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活性位点邻近的?-loop对胰蛋白酶热稳定性和活性的影响
被引量：
4
1
作者
杜坤
甘一如
黄鹤
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期657-662,共6页
以猪源胰蛋白酶作为研究对象,尝试利用删除猪源胰蛋白酶活性位点邻近?-loop的方法来提高其热稳定性和活性。首先通过Gromacs v4.5.5分子动力学模拟软件,预测出了胰蛋白酶的柔性区Fragment 41~46(即?-loop所在区域)。然后根据删除?-loop...
以猪源胰蛋白酶作为研究对象,尝试利用删除猪源胰蛋白酶活性位点邻近?-loop的方法来提高其热稳定性和活性。首先通过Gromacs v4.5.5分子动力学模拟软件,预测出了胰蛋白酶的柔性区Fragment 41~46(即?-loop所在区域)。然后根据删除?-loop结构中不同的氨基酸数目,确立了三个突变R1Q、K3Q及C5Q;通过重叠延伸PCR技术构建突变菌株,发酵表达后,进行了酶热稳定性和活性分析。结果表明,R1Q、K3Q及C5Q的活性在一定程度上均有提高,在热稳定性上R1Q和K3Q有所提高,C5Q有所下降,其中R1Q突变体酶的最高活性较野生型提高了1.42倍,同时,失活半衰期和最适反应温度较野生型也分别提高了213.3 min和11.8℃。实验结果证明,在删除该?-loop中的异亮氨酸后,得到了突变型R1Q酶,成功实现酶双功能的共同进化。该策略有潜力应用于其他工业酶分子的热稳定性和活性改造,为推动生物酶的工业化应用奠定基础。
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关键词
猪源胰蛋白酶
Ω-loop
理性设计
热稳定性
活性
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职称材料
题名
活性位点邻近的?-loop对胰蛋白酶热稳定性和活性的影响
被引量：
4
1
作者
杜坤
甘一如
黄鹤
机构
天津大学化工学院生物工程系
出处
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期657-662,共6页
基金
国家自然科学基金(31470967)
国家科技重大专项(2011ZX09201-301-05
2014ZX09508006-002-002)
文摘
以猪源胰蛋白酶作为研究对象,尝试利用删除猪源胰蛋白酶活性位点邻近?-loop的方法来提高其热稳定性和活性。首先通过Gromacs v4.5.5分子动力学模拟软件,预测出了胰蛋白酶的柔性区Fragment 41~46(即?-loop所在区域)。然后根据删除?-loop结构中不同的氨基酸数目,确立了三个突变R1Q、K3Q及C5Q;通过重叠延伸PCR技术构建突变菌株,发酵表达后,进行了酶热稳定性和活性分析。结果表明,R1Q、K3Q及C5Q的活性在一定程度上均有提高,在热稳定性上R1Q和K3Q有所提高,C5Q有所下降,其中R1Q突变体酶的最高活性较野生型提高了1.42倍,同时,失活半衰期和最适反应温度较野生型也分别提高了213.3 min和11.8℃。实验结果证明,在删除该?-loop中的异亮氨酸后,得到了突变型R1Q酶,成功实现酶双功能的共同进化。该策略有潜力应用于其他工业酶分子的热稳定性和活性改造,为推动生物酶的工业化应用奠定基础。
关键词
猪源胰蛋白酶
Ω-loop
理性设计
热稳定性
活性
Keywords
porcine trypsin
Ω-loop
rational design method
thermostability
activity
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
活性位点邻近的?-loop对胰蛋白酶热稳定性和活性的影响
杜坤
甘一如
黄鹤
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017
4
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