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儿茶提取物对猪流行性腹泻病毒感染幼龄仔猪结肠的保护作用
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作者 李欢欢 余晨敏 +7 位作者 田晓榕 李瑞 李宗云 张焱焱 赵迪 王蕾 侯永清 吴涛 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1360-1369,共10页
【目的】以7日龄仔猪为研究对象,探究儿茶提取物(TCE)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染幼龄仔猪结肠的保护效果及机制。【方法】将体重相近的18头幼龄仔猪随机分为3组:对照组、PEDV组和TCE+PEDV组,每组6头猪。试验周期11 d,0~3 d为适应期,4... 【目的】以7日龄仔猪为研究对象,探究儿茶提取物(TCE)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染幼龄仔猪结肠的保护效果及机制。【方法】将体重相近的18头幼龄仔猪随机分为3组:对照组、PEDV组和TCE+PEDV组,每组6头猪。试验周期11 d,0~3 d为适应期,4~11 d为试验期。试验期对照组和PEDV组仔猪灌服人工奶,TCE+PEDV组仔猪灌服含有TCE(0.01 g/kg BW)的人工奶;试验第8天PEDV组及TCE+PEDV组仔猪灌服3 mL 10^(6) TCID _(50)/0.1 mL PEDV,对照组仔猪灌服3 mL DMEM培养基。试验第11天将所有仔猪麻醉后屠宰,采集仔猪结肠组织,测定TCE对PEDV感染仔猪结肠形态结构、抗氧化能力、炎性因子及离子通道相关基因表达的影响。【结果】与对照组相比,PEDV组仔猪结肠组织形态受损,隐窝深度显著增加(P<0.05);灌服TCE可有效缓解PEDV感染导致的仔猪结肠损伤,与PEDV组相比,TCE+PEDV组仔猪结肠隐窝深度显著变浅(P<0.05)。与对照组相比,PEDV感染组仔猪结肠中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05);与PEDV组相比,TCE+PEDV组仔猪结肠GSH-Px、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)活性均无显著变化(P>0.05)。PEDV感染后可检测到仔猪结肠组织内PEDV M、N、S基因表达,且干扰素(IFN)信号通路相关基因ISG 15、IRF 7,炎性因子基因IL-1β、IL-8、REG 3 G及离子通道相关基因AQP 10、APOB及MMP 13表达量均显著上调(P<0.05),IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05);与PEDV组相比,TCE+PEDV组仔猪结肠中PEDV M、N、S基因及ISG 15、IL-1β、IL-8、REG 3 G、IRF 7、APOB、MMP 9基因表达量均显著下调(P<0.05),IFN-β基因表达量显著上调(P<0.05)。【结论】PEDV感染导致幼龄仔猪结肠组织黏膜损伤,灌服0.01 g/kg BW的TCE可缓解PEDV感染导致的结肠组织受损。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒(PEDV) 儿茶提取物 结肠 炎症反应
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猪流行性腹泻病毒感染仔猪空肠转录组差异表达分析
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作者 李栋梁 郑关民 +2 位作者 李帅 朱洪森 吴超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2652-2661,共10页
旨在分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪空肠组织的转录组差异。用PEDV毒株HB(G2b)感染3头2日龄仔猪,对感染后18 h仔猪空肠组织进行免疫组化、转录组测序和分析,最后采用荧光定量PCR(RT-qPCR)验证转录组结果。结果显示:仔猪感染PEDV 1... 旨在分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪空肠组织的转录组差异。用PEDV毒株HB(G2b)感染3头2日龄仔猪,对感染后18 h仔猪空肠组织进行免疫组化、转录组测序和分析,最后采用荧光定量PCR(RT-qPCR)验证转录组结果。结果显示:仔猪感染PEDV 18 h后空肠绒毛明显脱落、变短,且PEDV主要分布于空肠肠绒毛表面;GO富集及KEGG富集分析的差异基因主要与免疫应答过程和炎症反应过程相关;富集在趋化因子受体相互作用、Toll受体信号、脂肪与糖代谢等。结果提示PEDV感染可激活宿主免疫反应及相关抗病毒信号通路,并且引起宿主的炎症风暴和营养代谢紊乱,为深入研究PEDV的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 转录组 致病机制
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仔猪回肠绒毛M细胞的形态、分布及其与猪流行性腹泻病毒感染的关系 被引量:4
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作者 李任峰 田香勤 +3 位作者 乔松林 郭军庆 周恩民 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期581-586,共6页
为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下P... 为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下PEDV与仔猪回肠绒毛M细胞之间的关系。免疫荧光结果证实正常仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,沿隐窝至绒毛顶端上皮方向,M细胞的数量逐渐减少。电镜下,正常仔猪的回肠绒毛M细胞具有典型的M细胞特征。自然感染PEDV的仔猪回肠绒毛M细胞病变明显,在其顶膜、细胞质、细胞核及其上皮下层均观察到成簇的PEDV颗粒,而相邻的其他上皮细胞病变不明显,且细胞内没有观察到病毒粒子。以上研究结果表明,新生仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,在绒毛的不同位置其分布比例存在差异。仔猪回肠绒毛M细胞可能是PEDV入侵肠道的重要通道。 展开更多
关键词 肠绒毛M细胞 新生仔 流行性腹泻病毒
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青海某猪场仔猪流行性腹泻病毒感染诊断与防控 被引量:1
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作者 张学勇 简莹娜 +2 位作者 许发芳 王朝风 朵红 《青海畜牧兽医杂志》 2022年第1期11-13,共3页
为确定青海某规模化猪场发生的仔猪腹泻、呕吐及死亡的致病原,以便于及时防治。本研究通过对腹泻呕吐死亡的仔猪进行解剖并无菌采样,利用细菌培养,以及基于腹泻相关的病原鉴定引物进行PCR检测分析。结果显示:未鉴定分离到腹泻相关细菌病... 为确定青海某规模化猪场发生的仔猪腹泻、呕吐及死亡的致病原,以便于及时防治。本研究通过对腹泻呕吐死亡的仔猪进行解剖并无菌采样,利用细菌培养,以及基于腹泻相关的病原鉴定引物进行PCR检测分析。结果显示:未鉴定分离到腹泻相关细菌病原,病毒PCR鉴定显示PEDV为阳性,未检测到其他病毒;本研究鉴定获得的PEDV序列与GenBank上传的变异株同源性为97.5%~99.5%,与PEDV经典毒株CV777同源性仅为95.4%。本研究表明该猪场本次发生的腹泻由猪流行性腹泻病毒感染引起;而且通过对该场猪群采取紧急处理措施,使该疫情得到了有效的控制,为猪流行性腹泻的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 流行性腹泻 病毒 诊断 防控
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L-亮氨酸对猪流行性腹泻病毒感染仔猪血液生化指标和空肠免疫相关基因mRNA水平的影响 被引量:4
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作者 谢佳倩 周颖 +6 位作者 张俊梅 徐海旺 李鹏 赵迪 王蕾 易丹 侯永清 《中国饲料》 北大核心 2017年第12期27-31,共5页
本试验旨在研究L-亮氨酸(Leu)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染幼龄仔猪血液指标和空肠免疫相关基因m RNA表达量的影响,探索Leu对PEDV感染仔猪应激的缓解作用。选用30头体重相近的7日龄PEDV阴性仔猪,随机分为3个处理组:对照组、PEDV组和PED... 本试验旨在研究L-亮氨酸(Leu)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染幼龄仔猪血液指标和空肠免疫相关基因m RNA表达量的影响,探索Leu对PEDV感染仔猪应激的缓解作用。选用30头体重相近的7日龄PEDV阴性仔猪,随机分为3个处理组:对照组、PEDV组和PEDV+Leu组,每个处理10个重复,每个重复一头猪。试验期10 d(7日龄~16日龄)。从第0天开始对PEDV+Leu组按2.8 g/kg体重饲喂Leu,而对照组和PEDV组均按4.1 g/kg体重饲喂L-丙氨酸。第7天早上对PEDV组和PEDV+Leu组采用口服的方式接种106.5TCID50的PEDV,同时对照组采用口服的方式接种等剂量的生理盐水,3 d后(16日龄)取血液和肠道样品。结果表明:与对照组相比,PEDV组仔猪血液中总胆红素(TBIL)水平、血小板分布宽度(PDW)及空肠黏膜CXCL11、REG3G m RNA表达量分别降低了20.92%、9.76%、56.00%、36.00%(P<0.05),血液中白细胞(WBC)和淋巴细胞(LYM)数量、磷酸丝氨酸、酪氨酸和色氨酸浓度,及空肠粘膜GSTO2和HSPH1 m RNA水平分别提高了61.68%、27.66%、30.39%、50.54%、64.00%、75.00%、89.00%(P<0.05);与PEDV组相比,PEDV+Leu组仔猪血液中组氨酸、天冬酰胺、尿素氮(BUN)浓度分别升高了55.43%、32.58%、83.33%(P<0.05),而二胺氧化酶(DAO)含量、单核细胞(MONO)、单核细胞比(Monocyte Ratio,MONOR)、磷酸丝氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、精氨酸、苏氨酸及空肠黏膜MX1和GSTO2 m RNA水平分别降低了28.80%、47.13%、43.87%、10.53%、42.12%、29.48%、29.82%、33.50%、32.11%、28.00%(P<0.05)。因此,日粮中添加Leu提高了PEDV感染仔猪的免疫功能,缓解了PEDV感染仔猪的应激。 展开更多
关键词 亮氨酸 流行性腹泻病毒 血液生化指标 免疫
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猪流行性腹泻病毒感染机制与防控措施 被引量:2
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作者 王博伟 《中国动物保健》 2023年第11期9-10,共2页
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒感染引起的猪的一种高度接触性消化道疾病。该病各个日龄的猪只都会感染,发病率高,致死率高,是目前为止影响最为严重的腹泻类疾病,对我国乃至全球的生猪养殖业都造成了毁灭性的损伤。为了有效降低猪流... 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒感染引起的猪的一种高度接触性消化道疾病。该病各个日龄的猪只都会感染,发病率高,致死率高,是目前为止影响最为严重的腹泻类疾病,对我国乃至全球的生猪养殖业都造成了毁灭性的损伤。为了有效降低猪流行性腹泻的发生率,掌握该病科学的防控策略,世界各国的科研人员和兽医工作者对该病的感染机制和防控措施进行了不懈的研究。本文结合近几年来猪流行性腹泻病毒的研究进展对该病的感染机制及综合防治措施进行综述。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 感染机制 防控措施
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单链抗体对猪流行性腹泻病毒感染仔猪腹泻保护作用初步研究
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作者 张凡庆 陈玉雪 +1 位作者 杨亮 朱建国 《猪业科学》 2018年第6期100-102,共3页
猪流行性腹泻病毒能够引起猪流行性腹泻,病猪临床表现为呕吐、腹泻和脱水,该病给我国养猪业造成了巨大的经济损失。通过初步研究实验室保存的抗PEDV的单链抗体(scFv)的生物学特性。首先将实验室保存的scFv质粒转化至原核表达载体进行表... 猪流行性腹泻病毒能够引起猪流行性腹泻,病猪临床表现为呕吐、腹泻和脱水,该病给我国养猪业造成了巨大的经济损失。通过初步研究实验室保存的抗PEDV的单链抗体(scFv)的生物学特性。首先将实验室保存的scFv质粒转化至原核表达载体进行表达和纯化。ELISA和免疫荧光实验证实scFv与特异的PEDV反应。最后将scFv预先灌服仔猪,证实能够抑制PEDV引起的感染,给仔猪提供保护。本研究为后续新型抗病毒制剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒(PEDV) 单链抗体(scFv) 预防感染
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套式PCR在猪流行性腹泻病毒感染病例诊断中的应用
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作者 耿岗 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期203-205,共3页
猪流行性腹泻是对养猪业危害较大的一种疾病,导致腹泻的原因多种多样,给临床诊断带来了困难。本研究将套式PCR技术成功应用于猪流行性腹泻临床病例的快速诊断中,旨在为猪流行性腹泻临床病例的快速鉴别诊断提供一种新的思路。
关键词 流行性腹泻 套式PCR 临床诊断
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在猪流行性腹泻病毒感染期测量粪肥深度的方法
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《猪业科学》 2014年第12期29-29,共1页
猪流行性腹泻病毒(PED)可长时间存活在病猪排出的粪便中。在经历了PED暴发的猪舍,生产者应避免将存储的粪便返回到地面上,它可以使PED易感猪受到感染,此观点源于密歇根州立大学Jerry May和Madonna Benjamin在密歇根州立大学猪肉季... 猪流行性腹泻病毒(PED)可长时间存活在病猪排出的粪便中。在经历了PED暴发的猪舍,生产者应避免将存储的粪便返回到地面上,它可以使PED易感猪受到感染,此观点源于密歇根州立大学Jerry May和Madonna Benjamin在密歇根州立大学猪肉季刊上发表的论文。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 病毒感染 粪肥 测量 州立大学 PED 生产者 粪便
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制粒对被猪流行性腹泻病毒感染的饲料的影响
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《猪业科学》 2017年第5期29-29,共1页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种对热敏感的病毒,由于PEDV病毒具有热敏感性,我们推测用蒸汽和制粒机模仿传统商业化的饲料热处理过程或许可以减轻PEDV的传染性。本试验设计了两种热处理方法通过定量反转录PCR和生物测定分析来探究制... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种对热敏感的病毒,由于PEDV病毒具有热敏感性,我们推测用蒸汽和制粒机模仿传统商业化的饲料热处理过程或许可以减轻PEDV的传染性。本试验设计了两种热处理方法通过定量反转录PCR和生物测定分析来探究制粒机采用不同的处理时间和温度是否会影响PEDV的数量和传染性。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 病毒感染 制粒机 饲料 PEDV 反转录PCR 热敏感性 热处理过程
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一例猪流行性腹泻病毒感染的诊断
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作者 王介刚 《中国动物保健》 2017年第11期44-46,共3页
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起猪的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病感染后的主要特征为呕吐、腹泻和脱水,各种年龄的猪都能感染发病,仔猪感... 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起猪的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病感染后的主要特征为呕吐、腹泻和脱水,各种年龄的猪都能感染发病,仔猪感染后危害最严重,死亡率最高。目前该病在我国猪场中的感染非常普遍,是危害仔猪健康的重要病毒性肠道传染病,给我国养猪业造成了严重的经济损失。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 病毒感染 肠道传染病 诊断 VIRUS 经济损失 接触性 死亡率
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SOX12基因在Vero细胞感染猪流行性腹泻病毒过程中的功能研究
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作者 向娇娇 元娜 +6 位作者 李慧慧 邵明珠 赵福平 张龙超 王立贤 石丽君 陈斌 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期289-297,共9页
[目的]探究SOX12基因对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,以期为抗PEDV育种提供有效分子标记。[方法]本研究合成3条SOX12基因干扰序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及其阴性对照(siNC)并转染至非洲绿猴... [目的]探究SOX12基因对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,以期为抗PEDV育种提供有效分子标记。[方法]本研究合成3条SOX12基因干扰序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及其阴性对照(siNC)并转染至非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),转染48 h后收集细胞,利用实时荧光定量PCR检测干扰效率。将有效的干扰片段和siNC分别转染至Vero细胞24 h后,用感染复数为0.05的PEDV感染细胞,分为4组:感染PEDV 12 h试验组(12 hpi-siRNA)、感染PEDV 12 h对照组(12 hpi-siNC)、感染PEDV 24 h试验组(24 hpi-siRNA)及感染PEDV 24 h对照组(24 hpi-siNC),利用实时荧光定量PCR检测PEDV N及SOX12基因的表达水平,通过Western blotting检测各组细胞PEDV N蛋白表达水平,利用组织半数感染量(50%tissue culture infective dose, TCID_(50))检测PEDV的病毒滴度,并利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)法检测各组细胞中PEDV复制情况。通过GeneMANIA网站预测SOX12基因的互作基因,利用实时荧光定量PCR检测抑制SOX12基因表达后其互作基因的表达变化。[结果]SOX12基因3条干扰片段的干扰效率为30%~60%,其中siRNA3干扰效率最高,可达60%。与12 hpi-siNC和24 hpi-siNC组相比,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组PEDV N基因的转录和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。病毒滴度表型测定结果表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV病毒滴度显著低于各自对照组(P<0.05);IFA结果也表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV复制明显少于对照组。基因互作预测及实时荧光定量PCR检测结果显示,与siNC组相比,干扰SOX12基因的表达后,其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达水平均显著降低(P<0.05)。[结论]本研究揭示了SOX12基因在PEDV感染Vero细胞过程中的调控作用,发现SOX12基因的下调表达能显著抑制PEDV复制和其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒(PEDV) SOX12基因 VERO细胞 基因干扰
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猪流行性腹泻病毒BZ01株的分离鉴定及培养特性研究
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作者 魏凤 张文通 +4 位作者 孟庆伟 吕素芳 王艳 张志亭 李峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期6-11,共6页
用已建立的RT-PCR方法对采集的疑似猪流行性腹泻病猪的粪便样品进行检测,选用Vero细胞分离培养检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性的样品,连续传3代后用RT-PCR方法鉴定,对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析,并用Vero细胞对分离毒体外培... 用已建立的RT-PCR方法对采集的疑似猪流行性腹泻病猪的粪便样品进行检测,选用Vero细胞分离培养检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性的样品,连续传3代后用RT-PCR方法鉴定,对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析,并用Vero细胞对分离毒体外培养所需的接毒时间、收毒时间、接毒剂量及胰蛋白酶浓度进行试验,筛选出该株PEDV体外培养最佳条件。结果表明,该分离株为G2b型,在Vero细胞增殖最佳接毒时间为培养24 h细胞长成单层时,最佳收毒时间为接毒后48 h,最佳接毒剂量为10%,最佳胰蛋白酶浓度为15μg/mL,研究结果可为PEDV的分离培养及提高病毒效价提供参考。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 分离 鉴定 培养特性
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猪流行性腹泻病毒感染猪小肠上皮细胞前后上清液外泌体提取及鉴定
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作者 展雨萱 仲震 +2 位作者 徐盼 李小芬 吴嘉韵 《猪业科学》 2025年第3期68-71,共4页
猪流行性腹泻是一种常见的肠道疾病,具有传染性、发病急等特点,其病因为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。该疾病通过直接接触传播,可感染各年龄阶段的猪只,临床主要表现为脱水、水样腹泻、呕吐等。病毒具有显著的组织嗜性,优先感染小肠上皮细胞... 猪流行性腹泻是一种常见的肠道疾病,具有传染性、发病急等特点,其病因为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。该疾病通过直接接触传播,可感染各年龄阶段的猪只,临床主要表现为脱水、水样腹泻、呕吐等。病毒具有显著的组织嗜性,优先感染小肠上皮细胞,对新生仔猪危害尤为严重,7日龄以下感染个体的病死率可超过80%。 展开更多
关键词 PEDV 流行性腹泻 上清液 外泌体
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空置猪场的猪流行性腹泻病毒检测
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作者 李阳 张越 +6 位作者 路浩 邢金超 李振坤 董芳婷 徐盟龙 袁晋 魏战勇 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期7-12,共6页
为探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)在规模化养殖场环境中的分布规律,制定精准有效的猪场生物安全防控措施,采用实时荧光定量PCR方法,对采集自河南省信阳市某空置6个月猪场的366份环境样品进行了PEDV核酸检测。结果显示,该猪场环境样品中有12... 为探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)在规模化养殖场环境中的分布规律,制定精准有效的猪场生物安全防控措施,采用实时荧光定量PCR方法,对采集自河南省信阳市某空置6个月猪场的366份环境样品进行了PEDV核酸检测。结果显示,该猪场环境样品中有124份PEDV核酸阳性,总体阳性率为33.88%;不同区域PEDV检出率由高到低依次为排污系统50.00%(4/8)、猪舍环境33.92%(116/342)、洗消中心25.00%(4/16);值得注意的是,洗消中心的减速带、猪舍环境内的漏粪地板及排污系统的粪沟检出率均为100%。结果表明,该猪场清洗消毒空置6个月后仍有大量PEDV核酸残留。总体来说,研究发现了猪场清洗消毒的部分盲区,讨论了病毒残留点和猪场建设规划,以及空气、饲料和环境等因素间的关系,指出了猪场现有清洗流程的漏洞,为猪场建立完善的生物安全防控体系提供了参考。 展开更多
关键词 空置 流行性腹泻病毒 场环境 清洗消毒盲区
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影响猪流行性腹泻病毒复制的关键lncRNA筛选及其功能验证
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作者 杨荔 杜小妹 +3 位作者 刘梦媛 吴圣龙 包文斌 吴正常 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期792-800,共9页
[目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。[方法]利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型,通过RNA-Seq进行lncRNA测... [目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。[方法]利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型,通过RNA-Seq进行lncRNA测序,筛选出影响PEDV复制的关键lncRNA;利用实时荧光定量PCR和核质分离检测lncRNA表达和细胞定位;构建RNA干扰载体并转染IPEC-J2细胞,通过病毒拷贝数测定、Western blotting、半数组织培养感染剂量(TCID_(50))以及间接免疫荧光试验(IFA)检测lncRNA表达对PEDV复制水平的影响。[结果]PEDV感染IPEC-J2细胞24 h时,细胞病变最为明显,成功构建细胞病变模型。与对照组相比,PEDV感染组中存在61个差异表达lncRNA,其中19个上调,42个下调,筛选出1个显著上调且差异倍数较大的lncRNA——lncMSTRG.10733.2。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,PEDV感染IPEC-J2细胞后,lncMSTRG.10733.2表达水平显著上调(P<0.05)。核质分离测定结果显示,lncMSTRG.10733.2主要分布在IPEC-J2细胞质中。成功构建了lncMSTRG.10733.2瞬时干扰IPEC-J2细胞,干扰效率为45.9%。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,lncRNA干扰后,PEDV-M基因mRNA相对表达量和PEDV N蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TCID_(50)测定结果显示,lncRNA干扰后PEDV滴度极显著上升(P<0.01);IFA结果显示,lncRNA干扰后IPEC-J2细胞中的PEDV N蛋白荧光分布水平明显增加。[结论]本研究基于高通量测序从细胞水平上筛选鉴定出1个与PEDV感染密切相关的lncRNA,其表达水平上调有利于提高猪对PEDV感染的抵抗能力。研究结果揭示了lncRNA在PEDV感染宿主过程中的重要作用,为今后制定PEDV的抗病育种工作策略和筛选分子标记物奠定基础。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒(PEDV) lncRNA IPEC-J2 病毒复制
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猪流行性腹泻病毒COE蛋白在TP309水稻细胞中的表达及纯化
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作者 陈金炫 史倩倩 +6 位作者 潘世源 陈恒耀 寇少康 楚红燕 张磊 张二芹 张改平 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期1-5,共5页
为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;... 为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;PCR鉴定阳性愈伤;阳性愈伤研磨后制成细胞并进行培养,阳性细胞经无糖诱导培养10 d后,Western blot鉴定表达COE蛋白;并利用Q阴离子层析和MMC阳离子层析纯化COE蛋白。结果显示,经潮霉素筛选获得73个新愈伤,PCR检测有50个阳性愈伤,阳性率约为68.49%,Western blot检测有15个水稻细胞株表达COE蛋白,COE蛋白经Q和MMC纯化后,其纯度达到50%左右。这些研究结果对制备猪流行性腹泻亚单位疫苗具有重要意义。 展开更多
关键词 流行性腹泻 COE蛋白 水稻愈伤 水稻植株 纯化
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猪流行性腹泻病毒S1蛋白的原核表达及其核酸适配体的筛选
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作者 张冬萱 王智豪 +3 位作者 乔岩 赵肖肖 范松杰 张超 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期839-850,共12页
本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD),并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体,为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采... 本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD),并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体,为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采用大肠杆菌原核表达系统,将PEDV-S1-CTD质粒与带有麦芽糖结合蛋白(MBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、反转录终止因子(NusA)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)四种促溶标签的原核表达载体pET21b连接,构建重组质粒pET21b-MBP-S1、pET21b-SUMO-S1、pET21b-NusA-S1、pET21b-GST-S1,将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21进行诱导表达,选择可溶性好且表达量高的rMBP-S1重组蛋白进行后续试验,Western blot结果显示该重组蛋白正确表达,间接免疫荧光试验(IFA)结果表明rMBP-S1能与细胞表面受体结合。随后经磁珠法筛选得到111条靶向rMBP-S1重组蛋白的候选DNA适配体,其中Apt-S1-3、Apt-S1-11富集程度最高,分别是18%和16.2%,酶联适配体吸附试验ELASA(enzyme-linked aptamer sorbent assays,ELASA)测定适配体Apt-S1-3的解离常数为2.09 nmol,并且该适配体不与rMBP蛋白、rMBP-gD蛋白、rMBP-GP5蛋白以及BSA蛋白发生交叉反应,表明该适配体具有高亲和力与高特异性。此外,使用在线软件Mfold分析适配体Apt-S1-3形成的二级结构,并且通过分子对接模拟,发现该适配体能够与靶标蛋白形成稳定的复合物。最后的间接免疫荧光试验表明适配体Apt-S1-3能够识别PEDV,流式细胞术试验证实该适配体能够抑制PEDV感染宿主细胞。本研究筛选得到的DNA适配体能够与猪流行性腹泻病毒S1-CTD蛋白高亲和力、高特异性结合,而且能够抑制猪流行性腹泻病毒感染细胞,为PEDV的靶向治疗和检测方法开发奠定基础。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 S1-CTD蛋白 磁珠法 核酸适配体 亲和力
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LncRNA 18850对猪流行性腹泻病毒复制的影响
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作者 余昕雅 何海健 +5 位作者 王磊 倪语晨 杜静 周莹珊 董婉玉 王晓杜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1366-1375,共10页
长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200 bp且缺乏蛋白质编码能力的RNA,已有研究表明lncRNA在病毒复制过程中具有重要的生物学作用。本研究分析了猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染细胞的lncRNA表达变化及其对PEDV复制的影响。转录组测序PED... 长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200 bp且缺乏蛋白质编码能力的RNA,已有研究表明lncRNA在病毒复制过程中具有重要的生物学作用。本研究分析了猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染细胞的lncRNA表达变化及其对PEDV复制的影响。转录组测序PEDV感染Vero-E6细胞24h的样品中lncRNA,构建lncRNA 18850过表达质粒,Western blot、qPCR以及TCID 50等方法分析lncRNA 18850过表达对PEDV复制的影响,转录组测序分析lncRNA 18850过表达的Vero-E6细胞差异基因表达,生物信息学分析lncRNA 18850靶向基因及差异蛋白互作关系。结果显示,PEDV感染Vero-E6细胞24和48 h lncRNA 18850的表达量均呈极显著上升(P<0.01);lncRNA 18850的过表达可显著促进PEDV的复制(P<0.05);LIF、IL11、EPHA2、CCND1、DUSP5、CCN 2基因与lncRNA 18850存在靶向关系。PEDV感染可上调Vero-E6细胞内lncRNA 18850的表达,lncRNA 18850可能通过靶向调控多个基因而促进病毒的复制,本研究为深入探析PEDV的复制机制及潜在靶向治疗策略提供了新的视角。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 流行性腹泻病毒 转录组测序 Apelin信号通路
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猪流行性腹泻病毒N蛋白功能研究进展
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作者 张婷 张晓爱 李文涛 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期114-118,共5页
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的一种肠道疾病,猪流行性腹泻病毒不断发生变异,疫苗没有明显预防效果。PEDV N蛋白在感染阶段可高水平表达,在参与病毒粒子组装、影响病毒复制、阻滞细胞周期、拮抗干扰素产生、与... 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的一种肠道疾病,猪流行性腹泻病毒不断发生变异,疫苗没有明显预防效果。PEDV N蛋白在感染阶段可高水平表达,在参与病毒粒子组装、影响病毒复制、阻滞细胞周期、拮抗干扰素产生、与细胞蛋白相互作用以逃避宿主免疫反应等方面发挥重要作用,其本身高度保守,长期以来被用作早期诊断试剂和疫苗开发抗原的最佳候选蛋白。论文主要对N蛋白结构及其在PEDV复制过程中的功能,N蛋白与宿主细胞相关因子相互作用等研究进展进行综述,为阐明PEDV致病机制、PED防控策略和新兽药研发等提供参考。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 N蛋白 结构 功能
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