猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附及致炎作用的影响

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作者 李跃强 《中国动物保健》 2025年第3期9-10,共2页

本文根据猪源粪肠球菌的分离与鉴定得到猪源粪肠球菌N8与N41菌株,通过革兰氏染色、显微镜观察等实验室检测方法,分析不同猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附情况。结果显示通过荧光定量PCR技术分析发现,粪肠球菌会引起IPEC-J2细胞出现不... 本文根据猪源粪肠球菌的分离与鉴定得到猪源粪肠球菌N8与N41菌株,通过革兰氏染色、显微镜观察等实验室检测方法,分析不同猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附情况。结果显示通过荧光定量PCR技术分析发现,粪肠球菌会引起IPEC-J2细胞出现不同程度的炎症水平,同时会增加阳性细胞因子表达,通过该作用可加快上皮—间质转化。本文主要分析猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附及致炎作用机制,为防范与干预猪源粪肠球菌提供参考。 展开更多

关键词 猪源粪肠球菌 猪小肠上皮细胞 黏附 致炎

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ACE2对猪流行性腹泻病毒体外感染传代猪小肠上皮细胞的影响

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作者 任莉鑫 张静怡 +3 位作者 徐沙沙 杨柳 张兴翠 宋振辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1238-1248,共11页

为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪... 为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells, IPEC-J2细胞)模型,通过RT-qPCR、Western blot检测PEDV感染后ACE2的mRNA、蛋白表达水平的变化。过表达与抑制表达ACE2后通过RT-qPCR、Western blot、TCID50检测PEDV复制水平。结果显示,PEDV感染IPEC-J2后ACE2的mRNA及蛋白表达水平均显著下调,与转录组学结果一致。过表达ACE2组PEDV感染量显著上升,抑制表达ACE2组PEDV感染量显著下降。本研究在细胞水平上验证了ACE2在PEDV感染过程中的作用,即PEDV感染能够使ACE2表达量下降,在IPEC-J2细胞中过表达ACE2能提高PEDV复制水平,抑制ACE2的表达可降低PEDV复制水平。 展开更多

关键词 血管紧张素转换酶2 ACE2 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞

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伏马毒素FB1诱导猪小肠上皮细胞前后转录组比较分析

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作者 周刚 彭亚 张新国 《猪业科学》 2024年第12期86-90,共5页

伏马毒素(Fumonisin)是一种由Fusarium属真菌(主要是Fusarium verticillioides和Fusarium proliferatum)产生的次级代谢产物。这种真菌广泛存在于自然界中,尤其是在玉米和其他谷物上。伏马毒素主要包括伏马毒素B1、B2、B3等多种类型,其... 伏马毒素(Fumonisin)是一种由Fusarium属真菌(主要是Fusarium verticillioides和Fusarium proliferatum)产生的次级代谢产物。这种真菌广泛存在于自然界中,尤其是在玉米和其他谷物上。伏马毒素主要包括伏马毒素B1、B2、B3等多种类型,其中伏马毒素B1(FB1)是最常见和研究最多的一种。伏马毒素对猪具有很强的毒性,尤其是对猪肠道细胞。 展开更多

关键词 猪肠道 次级代谢产物 转录组 猪小肠上皮细胞 FUSARIUM

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乳酸锌对猪空肠上皮细胞IPEC-J2增殖及相关调控基因mRNA表达的影响 被引量：10

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作者 韩国全 余冰 +6 位作者 陈代文 相振田 亓宏伟 陈洪 毛倩 毛湘冰 黄志清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期740-747,共8页

旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4mRNA表达的影响。用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200mg.L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化;用实时荧光定量RT-PCR方... 旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4mRNA表达的影响。用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200mg.L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化;用实时荧光定量RT-PCR方法检测ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1及ZIP4mRNA表达,以TBPmRNA的表达水平作为内参对照。在细胞培养前36h,乳酸锌对IPEC-J2细胞基本没有影响,随锌浓度递增细胞增殖幅度升高;乳酸锌处理IPEC-J2细胞后,ZnT2、DMT1、IREG-1及MT1mRNA表达随锌浓度增高而升高,ZIP4mRNA表达则随锌浓度增高而降低。添加乳酸锌可以促进IPEC-J2细胞增殖,上调ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1mRNA表达,下调ZIP4mRNA表达。 展开更多

关键词 乳酸锌 猪空肠上皮细胞ipec-j2 MRNA表达 相关调控基因

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猪圆环病毒2型感染对猪小肠上皮细胞Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1基因mRNA表达的影响 被引量：3

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作者 杨昕坦 阮峥 李焕荣 《北京农学院学报》 2019年第1期56-60,共5页

紧密连接在维持肠道黏膜完整性和免疫系统正常发挥功能中作用重大。【目的】旨在探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪小肠上皮细胞(IPEC)紧密连接的影响。【方法】利用基因克隆获得Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)基因的重组质粒并... 紧密连接在维持肠道黏膜完整性和免疫系统正常发挥功能中作用重大。【目的】旨在探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪小肠上皮细胞(IPEC)紧密连接的影响。【方法】利用基因克隆获得Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)基因的重组质粒并建立荧光定量RT-PCR标准曲线;利用所建立的方法检测PCV2感染的IPEC中Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1mRNA的动态变化。【结果】构建的两种紧密连接蛋白基因的重组质粒荧光定量RT-PCR标准曲线线性关系良好,相关系数均达0.99以上。PCV2感染的IPEC中Claudin-1蛋白和ZO-1mRNA表达在4、12、24、48、72h均显著下降。【结论】PCV2感染可抑制猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白相关基因的表达,破坏细胞间的紧密连接,增加肠道通透性。 展开更多

关键词 PCV2 猪小肠上皮细胞 Claudin-1蛋白 闭锁小带蛋白-1 荧光定量RT-PCR

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体外培养猪小肠上皮细胞大豆凝集素结合位点的标记 被引量：4

6

作者 车东升 穆成龙 +3 位作者 刘飞飞 张海全 孙泽威 秦贵信 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期735-739,共5页

本研究旨在获得体外培养状态下的猪小肠上皮细胞,研究猪小肠上皮细胞与大豆凝集素的结合情况。选取新生未哺乳健康仔猪,取小肠组织对小肠上皮细胞进行分离培养,并进行纯化。纯化后的细胞以角蛋白抗体-8为一抗进行细胞免疫化学试验鉴定,... 本研究旨在获得体外培养状态下的猪小肠上皮细胞,研究猪小肠上皮细胞与大豆凝集素的结合情况。选取新生未哺乳健康仔猪,取小肠组织对小肠上皮细胞进行分离培养,并进行纯化。纯化后的细胞以角蛋白抗体-8为一抗进行细胞免疫化学试验鉴定,鉴定后的猪小肠上皮细胞以FITC-SBA为探针进行细胞凝集素荧光标记化学试验,对猪小肠上皮细胞大豆凝集素结合位点进行标记。结果表明:试验分离纯化的细胞经角蛋白抗体-8鉴定为阳性,所分离纯化的细胞为猪小肠上皮细胞,经检测其纯度达90%以上,猪小肠上皮细胞FITC-SBA标记结果为阳性。体外培养的猪小肠上皮细胞表面存在大量的大豆凝集素结合位点,进一步明确了猪小肠上皮细胞是大豆凝集素结合的主要细胞类型之一,为单胃动物大豆凝集素抗营养机制研究提供理论依据。 展开更多

关键词 大豆凝集素 猪 小肠上皮细胞 荧光标记

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仔猪小肠上皮细胞的体外培养及猪流行性腹泻病毒对其感染性研究 被引量：4

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作者 沈学怀 翟银建 +7 位作者 尹磊 潘孝成 张丹俊 赵瑞宏 戴银 胡晓苗 周学利 侯宏艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期4051-4058,共8页

本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的相关研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原... 本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的相关研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原代细胞的体外分离。采用0.1%胰蛋白酶差速消化法进行仔猪小肠上皮细胞的纯化;比较新生弱仔猪和正常仔猪作为供体对原代小肠上皮细胞活性的影响;MTT法比较不同代次原代细胞的增殖活性;免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR方法检测PEDV毒株CV777在原代小肠上皮细胞感染和增殖情况。结果显示,本研究建立的体外分离培养方法能获得增殖活性良好的原代小肠上皮细胞,具有明显的“S”型细胞增殖曲线。通过胰酶差速消化可得到纯度高、形态单一的小肠上皮细胞,同时细胞连续传代5次仍保持良好的增殖活性。弱仔猪和正常仔猪分离培养的小肠上皮细胞的增殖活性比较显示,两者并没有明显区别,这为降低原代细胞培养的成本提供新的思路。免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR结果显示,PEDV可感染本方法分离培养的仔猪原代小肠上皮细胞,并在其中进行复制增殖。本研究建立了一种操作简单、实用性强、成本较低的仔猪原代小肠上皮细胞体外培养方法,该方法培养的原代细胞可作为PEDV分离培养和相关研究的基础材料。 展开更多

关键词 仔猪小肠上皮细胞 体外培养 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 增殖活性 细胞传代

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猪小肠黏膜上皮细胞原代培养 被引量：6

8

作者 王静 张彦明 周宏超 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期46-49,共4页

分别采用酶消化法和组织块培养法,建立了猪小肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min;处理2以2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min;处理3以50 mg/L嗜热菌蛋白酶消化50 min;处理4以5... 分别采用酶消化法和组织块培养法,建立了猪小肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min;处理2以2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min;处理3以50 mg/L嗜热菌蛋白酶消化50 min;处理4以50 mg/L嗜热菌蛋白酶+2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min。采用柠檬酸胰酶法分离纯化细胞。结果表明,组织块法原代培养获得的细胞活性较强。 展开更多

关键词 猪小肠黏膜上皮细胞 原代培养 组织块培养 纯化

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附子理中丸对脾阳虚大鼠小肠上皮细胞CREB、Sirt1、UCP2表达和ATP合成的影响 被引量：3

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作者 孙大宇 单德红 +2 位作者 刘旭东 刘文俊 王德山 《山东医药》 CAS 2018年第41期26-29,共4页

目的探讨附子理中丸对脾阳虚证大鼠小肠上皮细胞CREB、Sirt1、UCP2表达和ATP合成的影响。方法取SPF级SD雄性大鼠40只,按体质量分层随机分为4组,空白组、模型组、中药组、自愈组,每组10只。采用"饮食失节+劳倦"等复合因素方法... 目的探讨附子理中丸对脾阳虚证大鼠小肠上皮细胞CREB、Sirt1、UCP2表达和ATP合成的影响。方法取SPF级SD雄性大鼠40只,按体质量分层随机分为4组,空白组、模型组、中药组、自愈组,每组10只。采用"饮食失节+劳倦"等复合因素方法复制脾气虚动物模型。在此基础上,采用"苦寒泻下"法复制脾阳虚动物模型。动物模型复制成功后,中药组给予附子理中丸1∶1水溶液灌胃治疗。在造模结束和中药治疗干预后,分别采用Western blotting法和RT-PCR法检测大鼠小肠黏膜上皮细胞中CREB、Sirt1及线粒体中UCP2蛋白和mRNA表达。采用免疫荧光法检测小肠上皮组织中ATP含量。结果与空白组相比,模型组大鼠小肠上皮组织中CREB与Sirt1蛋白和mRNA表达降低(P均<0. 01),UCP2蛋白和mRNA表达增加(P均<0. 01);与模型组相比,中药组大鼠小肠上皮组织中CREB与Sirt1蛋白和mRNA表达升高(P均<0. 05),UCP2蛋白和mRNA表达降低(P均<0. 01)。与空白组相比,模型组大鼠小肠组织中ATP含量降低(P <0. 01);与模型组相比,中药组大鼠小肠组织中ATP含量升高(P <0. 01)。结论附子理中丸可使脾阳虚大鼠小肠上皮细胞CREB、SIRT1表达升高,线粒体UCP2蛋白表达上调、肠上皮组织中ATP合成减少。 展开更多

关键词 脾阳虚证 附子理中丸 中药 小肠上皮细胞 信息沉默调节因子 环磷腺苷效应元件结合蛋白 解耦联蛋白2 三磷酸腺苷 大鼠

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HO-1对IPEC-J2细胞氧化损伤的缓解作用

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作者 吴魏 杨涵琳 +6 位作者 刘一 张赛宇 何俊辉 杨彦宾 郭爽 王月影 李和平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期64-70,共7页

旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2... 旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2细胞分为对照组(CT)、H_(2)O_(2)组、HO-1+H_(2)O_(2)组,每组3个重复。RT-qPCR检测IPEC-J2细胞中IL-1α、IL-6、IL-8、Keap1、Nrf2 mRNA的相对表达丰度;ELISA检测IPEC-J2细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;化学荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平。结果显示,随着H_(2)O_(2)浓度的增加,IPEC-J2细胞活力降低,400μmol/L H_(2)O_(2)处理12 h,600μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h或24 h,IPEC-J2细胞活力均降至50%以下。根据细胞活力下降50%的原则,后续选用400μmol/L H_(2)O_(2)处理IPEC-J2细胞12 h。与CT组相比,H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中的IL-1α(P<0.05)、IL-6(P<0.01)和IL-8(P<0.01)mRNA相对表达丰度增加,细胞中ROS荧光强度增强(P<0.01)和MDA含量(P<0.001)升高。与H_(2)O_(2)组相比,HO-1+H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中IL-6(P<0.05)、IL-1α(P<0.01)和IL-8(P<0.05)mRNA相对表达丰度降低,细胞中ROS荧光强度减弱(P<0.05)和MDA含量显著下降(P<0.01)。Keap1/Nrf2信号结果显示,H_(2)O_(2)上调Keap1 mRNA表达(P<0.01),下调Nrf2 mRNA表达(P<0.01),降低CAT活性(P<0.01);HO-1与H_(2)O_(2)共处理,IPEC-J2细胞中Keap1 mRNA表达下调(P<0.01),Nrf2 mRNA表达上调(P<0.01),CAT活性升高(P<0.01)。提示400μmol/L H_(2)O_(2)能诱导IPEC-J2细胞发生氧化损伤,HO-1能在一定程度上缓解H_(2)O_(2)诱导IPEC-J2细胞的氧化损伤,HO-1能激活H_(2)O_(2)抑制的Keap1/Nrf2信号,促进抗氧化酶CAT的产生,发挥抑炎、抗氧化作用。 展开更多

关键词 血红素加氧酶1 过氧化氢 猪小肠上皮细胞 氧化损伤

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沙门菌感染IPEC-J2细胞前后上清液外泌体鉴定及其m^(6)A相关蛋白表达和转录组分析

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作者 张新国 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5086-5096,共11页

【目的】探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)过程中的作用及分子调控机制。【方法】利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平,用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体... 【目的】探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)过程中的作用及分子调控机制。【方法】利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平,用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体,并通过透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blotting检测外泌体标记蛋白分子(CD9、CD63、CD81、TSG101)进行外泌体鉴定;利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)相关蛋白表达,同时结合转录组测序筛选上清液外泌体差异表达基因。【结果】间接免疫荧光试验结果显示,感染组IPEC-J2细胞中可观察到大量沙门菌分布,表明沙门菌可感染IPEC-J2细胞;透射电镜和外泌体粒径分析结果显示,IPEC-J2细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡,直径为30~150 nm;Western blotting结果显示,C-J2细胞分泌的外泌体存在CD9、CD63、CD81和TSG101特异性标记蛋白。沙门菌感染后外泌体中m^(6)A修饰相关基因表达检测发现,ALKBH 5、YTHDC 2及YTHDF 1基因的mRNA和蛋白表达均显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01)。转录组测序结果显示,沙门菌感染IPEC-J2细胞前后外泌体中存在1524个差异表达基因,包括842个下调基因和682个上调基因。GO功能富集分析表明,沙门菌感染主要影响免疫系统过程、细胞连接和酶调节剂活性等生物过程;KEGG通路富集分析表明,其与IgA生产的肠道免疫网络、T细胞受体信号通路和Toll样受体信号通路等密切相关。【结论】本研究成功分离和鉴定了沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体,并且表明外泌体中m^(6)A修饰可介导免疫信号通路来调控沙门菌感染宿主细胞,该研究可为今后深入探究外泌体对猪肠道沙门菌感染的分子机制提供理论参考。 展开更多

关键词 猪 沙门菌 外泌体 小肠上皮细胞 转录组

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猪德尔塔冠状病毒感染对初生仔猪小肠杯状细胞数量及Hes1和MUC2表达的影响 被引量：2

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作者 梁继翔 焦哲 +7 位作者 严治山 李旸 李栋祺 刘晓丽 谷长勤 胡薛英 程国富 张万坡 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期772-781,共10页

旨在探讨猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染仔猪对小肠杯状细胞(goblet cell,GC)的影响,将6头未吃初乳的初生仔猪静养2 d后随机分为感染组(n=3)和对照组(n=3),感染组仔猪口服接种5 mL 1×10^(5) TCID_(50)·mL^(-1) PDCoV-CHN-HG-201... 旨在探讨猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染仔猪对小肠杯状细胞(goblet cell,GC)的影响,将6头未吃初乳的初生仔猪静养2 d后随机分为感染组(n=3)和对照组(n=3),感染组仔猪口服接种5 mL 1×10^(5) TCID_(50)·mL^(-1) PDCoV-CHN-HG-2017毒株,对照组仔猪口服5 mL DMEM培养基。感染组仔猪分别在口服接种后22、39和70 h出现明显腹泻、脱水和嗜睡等临床症状,及时实施安乐死并采集小肠组织样品;对应时间点分别选取对照组1头仔猪实施安乐死并采集小肠组织样品。采用HE染色、PAS染色和AB染色观察小肠组织病理学变化和GC数量变化。采用荧光定量PCR和ELISA分别检测初生仔猪小肠组织中发状分裂相关增强子1(Hes1)和黏蛋白2(MUC2)的转录和含量的变化。结果显示,感染组仔猪与对照组仔猪相比小肠各段黏膜结构均有不同程度损伤,绒毛长度降低且差异显著(P<0.05),VH:CD的比值降低且差异显著(P<0.05)。PAS染色与AB染色结果一致,小肠各段GC数量均有不同程度减少且差异显著(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。感染组仔猪与对照组仔猪相比小肠各段Hes1 mRNA的转录量和含量均升高,在空肠和回肠中Hes 1 mRNA转录量差异显著(P<0.01或P<0.05),在十二指肠和回肠中Hes1含量差异显著(P<0.01)。感染组仔猪与对照组仔猪相比小肠各段MUC2 mRNA的转录量和含量均降低,在十二指肠和回肠中差异显著(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。结果表明,PDCoV感染初生仔猪后引起小肠GC数量明显减少。PDCoV感染仔猪可能通过激活肠道Notch信号通路下游靶基因Hes1表达来阻碍小肠中GC形成和分泌,导致GC数量减少和MUC2表达降低。 展开更多

关键词 猪德尔塔冠状病毒 仔猪 杯状细胞 小肠 发状分裂相关增强子1 黏蛋白2

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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 被引量：1

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作者 徐天 石达 +4 位作者 陈建飞 谷凤丽 时洪艳 张鑫 冯力 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期33-37,共5页

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的... 为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。 展开更多

关键词 猪腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 酵母双杂交 CDNA文库

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11S通过NF-κB信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤 被引量：1

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作者 彭成璐 张瑜 +5 位作者 丁雪东 李玉 冯士彬 王希春 李锦春 吴金节 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期384-391,共8页

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L^(... 通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L^(-1)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和1μmol·mL^(-1) Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)。分别于8、16、24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,用ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、二胺氧化酶(DAO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)含量,用western blot法检测细胞p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量,用qPCR法检测细胞NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量。结果表明:11S可以降低猪小肠上皮细胞存活率,添加PDTC和L-NAME可以提高小肠上皮细胞存活率;11S可促进NO、DAO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL-10的分泌,增加p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量及NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量,添加PDTC和L-NAME可抑制11S的作用。综上,11S可引起猪小肠上皮细胞损伤,随着11S浓度的增大,损伤程度增加,PDTC和L-NAME可以降低11S对细胞的损伤。 展开更多

关键词 大豆球蛋白 猪小肠上皮细胞 信号通路

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猪传染性胃肠炎病毒N蛋白在猪小肠黏膜上皮细胞中的表达及对细胞周期的影响 被引量：1

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作者 常嵘 张琪 +2 位作者 何亚鹏 童德文 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期7-10,共4页

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白在猪小肠黏膜上皮细胞(SIEC)中的表达并检测其对细胞周期的影响,将构建的含有TGEV N基因的重组质粒pEGFP-N1-N采用脂质体介导法瞬时转染SIEC,通过RT-PCR和Western blot方法分别从分子水平和蛋白水... 为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白在猪小肠黏膜上皮细胞(SIEC)中的表达并检测其对细胞周期的影响,将构建的含有TGEV N基因的重组质粒pEGFP-N1-N采用脂质体介导法瞬时转染SIEC,通过RT-PCR和Western blot方法分别从分子水平和蛋白水平检测N蛋白的表达,采用流式细胞术检测N蛋白对IEC细胞周期的影响。结果表明,N蛋白在SIEC中成功表达,并使细胞的S期延长。研究结果为深入研究TGEV N蛋白功能提供新的理论依据,并为进一步探讨TGEV的致病机理奠定基础。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 猪小肠黏膜上皮细胞 细胞周期

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感染产肠毒素大肠杆菌的猪小肠上皮细胞microRNA表达谱分析

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作者 刘迎迎 张迪 +3 位作者 刘国梅 李培 李妍 左玉柱 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4242-4253,共12页

试验旨在探索产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)诱导的microRNA(miRNA)表达谱变化,为解析宿主miRNA在ETEC感染过程中的调控作用提供理论基础。利用Illumina 6000 Novoseq SE50测序... 试验旨在探索产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)诱导的microRNA(miRNA)表达谱变化,为解析宿主miRNA在ETEC感染过程中的调控作用提供理论基础。利用Illumina 6000 Novoseq SE50测序平台分别对ETEC感染前后的IPEC-J2进行高通量测序,用Bowtie与参考基因组比对,用DESeq R Package进行miRNA差异性分析。通过miRanda和RNAhybid共同预测差异表达miRNA的靶基因,对差异表达miRNA靶基因进行GO功能和KEGG通路分析。随机选取5个miRNAs,对测序结果进行实时荧光定量PCR验证。结果显示,IPEC-J2在感染前后的sRNA文库经过滤分别得到12889260和11203056条clean reads。感染前后文库中,miRNA所占比例最高,分别为73.16%和54.10%;分别有97.98%和69.83%长度为18~40 nt的sRNA可比对到参考基因组,表明测序质控良好。长度在22~24 nt的序列大部分首位碱基偏向U,2~8位点出现频率最高的碱基分别为AGCUUAU。共发现311个已知miRNAs,128个新miRNAs。在2个文库中,长度为23 nt的miRNA序列占比最高,分别为41.42%和23.56%。感染后共筛选到140个差异表达miRNAs,其中74个表达上调,66个表达下调。GO分析表明,miRNA靶基因显著富集于代谢过程、正向调节代谢过程、细胞成分或生物合成、免疫系统、细胞内部分和细胞器等功能。KEGG分析表明,差异表达miRNA靶基因显著富集于赖氨酸降解、生产IgA的肠道免疫网络、NF-κB信号通路和T细胞受体信号通路等。实时荧光定量PCR验证结果表明,随机选取的5个miRNAs表达趋势与测序结果一致,表明测序准确可靠。综上所述,IPEC-J2的miRNAs参与了ETEC感染过程,为进一步揭示调控ETEC感染的关键miRNA及其作用机制提供科学依据。 展开更多

关键词 猪小肠上皮细胞(ipec-j2) 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) miRNA 表达谱

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基于猪小肠上皮细胞炎症模型分析产肠毒素大肠杆菌诱导的转录组表达变化

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作者 朱悦 刘迎迎 +4 位作者 李莹慧 李培 朱凯晴 贾垌 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期1445-1453,共9页

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multipl... 【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100的ETEC菌液感染IPEC-J2细胞,18 h后收集细胞上清,通过ELISA方法检测炎性因子白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)的分泌水平。由Illumina PE150测序平台进行高通量转录组测序,通过edgeR v 3.12.1软件对测序结果进行差异表达分析,利用GOseq和KOBAS 2.0软件对得到的差异表达mRNA进行GO功能和KEGG通路富集分析,随机挑选5条差异表达mRNA,利用实时荧光定量PCR对其验证。【结果】试验成功建立了ETEC感染诱导的IPEC-J2细胞炎症模型。与对照组相比,炎症模型组共发现529条差异表达mRNA,其中236条表达上调,293条表达下调,包括HSP90AA1、CGNL1、CADPS2、EHBP1等免疫相关基因。GO功能分析表明,ETEC感染后差异表达mRNA显著富集于细胞组分和生物过程,包括细胞内成分(intracellular part)、细胞质(cytoplasm)、核成分(nuclear part)、胞内膜结合细胞器(intracellular membrance-bounded organelle)、膜结合细胞器(membrance-bounded orgabelle)及细胞进程(cellular process)等。KEGG通路分析表明,炎症模型中差异表达基因大多数被注释到疾病相关通路及Toll样受体信号通路、mTOR信号通路、细胞周期、黏附连接等免疫相关信号通路。利用实时荧光定量PCR验证随机挑选的5条差异表达mRNA,结果与测序报告中差异表达mRNA变化趋势一致,证明测序结果可信。【结论】HSP90AA1、CGNL1、CADPS2和EHBP1等基因可能在ETEC黏附IPEC-J2细胞并诱导炎症反应中发挥关键作用,并通过Toll样受体、mTOR等信号通路进行免疫调控。研究结果为进一步揭示ETEC感染诱导炎症反应的分子机制及相关调控网络提供参考依据。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞(ipec-j2) 炎症模型 转录组

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撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛通过NLRP3/ASC/Caspase-1途径诱导IPEC-J2细胞焦亡 被引量：2

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作者 肖金龙 王浩 +8 位作者 万全 沈珏 张博 赵维薇 邓静 王喜 赵汝 肖鹏 高洪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5218-5227,共10页

旨在研究撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛(highly pathogenic virulence island,HPI)诱导IPEC-J2细胞焦亡的机制,本研究以LPS+ATP为阳性对照,将实验室前期筛选的E.coli HPI及通过CRISPR/Cas9基因敲除技术构建完成的E.coliΔHPI感染IPEC-J... 旨在研究撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛(highly pathogenic virulence island,HPI)诱导IPEC-J2细胞焦亡的机制,本研究以LPS+ATP为阳性对照,将实验室前期筛选的E.coli HPI及通过CRISPR/Cas9基因敲除技术构建完成的E.coliΔHPI感染IPEC-J2细胞,观察细胞损伤情况;RT-qPCR测定各组作用0.5、3、6、9、12 h后细胞内焦亡通路中关键因子NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、消皮素D(gasderminD,GSDMD)及炎性因子白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)的mRNA转录水平;激光共聚焦观察NLRP3/Caspase-1炎性复合体组装及表达情况;Western blot测定GSDMD及其活化形式GSDMD-N蛋白表达水平,PI染色检测胞膜完整性。结果表明:LPS+ATP处理显著促进细胞焦亡的发生,阴性对照组细胞正常生长、轮廓清晰,E.coli感染组及LPS+ATP组细胞出现变形、脱落、边界模糊等明显细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),且HE染色显示,E.coliHPI感染相较于E.coliΔHPI感染对细胞的损伤更严重;E.coli HPI组中的焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平在3~9 h均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;NLRP3/Caspase-1炎性复合体在细胞质中发生组装,且E.coli HPI组NLRP3/Caspase-1蛋白荧光强度、GSDMD、GSDMD-N蛋白表达水平及PI染色阳性率均极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;E.coli HPI组的CPE、HE染色、焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达量、NLRP3/Caspase-1共定位情况均与LPS+ATP组相似。结果提示,撒坝猪源E.coliHPI通过上调NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路中关键因子mRNA水平,诱导NLRP3/Caspase-1炎性复合体的组装,促进焦亡标志蛋白GSDMD及GSDMD-N的表达,并对IPEC-J2细胞膜进行打孔,从而诱导细胞发生焦亡。 展开更多

关键词 大肠杆菌 高致病性毒力岛 焦亡 猪小肠上皮细胞 NLRP3/ASC/Caspase-1通路

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猪流行性腹泻病毒在稳定表达猪ACE2基因的IPEC-J2细胞中的增殖研究 被引量：1

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作者 沈海燕 康桦华 +2 位作者 刘志成 张建峰 张春红 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期38-43,共6页

为获得稳定表达猪源血管紧张素转换酶2(ACE2)的细胞株,用以增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)。构建了稳定表达猪源ACE2的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),并对PEDV在该细胞上的增殖进行了分析。将重组表达质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP转染至IPEC-J... 为获得稳定表达猪源血管紧张素转换酶2(ACE2)的细胞株,用以增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)。构建了稳定表达猪源ACE2的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),并对PEDV在该细胞上的增殖进行了分析。将重组表达质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP转染至IPEC-J2细胞后,经潮霉素B筛选和单克隆细胞培养,获得IPEC-J2-ACE2细胞系。通过荧光定量RT-PCR和Western blot对单克隆细胞中ACE2基因的mRNA转录和蛋白表达水平进行鉴定。以PEDV-WH株感染IPEC-J2-ACE2细胞,通过间接免疫荧光试验和荧光定量RT-PCR检测发现,PEDV-WH株在IPEC-J2-ACE2细胞中比在IPEC-J2细胞中的增殖能力高。 展开更多

关键词 猪小肠上皮细胞 血管紧张素转换酶2 猪流行性腹泻病毒 增殖

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ETEC感染猪小肠上皮细胞初期差异表达cricRNA的筛选

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作者 朱凯晴 朱悦 +3 位作者 刘迎迎 崔亚男 蒋秉妤 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3490-3498,共9页

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)初期宿主细胞内环状RNA(circularRNA,circRNA)的表达谱变化,并探究其调控机制。【方法】采用Illumina PE150测序平台对ETEC感染IPEC-J... 【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)初期宿主细胞内环状RNA(circularRNA,circRNA)的表达谱变化,并探究其调控机制。【方法】采用Illumina PE150测序平台对ETEC感染IPEC-J2细胞进行转录组测序,利用生物信息学在线软件筛选出差异表达circRNAs,经过GO功能和KEGG通路富集分析筛选出ETEC感染相关circRNAs,用IRESfinder和PFAM 33.1软件进行circRNAs编码潜能预测;随机挑选5个差异表达circRNAs,用实时荧光定量PCR验证circRNAs表达情况及核糖核酸酶R(RNase R)消化结果。【结果】转录组测序结果显示,共获得201个差异表达circRNAs,其中95个表达上调和106个表达下调。GO功能富集分析表明,ETEC感染初期circRNAs来源基因主要影响细胞形态、细胞代谢和泛素蛋白连接酶活性等功能。KEGG通路富集分析显示,circRNAs可能参与氨基酸代谢途径、泛素介导的蛋白质水解通路、黏合连接和肌动蛋白细胞骨架调节等信号通路。circRNAs编码潜能预测发现4个具有编码潜能的circRNAs,其中novel_circ_0009996和来源基因TNFAIP3共同富集在NF-κB和TNF信号通路。实时荧光定量PCR结果显示,5个circRNAs的表达水平与测序结果一致,差异表达circRNAs均为环状RNA分子,测序结果准确可靠。【结论】ETEC感染IPEC-J2细胞初期差异表达circRNAs和其来源基因主要参与炎症反应、基因表达的转录后调控、细胞免疫过程、细胞骨架、细胞增殖和凋亡等相关生物过程,其中novel_circ_0009996具有编码潜能,主要富集在NF-κB和TNF信号通路。研究结果为深入探究circRNA在ETEC感染初期的调控机制提供理论基础。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞 circRNA 感染

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