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空置猪场的猪流行性腹泻病毒检测 被引量：1
1
作者 李阳 张越 +6 位作者 路浩 邢金超 李振坤 董芳婷 徐盟龙 袁晋 魏战勇 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期7-12,共6页
为探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)在规模化养殖场环境中的分布规律,制定精准有效的猪场生物安全防控措施,采用实时荧光定量PCR方法,对采集自河南省信阳市某空置6个月猪场的366份环境样品进行了PEDV核酸检测。结果显示,该猪场环境样品中有12... 为探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)在规模化养殖场环境中的分布规律,制定精准有效的猪场生物安全防控措施,采用实时荧光定量PCR方法,对采集自河南省信阳市某空置6个月猪场的366份环境样品进行了PEDV核酸检测。结果显示,该猪场环境样品中有124份PEDV核酸阳性,总体阳性率为33.88%;不同区域PEDV检出率由高到低依次为排污系统50.00%(4/8)、猪舍环境33.92%(116/342)、洗消中心25.00%(4/16);值得注意的是,洗消中心的减速带、猪舍环境内的漏粪地板及排污系统的粪沟检出率均为100%。结果表明,该猪场清洗消毒空置6个月后仍有大量PEDV核酸残留。总体来说,研究发现了猪场清洗消毒的部分盲区,讨论了病毒残留点和猪场建设规划,以及空气、饲料和环境等因素间的关系,指出了猪场现有清洗流程的漏洞,为猪场建立完善的生物安全防控体系提供了参考。 展开更多
关键词 空置猪场 猪流行性腹泻病毒 猪场环境 清洗消毒盲区
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基于RT-RAA-CRISPR/Cas13a的猪流行性腹泻病毒检测方法的建立与初步应用
2
作者 郑江涛 刘哲言 +2 位作者 王永富 青易 朱玲 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第4期1034-1042,共9页
【目的】开发一种针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的高特异性、高灵敏度且便捷的检测方法。【方法】结合重组酶辅助扩增(RAA)技术与CRISPR-Cas13a系统,针对PEDV的M基因设计RT-RAA引物、CRISPR RNA及报告探针。通过优化反应条件,构建具备双... 【目的】开发一种针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的高特异性、高灵敏度且便捷的检测方法。【方法】结合重组酶辅助扩增(RAA)技术与CRISPR-Cas13a系统,针对PEDV的M基因设计RT-RAA引物、CRISPR RNA及报告探针。通过优化反应条件,构建具备双读数功能的RT-RAA-CRISPR/Cas13a可视化平台,并对其检测能力进行了评估。【结果】该方法可特异性检测PEDV,与猪德尔塔冠状病毒、猪瘟病毒、猪轮状病毒、猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应,且检测灵敏度达到1 copy/µL;与行业标准RT-qPCR方法的检测结果相比,其符合率达到100%。【结论】建立的RT-RAA-CRISPR/Cas13a可视化检测方法可在1 h内完成对PEDV的检测,为快速现场诊断和防控提供了有力的技术保障。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 反转录-重组酶介导等温核酸扩增技术 规律间隔成簇短回文重复序列-关联蛋白13a 可视化检测
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猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展
3
作者 原慧 冯丽丽 《今日养猪业》 2025年第2期1-3,共3页
【目的】探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)的病原学特性、流行病学特征以及有效的检测方法,以应对该病毒对生猪养殖业造成的严重影响。【方法】采用文献研究法,综合分析当前国内外关于猪流行性腹泻病毒的病原学、流行病学以及检测方法的最新... 【目的】探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)的病原学特性、流行病学特征以及有效的检测方法,以应对该病毒对生猪养殖业造成的严重影响。【方法】采用文献研究法,综合分析当前国内外关于猪流行性腹泻病毒的病原学、流行病学以及检测方法的最新研究成果。【结果】猪流行性腹泻病毒以高致死率危害仔猪,对我国生猪养殖业造成了巨大的经济损失。截至目前,尚未研发出治疗的特效药物和疫苗。因此,加强日常筛查,及时发现并预防猪流行性腹泻病毒的感染成为防控工作的关键。【结论】结合当前猪流行性腹泻的流行态势,建议采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)等多种检测方法,从而实现早发现、早预防的目标。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 PED 检测方法
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上海市某腹泻猪群猪流行性腹泻病毒检测及全基因序列分析 被引量：1
4
作者 康龙山 于慧茹 +6 位作者 杨德全 李鑫 沈海潇 杨显超 王建 徐丽娜 葛菲菲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期175-181,共7页
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的仔猪严重腹泻性疾病,传播快,发病急,死亡率高,给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻,发病率为30%~50%,死亡率为20%~30%,猪群之前进行过疫苗免疫。粪... 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的仔猪严重腹泻性疾病,传播快,发病急,死亡率高,给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻,发病率为30%~50%,死亡率为20%~30%,猪群之前进行过疫苗免疫。粪便样本经猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)荧光RT-PCR检测,结果显示:PEDV检测为阳性,TGEV和RV检测均为阴性。经全基因测序后进行系统进化分析,结果显示:全基因序列属于GⅡ-c亚群,S基因序列属于GⅡ-b亚群,与目前的经典疫苗株CV777和变异株AJ1102相比,CV777的全基因和S基因都属于GⅠ-b群,AJ1102的全基因和S基因都属于GⅡ-b亚群,研究结果表明新基因型的PEDV已在上海地区流行,而传统疫苗株无法提供好的免疫效果,提示新的防控策略的制定和有针对性的疫苗的生产和使用,对于预防PEDV感染和流行有重要意义。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 系统进化 S基因
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猪流行性腹泻病毒检测方法的研究进展 被引量：2
5
作者 付明山 王海锋 +5 位作者 贾伟娟 包雨鑫 朱广霞 吕宗林 李偲 宋磊 《畜牧兽医科技信息》 2024年第6期68-71,共4页
猪流行性腹泻病毒是一种可以引起仔猪以急性腹泻、脱水、呕吐为主要症状的高度接触性传染性疾病,严重威胁生猪健康。由于该病在临床上与其他致仔猪腹泻的病毒性疾病症状极为相似,因此需要根据不同的情形选择不同的实验室方法对其加以诊... 猪流行性腹泻病毒是一种可以引起仔猪以急性腹泻、脱水、呕吐为主要症状的高度接触性传染性疾病,严重威胁生猪健康。由于该病在临床上与其他致仔猪腹泻的病毒性疾病症状极为相似,因此需要根据不同的情形选择不同的实验室方法对其加以诊断,尽早切断传染源,以减少该病对养猪业造成的经济损失。由此,建立快速、准确的检测方法对防控猪流行性腹泻尤为重要。本文就猪流行性腹泻病毒的病原及相关的检测方法展开综述,以期为该病毒的诊断、检测及防控提供理论支撑。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 病原 检测方法
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猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展 被引量：1
6
作者 史大庆 徐少珠 +2 位作者 张国丽 肖永珍 齐冬梅 《广东畜牧兽医科技》 2024年第1期51-56,共6页
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epi⁃demic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病,以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征,给养猪业带来严重的经济损失。及时准... 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epi⁃demic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病,以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征,给养猪业带来严重的经济损失。及时准确地诊断PEDV感染对于预防和控制PED至关重要,目前已经开发了许多用于PEDV、病毒蛋白及核酸的检测方法,包括病毒分离、酶联免疫吸附试验、直接免疫荧光检测、免疫组织化学技术、免疫层析技术等免疫学方法;RT⁃PCR、实时定量RT⁃PCR、核酸等温扩增技术、CRISPR⁃Cas系统检测技术等分子生物学方法。本文针对PEDV的抗原检测技术和方法进行综述,以期为PEDV的临床监测和PED的防控提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 猪流行性腹泻病毒 检测技术
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2011年-2014年广西猪流行性腹泻病毒检测及其M基因的序列分析 被引量：21
7
作者 卢冰霞 秦毅斌 +12 位作者 何颖 李莹莹 梁家幸 黎珂钰 李斌 苏乾莲 周英宁 蒋冬福 卢敬专 闭炳芬 梁保忠 段群棚 赵武 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期549-557,共9页
本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV M基因进行克... 本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV M基因进行克隆和测序,将测序结果与GenBank中PEDV参考毒株的M基因序列进行同源性比对分析并构建系统进化树。25个PEDV M基因序列与51个参考毒株M基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.9%、94.3%~99.6%。PEDV M基因遗传变异分析结果表明,广西2013年—2014年的PEDV流行毒株与北京、安徽、武汉、河北、广东等地2010年—2013年的流行毒株亲缘关系较近,而与中国早期分离株CH/S（GenBank登录号：JN547228）、疫苗株CV777（GenBank登录号：AF353511）和Attenuated DR13（GenBank登录号：JQ023162）的遗传距离较远。提示广西现流行的PEDV与早期毒株相比已发生较为明显的变异。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) M基因 遗传变异
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猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展 被引量：13
8
作者 庄金秋 梅建国 +2 位作者 王金良 沈志强 丁壮 《中国兽药杂志》 2013年第4期65-69,共5页
介绍了猪流行性腹泻病毒实验室检测方法的研究进展,在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查等检测方法;在分子生物学方面,主要依靠核酸杂交技术、RT-PCR法和实时荧光定量RT-PCR法等检... 介绍了猪流行性腹泻病毒实验室检测方法的研究进展,在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查等检测方法;在分子生物学方面,主要依靠核酸杂交技术、RT-PCR法和实时荧光定量RT-PCR法等检测方法。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床兽医科技工作者提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 检测 研究进展
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福建省猪流行性腹泻病毒检测与S基因遗传变异分析
9
作者 王隆柏 吴晓鸣 +4 位作者 王晨燕 车勇良 吴学敏 陈如敬 周伦江 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第7期625-630,共6页
为了解猪流行性腹泻（PED） 在福建省的流行和流行毒株S基因的变异情况,对2011-2014 年采自117个规模猪场的295份疑似PED 的病料进行检测,对14株具有代表性的PEDV 毒株进行S基因序列分析.结果显示,2011-2014年病料阳性率分别为87.30%、7... 为了解猪流行性腹泻（PED） 在福建省的流行和流行毒株S基因的变异情况,对2011-2014 年采自117个规模猪场的295份疑似PED 的病料进行检测,对14株具有代表性的PEDV 毒株进行S基因序列分析.结果显示,2011-2014年病料阳性率分别为87.30%、75.00%、40.91% 和34.15%,总阳性率为69.49%,虽然PED 阳性率在福建省有下降趋势,但仍较高.基因序列分析表明福建省14株PEDV 分离株S基因核苷酸之间的同源性分别为98.5%～100.0%,与国内其他毒株之间的同源性为93.3%～99.5%,其中与国内2009年以前流行的PEDV 毒株的同源性较低;与2008年泰国NPPED2008_2 株的同源性分别为95.8% ～96.1%;与CV777标准株的同源性为93.8%～94.1%.分离毒株的S基因片段氨基酸存在多个位点突变、插入和缺失现象.遗传进化树表明14 株PEDV 分离株与2008 年泰国NPPED2008 _2 毒株和2009 年韩国毒株亲缘关系较近, 与attenuatedDR13弱毒株及CV777标准株亲缘关系比较远.14株PEDV 的S基因序列已登陆Genbank. 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 检测 S基因 变异分析
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2013-2014年黑龙江地区猪流行性腹泻病毒检测及M基因的遗传进化分析
10
作者 刘佳丽 王梓 +7 位作者 赵莉 王瑞翀 李一经 王丽 唐丽杰 徐义刚 刘敏 乔薪瑗 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第8期7-9,共3页
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种严重的病毒性传染病。本试验于2013 2014年在黑龙江省6个地级市的10个规模化猪场采集新生哺乳仔猪临床表现为腹泻症状的粪便与小肠,进行RT-PCR检测,表明PEDV检出率为56%,PEDV+TGEV检... 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种严重的病毒性传染病。本试验于2013 2014年在黑龙江省6个地级市的10个规模化猪场采集新生哺乳仔猪临床表现为腹泻症状的粪便与小肠,进行RT-PCR检测,表明PEDV检出率为56%,PEDV+TGEV检出率为6%,PRV检出率为10%,TGEV检出率为10%,结果表明,引起黑龙江省规模化猪场新生仔猪腹泻的主要病原是PEDV,同时也存在与其他腹泻病毒的混合感染。针对阳性病料扩增出的6株PEDV的M基因序列进行遗传进化分析,6株PEDV-M基因序列之间的核苷酸同源性为98.2%~99%,与疫苗株CV777的核苷酸同源性为97.6%~98.2%。利用MEGA 6.0构建遗传进化树,结果显示,扩增出的6条PEDV-M基因的遗传进化树分为两大系,大部分遗传距离较近,处于同一分支。其中LJJHD-M-13和LJJQ-M-14与泰国KU06RB08、泰国KU07RB08的亲缘关系较近,LJJC-M-14、LJJJ-M-14、LJJH-M-13、LJMM-M-14这4株毒株与韩国M1595、韩国CPF259的亲缘关系较近。同时扩增出的6条PEDV-M基因与CV777毒株非一系,与其亲缘关系较远,说明这些地区的PEDV流行毒株已经发生变异,形成了独特的流行进化分支。因此,本试验通过对变异毒株基因序列进行分析,以期为研制新的疫苗和预防控制该病提供实验数据和理论基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 M基因 序列分析 遗传进化分析
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猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展 被引量：4
11
作者 芮聪杰 潘孝成 +2 位作者 沈学怀 赵瑞宏 张丹俊 《安徽农业科学》 CAS 2018年第25期22-25,共4页
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪急性高度接触性肠道传染病,主要临床症状表现为呕吐、水样腹泻、脱水等。近年来,PED在全球范围内暴发流行,使养猪业遭受巨大的经济损失。对猪流行性腹泻的检测方法(病毒的分离和鉴... 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪急性高度接触性肠道传染病,主要临床症状表现为呕吐、水样腹泻、脱水等。近年来,PED在全球范围内暴发流行,使养猪业遭受巨大的经济损失。对猪流行性腹泻的检测方法(病毒的分离和鉴定、免疫电镜法、免疫学检测法、分子生物学检测等)进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 检测技术 研究进展
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猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展
12
作者 欧阳艳 刘风光 李先富 《当代畜禽养殖业》 2018年第12期3-5,共3页
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的以水样腹泻为特征的急性、高度接触性肠道传染病。该病是造成我国猪群腹泻的主要病毒性病原之一,给我国的养猪业造成了极大的经济损失。论文基于国内外的相关研究进展,就猪流行性腹泻的检测方法... 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的以水样腹泻为特征的急性、高度接触性肠道传染病。该病是造成我国猪群腹泻的主要病毒性病原之一,给我国的养猪业造成了极大的经济损失。论文基于国内外的相关研究进展,就猪流行性腹泻的检测方法进行了详细的分析与梳理,供兽医研究人员参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 检测方法
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猪流行性腹泻病毒检测与S蛋白中和抗原表位基因分析 被引量：1
13
作者 丁卫星 王荣谈 +2 位作者 郭佳宏 廖学文 缪德年 《上海农业学报》 CSCD 2016年第1期19-22,共4页
应用RT-PCR对2015年江苏、安徽、山东9个猪场的腹泻样品(新鲜粪便、肠道组织等)进行PEDV和TGV检测,并对检测到的一株PEDV(CHNJPK2015)的纤突蛋白中和抗原表位基因进行克隆测序和遗传进化分析。结果表明:9个猪场PEDV检测阳性率为100%,PED... 应用RT-PCR对2015年江苏、安徽、山东9个猪场的腹泻样品(新鲜粪便、肠道组织等)进行PEDV和TGV检测,并对检测到的一株PEDV(CHNJPK2015)的纤突蛋白中和抗原表位基因进行克隆测序和遗传进化分析。结果表明:9个猪场PEDV检测阳性率为100%,PEDV个体阳性率为63.89%,TGEV均未检出,说明本次流行的仔猪腹泻病主要是由PEDV感染引起的。所测毒株与参考毒株可分为3个群,CHNJPK2015株与AVCT12、Br1/87、CHM2013、LZC、SM98等毒株的S蛋白中和抗原表位基因的遗传距离较近,核苷酸序列同源性达99.5%—99.8%,处于同一群;而与2014年中国各地分离的CH/GDZQ/2014、FJ-FQ 2014、FJ-ZP 2014、PEDV-LY、PEDV-WS、PZ1406、SC1402、SH1404和疫苗株CV777序列的遗传距离较远,核苷酸序列同源性为92.9%—96.2%,处于不同的群。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 进化树
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猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展 被引量：7
14
作者 栾宇轩 《畜牧兽医杂志》 2020年第4期49-53,共5页
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起急性、高传染性肠道疾病的主要病原之一,造成哺乳仔猪高发病率(80%~100%)和高死亡率(50%~90%),极大地影响了养猪业的发展。因此,建立PEDV准确、快速的检测方法对于有效防... 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起急性、高传染性肠道疾病的主要病原之一,造成哺乳仔猪高发病率(80%~100%)和高死亡率(50%~90%),极大地影响了养猪业的发展。因此,建立PEDV准确、快速的检测方法对于有效防控该病毒至关重要。本文基于国内外的研究进展,综述了PEDV病原、流行病学、病原学和血清学检测方法及其主要优缺点,以期为PEDV的早期诊断及防控提供参考,保障我国养猪业平稳发展。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 病原学 血清学 检测
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猪流行性腹泻病毒检测方法的研究进展 被引量：7
15
作者 吴纪芬 《中国畜牧业》 2023年第20期57-58,共2页
近年来,猪流行性腹泻病毒对养猪业造成了严重影响。为了有效防控疫情,病毒检测方法取得了显著的进展。文章从流行病学、病毒基因组结构、病原学检测方法、分子生物学、免疫学和血清学等方面对猪流行性腹泻病毒检测方法进行概述。实时荧... 近年来,猪流行性腹泻病毒对养猪业造成了严重影响。为了有效防控疫情,病毒检测方法取得了显著的进展。文章从流行病学、病毒基因组结构、病原学检测方法、分子生物学、免疫学和血清学等方面对猪流行性腹泻病毒检测方法进行概述。实时荧光定量PCR、RT-LAMP等分子生物学方法具有高灵敏度和特异性,适用于病原核酸检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 养猪业 流行病学 病原核酸检测 血清学 分子生物学方法 有效防控 实时荧光定量PCR
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猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展 被引量：1
16
作者 杨微微 《今日畜牧兽医》 2019年第11期28-28,共1页
猪流行性腹泻病毒是猪易感的病毒性传染病,主要引起消化道腹泻,仔猪感染后有很高的死亡率,是严重制约养猪业健康发展的重要病毒性传染病,本文主要介绍猪流行性腹泻病毒的几种实验室检测方法,为疾病的诊断和防控提供参考。
关键词 猪流行性腹泻 检测方法 研究进展
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猪流行性腹泻病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的制备
17
作者 冯平 符美静 +3 位作者 张磊 瞿军军 张艳 陈瑞 《现代畜牧科技》 2025年第9期29-32,共4页
为开发针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的高效诊断试剂,该试验通过制备预包被微孔板和酶标抗体,研发出猪流行性腹泻病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒,并开展特异性试验、中和活性试验和临床诊断试验,验证试剂盒性能。结果表明,该试剂盒制备的单... 为开发针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的高效诊断试剂,该试验通过制备预包被微孔板和酶标抗体,研发出猪流行性腹泻病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒,并开展特异性试验、中和活性试验和临床诊断试验,验证试剂盒性能。结果表明,该试剂盒制备的单克隆抗体特异性良好,仅与PEDV相关毒株反应呈阳性,与其他毒株及细胞无交叉反应;各单克隆抗体对不同PEDV毒株有较高中和活性,如PEDV-Mabs-2D5对PEDV-KB2013-4株中和效价达1∶2048;试剂盒最低检出量为1∶256,特异性符合率100%,临床检测结果与预期相符。该试验制备的猪流行性腹泻病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒特异性强、灵敏度高,对于判断猪场PEDV感染情况和评估猪瘟疫苗免疫状况意义重大,为PEDV防控提供了有效检测手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 特异性试验 ELISA抗体检测
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猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立
18
作者 李慧敏 雷铭楷 +3 位作者 阮胜男 李盼盼 李文涛 何启盖 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4572-4580,共9页
本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双... 本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双抗体夹心法,结合荧光微球免疫层析技术,以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles,TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针,以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线),组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条。分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性。结果显示:本方法灵敏度高,最低检测限达103.1 TCID50·mL^(-1),较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍。且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系,可用于PEDV的定量检测。本方法操作简单、耗时短,检测时间为15 min。方法学验证显示,试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应,特异性良好。试纸条的批内、批间变异系数均小于10%,重复性良好。50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96%,方法一致性高。本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法,为临床中PEDV的快速检测提供了工具。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 时间分辨荧光微球 免疫层析法 定量检测
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猪流行性腹泻病毒临床感染仔猪肠道组织中血管紧张素转化酶2的检测及其与肠道病理变化的关系分析
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作者 李志强 陈雪清 张源淑 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3463-3473,共11页
血管紧张素转化酶2(ACE_(2))可参与机体多种组织器官的功能调节,特别是在维持肠道稳态中的作用已趋于共识,但在动物冠状病毒尤其是在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染中的作用仍不清晰。通过分析ACE_(2)与PEDV临床感染仔猪小肠组织中的病理... 血管紧张素转化酶2(ACE_(2))可参与机体多种组织器官的功能调节,特别是在维持肠道稳态中的作用已趋于共识,但在动物冠状病毒尤其是在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染中的作用仍不清晰。通过分析ACE_(2)与PEDV临床感染仔猪小肠组织中的病理变化关系,研究ACE_(2)与PEDV感染的相关性。以PED临床感染仔猪为研究对象,分离、截取十二指肠、空肠和回肠等组织,采用PCR、组织病理学、Western blot、RT-qPCR和Spearman相关性分析等方法,明确PEDV感染及在小肠组织中的表达分布,观察小肠组织病理变化,分析小肠组织中ACE_(2)与IFN-α及相关因子的表达变化,探讨ACE_(2)与PEDV感染的作用关系。结果表明,仔猪小肠组织中有PEDV感染且多分布于空肠和回肠;PEDV感染引起小肠上皮细胞坏死、脱落,肠绒毛萎缩、变短等不同程度的病变;小肠组织中Ang II与促炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-1β的含量均显著升高,Ang(1-7)与抗炎性因子TGF-β1和IL-10的含量均显著降低;ACE_(2)、MasR与IFN-α蛋白及其介导的ISG15、ISG54和ISG56 mRNA的表达均显著下调,ACE、AT1R蛋白的表达均显著上调;PEDV感染与ACE_(2)-Ang(1-7)-MasR轴呈负相关,与ACE-Ang II-AT1R轴呈正相关,与IFN-α表达呈负相关,而ACE_(2)与IFN-α表达呈正相关。结果提示,PEDV感染诱发仔猪肠道炎症病变,小肠中IFN-α及其介导的ISGs的表达均被抑制;肠道局部存在肾素血管紧张素系统(RAS)所有成员,其中的两条通路共同参与了PEDV致仔猪肠道的炎性损伤过程,表现为ACE-Ang II-AT1R轴被激活,ACE_(2)-Ang(1-7)-MasR轴被抑制;ACE_(2)与PEDV感染及其诱发的干扰素应答存在密切相关性。 展开更多
关键词 血管紧张素转化酶2 猪流行性腹泻病毒 小肠 干扰素 肠道炎症
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猪流行性腹泻病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立
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作者 仇德洋 王海燕 +3 位作者 郑佳 杜建才 陈昭 李桂梅 《中国动物检疫》 2025年第7期90-95,共6页
为开发一种可靠、简易、便捷的现场猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,基于反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,建立了用于现场检测PEDV的RT-RAA-LFD方法。根据PEDV N基因保守序列进行引物和探针设计,通过试验优选... 为开发一种可靠、简易、便捷的现场猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,基于反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,建立了用于现场检测PEDV的RT-RAA-LFD方法。根据PEDV N基因保守序列进行引物和探针设计,通过试验优选出一套引物及一条探针,同时对RT-RAA反应时间和温度条件进行优化。优化后的方法在37℃恒温反应15 min,即可实现对PEDV目的基因片段的有效扩增;与其他常见腹泻病毒无交叉反应,最低检测限为1.23×10^(1) copies/μL;对134份临床样品进行检测,阳性检出率为5.97%,与国标检测方法结果一致。结果表明,本研究建立的PEDV RT-RAA-LFD检测方法操作简便,结果特异、灵敏,不需要专业的实验室设备和实验人员,适用于在资源有限地区对PEDV的检测,能够满足基层临床工作人员的需求。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 重组酶介导等温扩增 侧向层析试纸条
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