DNA,用经Djgoxigenin-11-dUTP标记的3-5KbSMT-PGH探针对总体DNA斑点杂交,结果表明有15只仔兔为检测阳性。对上述阳性兔Southern印迹杂交进一步检测表明,有7只仔兔整合了导入的猪生长激素基因。出生仔兔中外源基因整合率为14％(7/50)。 展开更多

关键词 转基因家兔 微注射 猪生长激素基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达猪生长激素基因的重组腺病毒的构建及对猪生长的促进效果观察 被引量：2

13

作者 曹汉威 张春红 +2 位作者 黄忠 阮良基 林洁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期592-596,共5页

利用复制缺陷型重组腺病毒作为基因表达载体,将猪生长激素(pGH)基因直接转导到猪体内细胞,研究猪生长激素基因在猪体内的促生长作用。用同源重组的方法,构建含pGH基因的重组腺病毒(Ad-pGH)。将其感染293细胞和PK-15细胞,均可检测到pGH。... 利用复制缺陷型重组腺病毒作为基因表达载体,将猪生长激素(pGH)基因直接转导到猪体内细胞,研究猪生长激素基因在猪体内的促生长作用。用同源重组的方法,构建含pGH基因的重组腺病毒(Ad-pGH)。将其感染293细胞和PK-15细胞,均可检测到pGH。用1 mL此重组腺病毒(1010TCID50)一次性肌肉注射60日龄的杂交长白猪。结果表明,试验组的猪平均增重比对照组的猪增加37%(注射后第4周)和19%(注射后第6周);饲料报酬提高28%(注射后第4周)和18%(注射后第6周)。试验结果证明,由重组腺病毒表达的pGH具有生物学活性,在猪体内起到明显的促进生长的作用。重组腺病毒介导的pGH基因在猪体内的表达可维持约4周。 展开更多

关键词 猪生长激素 重组腺病毒 猪体试验

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素及其应用

14

作者 魏庆信 《湖北畜牧兽医》 1999年第3期13-13,共1页

人类对动物生长激素的认识起始于30年代.摘除脑垂体可以造成大鼠生长的停止和体蛋白的显著减少.这一现象使人们意识到,做为重要的内分泌器官——脑垂体分泌一种可以促进发育期动物的生长、调节蛋白质合成的物质——生长激素.1931年Evens... 人类对动物生长激素的认识起始于30年代.摘除脑垂体可以造成大鼠生长的停止和体蛋白的显著减少.这一现象使人们意识到,做为重要的内分泌器官——脑垂体分泌一种可以促进发育期动物的生长、调节蛋白质合成的物质——生长激素.1931年Evens和Simpso等人利用粗制的垂体生长激素,有效地调节了大鼠的生长速率.Lee等1934年进一步对大鼠做配对控制试验发现,试验组体重增加是由于蛋白质增加和脂肪沉积减少.这表明,在动物发育的早期。 展开更多

关键词 猪生长激素 生长激素 生产 育肥效果

在线阅读 下载PDF 职称材料

由大肠杆菌中提取重组猪生长激素的研究 被引量：3

15

作者 尹德钟 贾锋 +3 位作者 张永清 高文玉 周顺伍 齐顺章 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第3期353-357,共5页

本文通过研究提出了一种由大肠杆菌细胞中提取重组猪生长激素的方法。提取回收率为52.4％,纯度为94.1％,具有生物学活性。

关键词 猪生长激素 大肠杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

稀土增欲剂IPF_(89)对生长猪生长激素及有关代谢激素的影响 被引量：1

16

作者 郭先明 曲伟杰 韩博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期36-37,共2页

动物体内几乎所有激素都直接或间接参与生长调节,而其中最为重要的是由下丘脑-垂体-靶腺构成的神经内分泌生长轴（the somatotropic axis）。动物饲养试验结果表明,稀土（IP）和食欲促进剂F89（氟安定）分别具有增进食欲、促进生长、提... 动物体内几乎所有激素都直接或间接参与生长调节,而其中最为重要的是由下丘脑-垂体-靶腺构成的神经内分泌生长轴（the somatotropic axis）。动物饲养试验结果表明,稀土（IP）和食欲促进剂F89（氟安定）分别具有增进食欲、促进生长、提高饲料利用率的作用。为了进一步确定IPF89的效果,本试验旨在研究IPF89协同作用对生长猪生长激素的脉冲释放及与生长有关的激素的影响,探讨其作用机理,为生产应用提供依据。 展开更多

关键词 猪生长激素 代谢激素 稀土 动物体内 饲养试验 神经内分泌 饲料利用率 生长调节

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素的功能与应用 被引量：1

17

作者 王索柱 《养殖技术顾问》 2012年第4期248-248,共1页

20世纪,抗生素、激素、类激素等的发现以及化学抗菌物质合成成功,被广泛用作饲料添加剂,在猪的生产上,对提高生长率、改善饲料报酬和预防疾病、提高猪肉产品的数量及满足人们的生活水平具有积极的作用。

关键词 猪生长激素 应用 功能 饲料添加剂 物质合成 饲料报酬 猪肉产品 抗生素

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪生长激素基因(PGH)的概况

18

作者 李秀刚 李祖平 《畜牧兽医科技信息》 2009年第4期14-14,共1页

近年来，抗生素、激素、类激素化学抗菌物质被广泛用作饲料添加剂，在提高猪的生长率，改善饲料报酬预防疾病，提高猪肉产品的数量等方面发挥了重要作用。但这些添加剂的长期使用、滥用，及残留又严重威胁了人类的身体健康，甚至导致人... 近年来，抗生素、激素、类激素化学抗菌物质被广泛用作饲料添加剂，在提高猪的生长率，改善饲料报酬预防疾病，提高猪肉产品的数量等方面发挥了重要作用。但这些添加剂的长期使用、滥用，及残留又严重威胁了人类的身体健康，甚至导致人的死亡。因此，许多国家限制或禁用这些抗生素、激素等物质。为了使养猪业不断发展，近年来猪生长激素（PGH）的研究已逐渐深入，但仍没有资料证实生长激素使用的安全性，所以大多数国家还没有批准生长激素上市，据报道现在只有澳大利亚批准使用PST，而美国、欧共体等发达国家，仍禁止它在肉品生产和养猪业中的使用，但他们对PGH的养猪试验仍在积极、全面的进行：有资料表明，PGH一旦大规模应用于养猪业，将会对猪的生产，育种产生重大的影响。本文对猪生长激素基因作一概述。 展开更多

关键词 猪生长激素基因 饲料添加剂 抗菌物质 养猪业 饲料报酬 猪肉产品 身体健康 澳大利亚

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪用生长激素脂质体对小鼠的促生长作用

19

作者 周俊 高海滨 +2 位作者 王冬梅 齐富刚 方希修 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第10期5885-5886,共2页

[目的]研究猪用生长激素(porcine somatotropin,PST)脂质体对小鼠的促生长作用与缓释效果。[方法]将试验小鼠随机分组,试验组小鼠分别腹腔注射PST纯品和PST脂质体,对照组腹腔注射生理盐水。分别于7、14和28 d后称重,计算小鼠增重率。[结... [目的]研究猪用生长激素(porcine somatotropin,PST)脂质体对小鼠的促生长作用与缓释效果。[方法]将试验小鼠随机分组,试验组小鼠分别腹腔注射PST纯品和PST脂质体,对照组腹腔注射生理盐水。分别于7、14和28 d后称重,计算小鼠增重率。[结果]试验组小鼠增重与对照组差异显著(P<0.05),表明PST和PST脂质体对小鼠有促生长作用,且PST脂质体具有明显的缓释效果。[结论]PST脂质体缓释期长达7 d以上,具有显著的促生长效果。 展开更多

关键词 猪生长激素 脂质体 缓释作用 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

动物生长激素及其应用 被引量：11

20

作者 沈建忠 《中国兽药杂志》 北大核心 2000年第5期49-53,共5页

畜牧业上使用的动物生长激素主要有牛生长激素 ( BST)和猪生长激素 ( PST)。现已证实人工合成的 BST具有促进奶牛泌乳的作用 ;人工合成的 PST具有明显的促进生长和提高瘦肉率作用。但是 ,动物生长激素的安全性和副作用值得重视。本文综... 畜牧业上使用的动物生长激素主要有牛生长激素 ( BST)和猪生长激素 ( PST)。现已证实人工合成的 BST具有促进奶牛泌乳的作用 ;人工合成的 PST具有明显的促进生长和提高瘦肉率作用。但是 ,动物生长激素的安全性和副作用值得重视。本文综述了动物生长激素的作用与作用机理、安全性以及应用前景。 展开更多

关键词 牛生长激素 猪生长激素 作用机理 安全性 应用

在线阅读 下载PDF 职称材料