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猪流行性腹泻疫苗研究进展 被引量：2
1
作者 邬沛伶 李依璇 +4 位作者 王浩杰 李亚菲 刘绍蒙 刘青芸 王湘如 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1042-1058,共17页
猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种传染性肠道疾病,可造成猪群暴发腹泻和初生仔猪大量死亡。2010年,高致病性的PEDV变异毒株出现并在全球范围内传播,... 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种传染性肠道疾病,可造成猪群暴发腹泻和初生仔猪大量死亡。2010年,高致病性的PEDV变异毒株出现并在全球范围内传播,已成为当前猪腹泻病的主要病原之一,对全球养猪业造成巨大损失。疫苗免疫是防控PED的最主要措施。现有PED商品化疫苗以传统灭活疫苗和弱毒疫苗为主。近年来,随着基因工程技术的发展,亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、重组活载体疫苗、转基因植物疫苗和核酸疫苗等的研究也都取得了突破性进展。由于PEDV变异频繁,不断给疫苗研发带来新的挑战,高效的疫苗研发平台及基因工程疫苗对未来PED防控至关重要。本文对PEDV的病原学特征和最新的疫苗研究进展进行了系统综述,并展望未来的疫苗发展方向,以期为有效防控PED提供参考依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 猪流行性腹泻病毒 灭活疫苗 弱毒疫苗 基因工程疫苗 核酸疫苗
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猪流行性腹泻病毒BZ01株的分离鉴定及培养特性研究
2
作者 魏凤 张文通 +4 位作者 孟庆伟 吕素芳 王艳 张志亭 李峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期6-11,共6页
用已建立的RT-PCR方法对采集的疑似猪流行性腹泻病猪的粪便样品进行检测,选用Vero细胞分离培养检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性的样品,连续传3代后用RT-PCR方法鉴定,对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析,并用Vero细胞对分离毒体外培... 用已建立的RT-PCR方法对采集的疑似猪流行性腹泻病猪的粪便样品进行检测,选用Vero细胞分离培养检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性的样品,连续传3代后用RT-PCR方法鉴定,对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析,并用Vero细胞对分离毒体外培养所需的接毒时间、收毒时间、接毒剂量及胰蛋白酶浓度进行试验,筛选出该株PEDV体外培养最佳条件。结果表明,该分离株为G2b型,在Vero细胞增殖最佳接毒时间为培养24 h细胞长成单层时,最佳收毒时间为接毒后48 h,最佳接毒剂量为10%,最佳胰蛋白酶浓度为15μg/mL,研究结果可为PEDV的分离培养及提高病毒效价提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分离 鉴定 培养特性
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空置猪场的猪流行性腹泻病毒检测
3
作者 李阳 张越 +6 位作者 路浩 邢金超 李振坤 董芳婷 徐盟龙 袁晋 魏战勇 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期7-12,共6页
为探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)在规模化养殖场环境中的分布规律,制定精准有效的猪场生物安全防控措施,采用实时荧光定量PCR方法,对采集自河南省信阳市某空置6个月猪场的366份环境样品进行了PEDV核酸检测。结果显示,该猪场环境样品中有12... 为探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)在规模化养殖场环境中的分布规律,制定精准有效的猪场生物安全防控措施,采用实时荧光定量PCR方法,对采集自河南省信阳市某空置6个月猪场的366份环境样品进行了PEDV核酸检测。结果显示,该猪场环境样品中有124份PEDV核酸阳性,总体阳性率为33.88%;不同区域PEDV检出率由高到低依次为排污系统50.00%(4/8)、猪舍环境33.92%(116/342)、洗消中心25.00%(4/16);值得注意的是,洗消中心的减速带、猪舍环境内的漏粪地板及排污系统的粪沟检出率均为100%。结果表明,该猪场清洗消毒空置6个月后仍有大量PEDV核酸残留。总体来说,研究发现了猪场清洗消毒的部分盲区,讨论了病毒残留点和猪场建设规划,以及空气、饲料和环境等因素间的关系,指出了猪场现有清洗流程的漏洞,为猪场建立完善的生物安全防控体系提供了参考。 展开更多
关键词 空置猪场 猪流行性腹泻病毒 猪场环境 清洗消毒盲区
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中药复方对蕨麻仔猪流行性腹泻治疗效果的研究
4
作者 刘立军 冯泰山 《畜牧兽医杂志》 2025年第4期95-98,共4页
为比较研究中药复方对蕨麻仔猪流行性病毒腹泻治疗效果,筛选并优化出最佳中药复方,代替该病对西药的依赖,从而避免抗生素等西药在猪体内大量残留,提高该病治疗效果。将具有清热解毒、祛湿止泻和一定抗菌消炎的复方中药组方优化后与病毒... 为比较研究中药复方对蕨麻仔猪流行性病毒腹泻治疗效果,筛选并优化出最佳中药复方,代替该病对西药的依赖,从而避免抗生素等西药在猪体内大量残留,提高该病治疗效果。将具有清热解毒、祛湿止泻和一定抗菌消炎的复方中药组方优化后与病毒唑治疗比较试验。从试验结果来看,中药复方Ⅰ组治疗效果最优秀,治疗总有效率高达90.00%,其中治疗效果明显有效率为75.00%,治疗无效率为10.00%。中药复方Ⅱ组试验数据次之,治疗总有效率高达80.00%,其中治疗效果明显有效率为60.00%,治疗无效率为20.00%。用病毒唑治疗相较中药复方效果不理想,其中总有效率为65.00%,效果明显有效率为25.00%,治疗无效率为35.00%,治疗总有效率显著低于复方中药组。中药复方治疗蕨麻仔猪流行性病毒性腹泻效果明显,这可能是各味中药相互配合,协同加强和提高机体各项生理机能,刺激机体特定细胞分泌免疫活性因子,增强免疫力,提高机体抗病毒能力,同时具有抗菌、抑菌的作用,防止细菌交叉感染,达到较好的治疗效果。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 中药复方 腹泻 治疗效果
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猪流行性腹泻疫苗研究进展
5
作者 张颖 林静 戈成 《天津农林科技》 2025年第1期39-43,共5页
猪流行性腹泻给养殖业造成严重的经济损失。文章介绍了目前猪流行性腹泻病毒的流行情况和猪流行性腹泻疫苗的研究进展,以期为猪流行性腹泻的防控提供参考。
关键词 猪流行性腹泻 疫苗 研究进展
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猪流行性腹泻病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展 被引量：1
6
作者 周敏 汤德元 +6 位作者 曾智勇 王彬 黄涛 胡雯雯 毛茵茗 周飘 何松 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2600-2612,共13页
猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的高度接触性传染病,主要症状为呕吐、水样腹泻、脱水和体重下降,哺乳仔猪感染后死亡率可高达100%,给全球养猪业带来了巨... 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的高度接触性传染病,主要症状为呕吐、水样腹泻、脱水和体重下降,哺乳仔猪感染后死亡率可高达100%,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。目前尚无有效的治疗药物,且其疫苗也存在一定的局限性。在病毒感染过程中,病毒蛋白与宿主蛋白通过相互作用,一方面促进病毒逃避宿主先天免疫以完成其复制,另一方面调节宿主免疫反应以抑制病毒感染。因此,鉴定病毒蛋白与宿主蛋白相互作用对于了解宿主对病毒感染的防御和病毒性传染病的发病机制至关重要,从而发现新的抗病毒靶点。本文详细阐述了PEDV感染过程中的病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用,总结了PEDV的致病机制,以期为设计有效的疫苗或药物来预防和控制PEDV的传播提供新思路。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 病毒蛋白 宿主蛋白 蛋白相互作用
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中药复方对猪流行性腹泻防治效果的研究进展
7
作者 刘爽 赵永兵 +2 位作者 胡修忠 徐瑞瑞 李筱雯 《现代畜牧兽医》 2025年第4期74-78,共5页
猪流行性腹泻(PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的疾病,主要影响仔猪,发病率和致死率极高。PEDV的变种株导致的疫情频发,现有的疫苗和药物对新变种毒株的控制效果不佳。中药复方因其具有多成分、多靶点的特性,为PED防治提供了新... 猪流行性腹泻(PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的疾病,主要影响仔猪,发病率和致死率极高。PEDV的变种株导致的疫情频发,现有的疫苗和药物对新变种毒株的控制效果不佳。中药复方因其具有多成分、多靶点的特性,为PED防治提供了新思路。中药复方可通过抗病毒、调节免疫功能和改善肠道微生态等多种机制,有效降低PED的致死率,缩短病程,促进体重恢复。中药复方的作用机制复杂,其研究和应用面临剂量控制和标准化的挑战。未来研究需要侧重于高通量筛选技术的应用、活性成分的鉴定以及中药复方的标准化生产,以确保其治疗效果的一致性和安全性。 展开更多
关键词 中药复方 猪流行性腹泻 猪流行性腹泻病毒
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猪流行性腹泻病毒感染仔猪空肠组织的转录组学分析
8
作者 曾德平 陆颖 +8 位作者 余科辰 卢峥朴 柏家果 秦秋英 隆美金 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期11-18,共8页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪可引起严重腹泻,导致肠道黏膜损伤、免疫功能低下。为探究PEDV感染仔猪空肠基因组转录水平的变化,筛选宿主免疫应答的差异表达基因,本研究收集PEDV感染仔猪的空肠组织,利用RNA-Seq技术进行转录组学测序... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪可引起严重腹泻,导致肠道黏膜损伤、免疫功能低下。为探究PEDV感染仔猪空肠基因组转录水平的变化,筛选宿主免疫应答的差异表达基因,本研究收集PEDV感染仔猪的空肠组织,利用RNA-Seq技术进行转录组学测序分析。RNA-seq结果显示,与正常未感染仔猪相比,PEDV感染仔猪存在339个显著差异表达基因(DEGs),其中182个上调基因,157个下调基因。GO分子功能结果显示,免疫相关差异表达基因主要与免疫球蛋白和受体结合、T细胞增殖等有关。KEGG通路富集结果显示,差异表达基因主要涉及TNF信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号通路、Janus激酶/信号转导与转录激活子信号通路以及RIG-I受体信号通路等;最后再利用qRT-PCR对差异表达基因进行验证,其结果与转录组学结果基本一致。本研究为进一步研究PEDV感染导致宿主免疫应答变化机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 转录组分析 差异表达 RNA-SEQ 先天免疫
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儿茶提取物对猪流行性腹泻病毒感染幼龄仔猪结肠的保护作用
9
作者 李欢欢 余晨敏 +7 位作者 田晓榕 李瑞 李宗云 张焱焱 赵迪 王蕾 侯永清 吴涛 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1360-1369,共10页
【目的】以7日龄仔猪为研究对象,探究儿茶提取物(TCE)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染幼龄仔猪结肠的保护效果及机制。【方法】将体重相近的18头幼龄仔猪随机分为3组:对照组、PEDV组和TCE+PEDV组,每组6头猪。试验周期11 d,0~3 d为适应期,4... 【目的】以7日龄仔猪为研究对象,探究儿茶提取物(TCE)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染幼龄仔猪结肠的保护效果及机制。【方法】将体重相近的18头幼龄仔猪随机分为3组:对照组、PEDV组和TCE+PEDV组,每组6头猪。试验周期11 d,0~3 d为适应期,4~11 d为试验期。试验期对照组和PEDV组仔猪灌服人工奶,TCE+PEDV组仔猪灌服含有TCE(0.01 g/kg BW)的人工奶;试验第8天PEDV组及TCE+PEDV组仔猪灌服3 mL 10^(6) TCID _(50)/0.1 mL PEDV,对照组仔猪灌服3 mL DMEM培养基。试验第11天将所有仔猪麻醉后屠宰,采集仔猪结肠组织,测定TCE对PEDV感染仔猪结肠形态结构、抗氧化能力、炎性因子及离子通道相关基因表达的影响。【结果】与对照组相比,PEDV组仔猪结肠组织形态受损,隐窝深度显著增加(P<0.05);灌服TCE可有效缓解PEDV感染导致的仔猪结肠损伤,与PEDV组相比,TCE+PEDV组仔猪结肠隐窝深度显著变浅(P<0.05)。与对照组相比,PEDV感染组仔猪结肠中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05);与PEDV组相比,TCE+PEDV组仔猪结肠GSH-Px、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)活性均无显著变化(P>0.05)。PEDV感染后可检测到仔猪结肠组织内PEDV M、N、S基因表达,且干扰素(IFN)信号通路相关基因ISG 15、IRF 7,炎性因子基因IL-1β、IL-8、REG 3 G及离子通道相关基因AQP 10、APOB及MMP 13表达量均显著上调(P<0.05),IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05);与PEDV组相比,TCE+PEDV组仔猪结肠中PEDV M、N、S基因及ISG 15、IL-1β、IL-8、REG 3 G、IRF 7、APOB、MMP 9基因表达量均显著下调(P<0.05),IFN-β基因表达量显著上调(P<0.05)。【结论】PEDV感染导致幼龄仔猪结肠组织黏膜损伤,灌服0.01 g/kg BW的TCE可缓解PEDV感染导致的结肠组织受损。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 儿茶提取物 结肠 炎症反应
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紧密连接蛋白CLDN4促进猪流行性腹泻病毒感染
10
作者 李程程 赵永祥 +6 位作者 曹秋霞 宋旭 李宇鹏 范宝超 郭容利 徐业芬 李彬 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2826-2835,共10页
紧密连接蛋白在多种病毒感染过程中起着重要作用,紧密连接蛋白4(claudin-4,CLDN4)是紧密连接蛋白家族中的主要成员之一,其在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染中作用尚不明确。为探索PEDV感染对CLDN4表达的... 紧密连接蛋白在多种病毒感染过程中起着重要作用,紧密连接蛋白4(claudin-4,CLDN4)是紧密连接蛋白家族中的主要成员之一,其在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染中作用尚不明确。为探索PEDV感染对CLDN4表达的影响以及CLDN4在PEDV感染中的作用,本研究通过荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测了PEDV感染后CLDN4的转录水平与蛋白表达情况。其次,构建了CLDN 4基因的真核表达质粒,设计了靶向CLDN 4的特异性干扰RNA,通过qPCR、Western blot、间接免疫荧光(IFA)和PEDV病毒滴度测定检测了过表达和敲减CLDN4对PEDV复制的影响。最后,检测了过表达CLDN4对PEDV吸附与侵入阶段的影响。结果显示,PEDV感染可上调细胞中CLDN 4的转录与蛋白表达水平,过表达CLDN4显著促进PEDV的复制,而干扰CLDN4表达抑制PEDV复制,并且CLDN4蛋白可促进PEDV的吸附与侵入。本研究表明CLDN4蛋白具有促进PEDV感染与复制的作用,为研究CLDN4的功能与解析PEDV的复制机制提供参考。 展开更多
关键词 CLDN4 猪流行性腹泻病毒 促进 感染
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抗猪流行性腹泻病毒药物研究进展
11
作者 郝小龙 曾晓雨 +7 位作者 武卓雅 刘亚云 戴银 殷冬冬 尹磊 沈学怀 潘孝成 王洁茹 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第6期83-86,共4页
猪流行性腹泻病是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以急性水样腹泻、呕吐、脱水为主要症状的一种急性肠道传染病。仔猪最易感,死亡率可高达100%,严重影响养猪业健康发展。RNA病毒变异性高导致现有疫苗无法对PEDV流行毒株提供有效免疫保护... 猪流行性腹泻病是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以急性水样腹泻、呕吐、脱水为主要症状的一种急性肠道传染病。仔猪最易感,死亡率可高达100%,严重影响养猪业健康发展。RNA病毒变异性高导致现有疫苗无法对PEDV流行毒株提供有效免疫保护,导致防控困难。开发新型抗PEDV药物成为当前研究的重要方向。本文综述讨论了病毒和宿主靶向PEDV药物的抗病毒疗效和机制,以期为PEDV的临床用药提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 药物 病毒靶向 宿主靶向 临床应用
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Eudragit L100修饰的铝锰双金属有机框架作为猪流行性腹泻灭活疫苗口服递送载体的初步评价
12
作者 胡米 沈瑶歆 +4 位作者 范宝超 孙敏 周金柱 郭容利 李彬 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2292-2300,共9页
本研究旨在对制备的Eudragit L100修饰的铝锰双金属有机框架纳米粒作为灭活猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)口服递送载体进行评价。利用金属离子Al3+、Mn2+和2-氨基对苯二甲酸有机配体之间的配位作用,将灭活PED... 本研究旨在对制备的Eudragit L100修饰的铝锰双金属有机框架纳米粒作为灭活猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)口服递送载体进行评价。利用金属离子Al3+、Mn2+和2-氨基对苯二甲酸有机配体之间的配位作用,将灭活PEDV原位封装Al/Mn-MOF中,得到Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒。通过静电相互作用,将阴离子聚合物Eudragit L100结合于Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒表面,得到L100@Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒。采用扫描电子显微镜考察其形态、纳米粒度电位仪测定表面电势、傅里叶红外光谱仪分析组成成分、X射线衍射仪测定晶格结构。采用ELISA和抗原检测卡表征对灭活PEDV的负载效率。配制模拟胃液考察L100@Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒的稳定性,并用ELISA测定灭活PEDV的释放率。使用激光共聚焦观察巨噬细胞对Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒的摄取。采用CCK8法测定不同浓度的纳米粒的细胞毒性。采用ELISA试剂盒测定Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒对巨噬细胞分泌免疫调节因子的影响。结果表明,L100@Al/Mn-MOF@PEDV纳米粒成功制备,尺寸小于1μm。在PEDV/金属离子/有机配体投料比为0.42∶1∶1时,对灭活PEDV的负载率可达到99.6%。L100@Al/Mn-MOF@PEDV在模拟胃液中孵育2 h仍具有高稳定性,对灭活PEDV的释放率仅为12.73%左右。在小鼠RAW264.7细胞的摄取试验中,用激光共聚焦观察到细胞对Al/Mn-MOF@PEDV摄取情况优于未经负载的灭活PEDV。且Al/Mn-MOF@PEDV能够显著增强RAW264.7细胞中Th1型因子IFN-γ和Th2型因子IL-4的表达。本研究为PED灭活疫苗口服载体的设计提供了新思路,并为后续应用于动物免疫的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 灭活疫苗 纳米载体 金属有机框架 口服递送
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丁酸抑制猪流行性腹泻病毒体外复制的分子机制
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作者 张楚妮 徐计东 +3 位作者 高钦 单颖 方维焕 李肖梁 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第3期579-590,共12页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种引起高度接触性急性肠道传染病的冠状病毒,严重威胁生猪产业的健康发展。丁酸作为饲料添加剂,在生猪养殖中广泛应用,其不仅作为能量物质,还参与调控基因表达、抗炎和细胞... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种引起高度接触性急性肠道传染病的冠状病毒,严重威胁生猪产业的健康发展。丁酸作为饲料添加剂,在生猪养殖中广泛应用,其不仅作为能量物质,还参与调控基因表达、抗炎和细胞周期等生命活动,但丁酸在PEDV感染中的作用机制尚不明确。本研究旨在探讨丁酸对PEDV复制的抑制作用及其潜在机制。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹和免疫荧光等技术检测丁酸处理对PEDV复制的影响,利用细胞周期相关蛋白表达分析和流式细胞术,研究PEDV感染对细胞周期的影响与丁酸的调控作用。结果表明:丁酸处理显著抑制了PEDV在猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)中的复制;PEDV感染可以上调细胞周期相关蛋白Cyclin A2的表达,同时诱导细胞S期(DNA合成期)阻滞帮助自身复制。丁酸通过下调Cyclin A2蛋白表达,缓解PEDV诱导的S期阻滞,从而发挥抗病毒作用。综上所述,丁酸通过调控细胞周期,缓解PEDV感染诱导的细胞周期S期阻滞,进而抑制病毒复制。本研究为丁酸在动物生产中作为抗病毒策略的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 丁酸 细胞周期 Cyclin A2 S期阻滞 抗病毒作用 IPEC-J2细胞
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影响猪流行性腹泻病毒复制的关键lncRNA筛选及其功能验证
14
作者 杨荔 杜小妹 +3 位作者 刘梦媛 吴圣龙 包文斌 吴正常 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期792-800,共9页
[目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。[方法]利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型,通过RNA-Seq进行lncRNA测... [目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。[方法]利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型,通过RNA-Seq进行lncRNA测序,筛选出影响PEDV复制的关键lncRNA;利用实时荧光定量PCR和核质分离检测lncRNA表达和细胞定位;构建RNA干扰载体并转染IPEC-J2细胞,通过病毒拷贝数测定、Western blotting、半数组织培养感染剂量(TCID_(50))以及间接免疫荧光试验(IFA)检测lncRNA表达对PEDV复制水平的影响。[结果]PEDV感染IPEC-J2细胞24 h时,细胞病变最为明显,成功构建细胞病变模型。与对照组相比,PEDV感染组中存在61个差异表达lncRNA,其中19个上调,42个下调,筛选出1个显著上调且差异倍数较大的lncRNA——lncMSTRG.10733.2。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,PEDV感染IPEC-J2细胞后,lncMSTRG.10733.2表达水平显著上调(P<0.05)。核质分离测定结果显示,lncMSTRG.10733.2主要分布在IPEC-J2细胞质中。成功构建了lncMSTRG.10733.2瞬时干扰IPEC-J2细胞,干扰效率为45.9%。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,lncRNA干扰后,PEDV-M基因mRNA相对表达量和PEDV N蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TCID_(50)测定结果显示,lncRNA干扰后PEDV滴度极显著上升(P<0.01);IFA结果显示,lncRNA干扰后IPEC-J2细胞中的PEDV N蛋白荧光分布水平明显增加。[结论]本研究基于高通量测序从细胞水平上筛选鉴定出1个与PEDV感染密切相关的lncRNA,其表达水平上调有利于提高猪对PEDV感染的抵抗能力。研究结果揭示了lncRNA在PEDV感染宿主过程中的重要作用,为今后制定PEDV的抗病育种工作策略和筛选分子标记物奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) lncRNA IPEC-J2 病毒复制
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基于CRISPR/Cas9技术的猪TRIM8基因敲除细胞系构建及其对猪流行性腹泻病毒复制的调控作用
15
作者 王威 毕祯彬 +5 位作者 顾善绅 肖叶懿 周雅静 吴圣龙 包文斌 王海飞 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3790-3799,共10页
【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建三方基序蛋白8(tripartite motif 8,TRIM8)基因敲除的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),并探究TRIM8基因敲除对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的调控作用,为深入理解TRIM8基因在抗病毒天然免疫中的作用机制及开发新... 【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建三方基序蛋白8(tripartite motif 8,TRIM8)基因敲除的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),并探究TRIM8基因敲除对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的调控作用,为深入理解TRIM8基因在抗病毒天然免疫中的作用机制及开发新的PEDV防控策略提供基因资源和理论依据。【方法】在猪TRIM8基因转录本第1外显子区域设计3条sg RNAs(sg RNA1、sg RNA2和sg RNA3),经退火形成双链DNA,与线性化p GK1.2载体连接,产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞进行鉴定。将重组载体转染IPEC-J2细胞。PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sg RNA敲除效率;利用T7核酸内切酶Ⅰ(M0302)酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中TRIM8蛋白表达情况。利用半数组织培养感染剂量(TCID_(50))和实时荧光定量PCR检测TRIM8基因敲除后PEDV复制的变化情况。【结果】重组载体测序结果显示,sg RNAs与p GK1.2成功连接。敲除效率分析发现,3个sg RNAs中只有sg RNA2有敲除效率。PCR产物经T7核酸内切酶Ⅰ(M0302)酶切筛选出8个阳性单克隆细胞。TA克隆测序分析发现,TRIM8基因2个等位基因序列分别缺失5和9bp。Western blotting结果表明,TRIM8基因敲除细胞中未见TRIM8蛋白表达。TCID_(50)和实时荧光定量PCR检测结果显示,与野生型IPEC-J2细胞相比,敲除TRIM8基因后显著上调了PEDV的病毒滴度(P<0.05),且PEDV M基因和N蛋白也显著上调(P<0.05)。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TRIM8基因敲除的IPEC-J2细胞,并提高了PEDV在宿主细胞中复制的能力。TRIM8基因敲除细胞可为探究TRIM8基因功能及其调控PEDV复制的分子机制提供材料。 展开更多
关键词 猪 TRIM8基因 猪流行性腹泻病毒(PEDV) CRISPR/Cas9技术 病毒复制
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SOX12基因在Vero细胞感染猪流行性腹泻病毒过程中的功能研究
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作者 向娇娇 元娜 +6 位作者 李慧慧 邵明珠 赵福平 张龙超 王立贤 石丽君 陈斌 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期289-297,共9页
[目的]探究SOX12基因对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,以期为抗PEDV育种提供有效分子标记。[方法]本研究合成3条SOX12基因干扰序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及其阴性对照(siNC)并转染至非洲绿猴... [目的]探究SOX12基因对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,以期为抗PEDV育种提供有效分子标记。[方法]本研究合成3条SOX12基因干扰序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及其阴性对照(siNC)并转染至非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),转染48 h后收集细胞,利用实时荧光定量PCR检测干扰效率。将有效的干扰片段和siNC分别转染至Vero细胞24 h后,用感染复数为0.05的PEDV感染细胞,分为4组:感染PEDV 12 h试验组(12 hpi-siRNA)、感染PEDV 12 h对照组(12 hpi-siNC)、感染PEDV 24 h试验组(24 hpi-siRNA)及感染PEDV 24 h对照组(24 hpi-siNC),利用实时荧光定量PCR检测PEDV N及SOX12基因的表达水平,通过Western blotting检测各组细胞PEDV N蛋白表达水平,利用组织半数感染量(50%tissue culture infective dose, TCID_(50))检测PEDV的病毒滴度,并利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)法检测各组细胞中PEDV复制情况。通过GeneMANIA网站预测SOX12基因的互作基因,利用实时荧光定量PCR检测抑制SOX12基因表达后其互作基因的表达变化。[结果]SOX12基因3条干扰片段的干扰效率为30%~60%,其中siRNA3干扰效率最高,可达60%。与12 hpi-siNC和24 hpi-siNC组相比,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组PEDV N基因的转录和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。病毒滴度表型测定结果表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV病毒滴度显著低于各自对照组(P<0.05);IFA结果也表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV复制明显少于对照组。基因互作预测及实时荧光定量PCR检测结果显示,与siNC组相比,干扰SOX12基因的表达后,其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达水平均显著降低(P<0.05)。[结论]本研究揭示了SOX12基因在PEDV感染Vero细胞过程中的调控作用,发现SOX12基因的下调表达能显著抑制PEDV复制和其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) SOX12基因 VERO细胞 基因干扰
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猪流行性腹泻病毒COE蛋白在TP309水稻细胞中的表达及纯化
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作者 陈金炫 史倩倩 +6 位作者 潘世源 陈恒耀 寇少康 楚红燕 张磊 张二芹 张改平 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期1-5,共5页
为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;... 为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;PCR鉴定阳性愈伤;阳性愈伤研磨后制成细胞并进行培养,阳性细胞经无糖诱导培养10 d后,Western blot鉴定表达COE蛋白;并利用Q阴离子层析和MMC阳离子层析纯化COE蛋白。结果显示,经潮霉素筛选获得73个新愈伤,PCR检测有50个阳性愈伤,阳性率约为68.49%,Western blot检测有15个水稻细胞株表达COE蛋白,COE蛋白经Q和MMC纯化后,其纯度达到50%左右。这些研究结果对制备猪流行性腹泻亚单位疫苗具有重要意义。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 COE蛋白 水稻愈伤 水稻植株 纯化
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体外对猪流行性腹泻病毒复制具有抑制效应的物质
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作者 王运珂 王娜 +4 位作者 岳珂 何坤淼 张兴 刘垚 张改平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2577-2589,共13页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种引起仔猪急性腹泻、呕吐、脱水等症状的病毒,由于其高发病率和高致死率,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。虽然疫苗接种是当前预防猪流行性腹泻(porcine epidemic diarr... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种引起仔猪急性腹泻、呕吐、脱水等症状的病毒,由于其高发病率和高致死率,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。虽然疫苗接种是当前预防猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)最经济和有效的措施,但PEDV变异株的频繁出现使得现有疫苗的免疫保护效果不佳,因此开发有效的抗病毒药物显得尤为迫切。近年来,研究者致力于筛选和评估具有潜在抗PEDV活性的物质,其主要通过靶向病毒的入侵、复制或装配过程,或通过增强宿主的免疫响应来发挥作用。本文从化学药物、天然产物和其他生物制剂抗PEDV作用及机制进行概述,以期为抗PEDV药物的筛选和研究提供新的方向和思路。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 化学药物 天然产物 生物制剂
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猪流行性腹泻病毒的肠道致病机制及营养调控研究进展 被引量：1
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作者 杨杰波 严鸿林 +1 位作者 伍爱民 张勇 《动物营养学报》 北大核心 2025年第4期2142-2156,共15页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种具有高度传染性的肠道冠状病毒,可导致新生仔猪出现萎缩性肠炎、水样腹泻和脱水,是造成新生仔猪死亡的主要病原。营养物质的供给是维持动物生长和健康所必需的,也可直接或间接作用于病毒,抑制PEDV的复制和... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种具有高度传染性的肠道冠状病毒,可导致新生仔猪出现萎缩性肠炎、水样腹泻和脱水,是造成新生仔猪死亡的主要病原。营养物质的供给是维持动物生长和健康所必需的,也可直接或间接作用于病毒,抑制PEDV的复制和活性,并通过增强仔猪的免疫性能、抗氧化和抗炎能力来修复PEDV感染所引起的肠道损伤,从而维持仔猪的肠道健康。营养物质在缓解PEDV对仔猪的影响中主要通过增强仔猪的免疫力和抑制PEDV活性来发挥抗PEDV作用。本文在综述PEDV肠致病机制的基础上,重点介绍了PEDV对仔猪的影响和缓解PEDV的营养调控作用研究进展,以期为深入研究营养调控对PEDV的作用机制和开发抗病毒营养调控技术提供理论参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 致病机制 仔猪 肠道健康 营养调控
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猪流行性腹泻病毒S1蛋白的原核表达及其核酸适配体的筛选
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作者 张冬萱 王智豪 +3 位作者 乔岩 赵肖肖 范松杰 张超 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期839-850,共12页
本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD),并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体,为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采... 本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD),并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体,为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采用大肠杆菌原核表达系统,将PEDV-S1-CTD质粒与带有麦芽糖结合蛋白(MBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、反转录终止因子(NusA)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)四种促溶标签的原核表达载体pET21b连接,构建重组质粒pET21b-MBP-S1、pET21b-SUMO-S1、pET21b-NusA-S1、pET21b-GST-S1,将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21进行诱导表达,选择可溶性好且表达量高的rMBP-S1重组蛋白进行后续试验,Western blot结果显示该重组蛋白正确表达,间接免疫荧光试验(IFA)结果表明rMBP-S1能与细胞表面受体结合。随后经磁珠法筛选得到111条靶向rMBP-S1重组蛋白的候选DNA适配体,其中Apt-S1-3、Apt-S1-11富集程度最高,分别是18%和16.2%,酶联适配体吸附试验ELASA(enzyme-linked aptamer sorbent assays,ELASA)测定适配体Apt-S1-3的解离常数为2.09 nmol,并且该适配体不与rMBP蛋白、rMBP-gD蛋白、rMBP-GP5蛋白以及BSA蛋白发生交叉反应,表明该适配体具有高亲和力与高特异性。此外,使用在线软件Mfold分析适配体Apt-S1-3形成的二级结构,并且通过分子对接模拟,发现该适配体能够与靶标蛋白形成稳定的复合物。最后的间接免疫荧光试验表明适配体Apt-S1-3能够识别PEDV,流式细胞术试验证实该适配体能够抑制PEDV感染宿主细胞。本研究筛选得到的DNA适配体能够与猪流行性腹泻病毒S1-CTD蛋白高亲和力、高特异性结合,而且能够抑制猪流行性腹泻病毒感染细胞,为PEDV的靶向治疗和检测方法开发奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S1-CTD蛋白 磁珠法 核酸适配体 亲和力
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