猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附及致炎作用的影响

1

作者 李跃强 《中国动物保健》 2025年第3期9-10,共2页

本文根据猪源粪肠球菌的分离与鉴定得到猪源粪肠球菌N8与N41菌株,通过革兰氏染色、显微镜观察等实验室检测方法,分析不同猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附情况。结果显示通过荧光定量PCR技术分析发现,粪肠球菌会引起IPEC-J2细胞出现不... 本文根据猪源粪肠球菌的分离与鉴定得到猪源粪肠球菌N8与N41菌株,通过革兰氏染色、显微镜观察等实验室检测方法,分析不同猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附情况。结果显示通过荧光定量PCR技术分析发现,粪肠球菌会引起IPEC-J2细胞出现不同程度的炎症水平,同时会增加阳性细胞因子表达,通过该作用可加快上皮—间质转化。本文主要分析猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附及致炎作用机制,为防范与干预猪源粪肠球菌提供参考。 展开更多

关键词 猪源粪肠球菌 猪小肠上皮细胞 黏附 致炎

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伏马毒素FB1诱导猪小肠上皮细胞前后转录组比较分析

2

作者 周刚 彭亚 张新国 《猪业科学》 2024年第12期86-90,共5页

伏马毒素(Fumonisin)是一种由Fusarium属真菌(主要是Fusarium verticillioides和Fusarium proliferatum)产生的次级代谢产物。这种真菌广泛存在于自然界中,尤其是在玉米和其他谷物上。伏马毒素主要包括伏马毒素B1、B2、B3等多种类型,其... 伏马毒素(Fumonisin)是一种由Fusarium属真菌(主要是Fusarium verticillioides和Fusarium proliferatum)产生的次级代谢产物。这种真菌广泛存在于自然界中,尤其是在玉米和其他谷物上。伏马毒素主要包括伏马毒素B1、B2、B3等多种类型,其中伏马毒素B1(FB1)是最常见和研究最多的一种。伏马毒素对猪具有很强的毒性,尤其是对猪肠道细胞。 展开更多

关键词 猪肠道 次级代谢产物 转录组 猪小肠上皮细胞 FUSARIUM

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ACE2对猪流行性腹泻病毒体外感染传代猪小肠上皮细胞的影响

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作者 任莉鑫 张静怡 +3 位作者 徐沙沙 杨柳 张兴翠 宋振辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1238-1248,共11页

为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪... 为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells, IPEC-J2细胞)模型,通过RT-qPCR、Western blot检测PEDV感染后ACE2的mRNA、蛋白表达水平的变化。过表达与抑制表达ACE2后通过RT-qPCR、Western blot、TCID50检测PEDV复制水平。结果显示,PEDV感染IPEC-J2后ACE2的mRNA及蛋白表达水平均显著下调,与转录组学结果一致。过表达ACE2组PEDV感染量显著上升,抑制表达ACE2组PEDV感染量显著下降。本研究在细胞水平上验证了ACE2在PEDV感染过程中的作用,即PEDV感染能够使ACE2表达量下降,在IPEC-J2细胞中过表达ACE2能提高PEDV复制水平,抑制ACE2的表达可降低PEDV复制水平。 展开更多

关键词 血管紧张素转换酶2 ACE2 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞

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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 被引量：1

4

作者 徐天 石达 +4 位作者 陈建飞 谷凤丽 时洪艳 张鑫 冯力 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期33-37,共5页

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的... 为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。 展开更多

关键词 猪腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 酵母双杂交 CDNA文库

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11S通过NF-κB信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤 被引量：1

5

作者 彭成璐 张瑜 +5 位作者 丁雪东 李玉 冯士彬 王希春 李锦春 吴金节 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期384-391,共8页

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L^(... 通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L^(-1)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和1μmol·mL^(-1) Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)。分别于8、16、24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,用ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、二胺氧化酶(DAO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)含量,用western blot法检测细胞p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量,用qPCR法检测细胞NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量。结果表明:11S可以降低猪小肠上皮细胞存活率,添加PDTC和L-NAME可以提高小肠上皮细胞存活率;11S可促进NO、DAO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL-10的分泌,增加p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量及NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量,添加PDTC和L-NAME可抑制11S的作用。综上,11S可引起猪小肠上皮细胞损伤,随着11S浓度的增大,损伤程度增加,PDTC和L-NAME可以降低11S对细胞的损伤。 展开更多

关键词 大豆球蛋白 猪小肠上皮细胞 信号通路

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猪圆环病毒2型感染对猪小肠上皮细胞Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1基因mRNA表达的影响 被引量：3

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作者 杨昕坦 阮峥 李焕荣 《北京农学院学报》 2019年第1期56-60,共5页

紧密连接在维持肠道黏膜完整性和免疫系统正常发挥功能中作用重大。【目的】旨在探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪小肠上皮细胞(IPEC)紧密连接的影响。【方法】利用基因克隆获得Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)基因的重组质粒并... 紧密连接在维持肠道黏膜完整性和免疫系统正常发挥功能中作用重大。【目的】旨在探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪小肠上皮细胞(IPEC)紧密连接的影响。【方法】利用基因克隆获得Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)基因的重组质粒并建立荧光定量RT-PCR标准曲线;利用所建立的方法检测PCV2感染的IPEC中Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1mRNA的动态变化。【结果】构建的两种紧密连接蛋白基因的重组质粒荧光定量RT-PCR标准曲线线性关系良好,相关系数均达0.99以上。PCV2感染的IPEC中Claudin-1蛋白和ZO-1mRNA表达在4、12、24、48、72h均显著下降。【结论】PCV2感染可抑制猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白相关基因的表达,破坏细胞间的紧密连接,增加肠道通透性。 展开更多

关键词 PCV2 猪小肠上皮细胞 Claudin-1蛋白 闭锁小带蛋白-1 荧光定量RT-PCR

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感染产肠毒素大肠杆菌的猪小肠上皮细胞microRNA表达谱分析

7

作者 刘迎迎 张迪 +3 位作者 刘国梅 李培 李妍 左玉柱 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4242-4253,共12页

试验旨在探索产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)诱导的microRNA(miRNA)表达谱变化,为解析宿主miRNA在ETEC感染过程中的调控作用提供理论基础。利用Illumina 6000 Novoseq SE50测序... 试验旨在探索产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)诱导的microRNA(miRNA)表达谱变化,为解析宿主miRNA在ETEC感染过程中的调控作用提供理论基础。利用Illumina 6000 Novoseq SE50测序平台分别对ETEC感染前后的IPEC-J2进行高通量测序,用Bowtie与参考基因组比对,用DESeq R Package进行miRNA差异性分析。通过miRanda和RNAhybid共同预测差异表达miRNA的靶基因,对差异表达miRNA靶基因进行GO功能和KEGG通路分析。随机选取5个miRNAs,对测序结果进行实时荧光定量PCR验证。结果显示,IPEC-J2在感染前后的sRNA文库经过滤分别得到12889260和11203056条clean reads。感染前后文库中,miRNA所占比例最高,分别为73.16%和54.10%;分别有97.98%和69.83%长度为18~40 nt的sRNA可比对到参考基因组,表明测序质控良好。长度在22~24 nt的序列大部分首位碱基偏向U,2~8位点出现频率最高的碱基分别为AGCUUAU。共发现311个已知miRNAs,128个新miRNAs。在2个文库中,长度为23 nt的miRNA序列占比最高,分别为41.42%和23.56%。感染后共筛选到140个差异表达miRNAs,其中74个表达上调,66个表达下调。GO分析表明,miRNA靶基因显著富集于代谢过程、正向调节代谢过程、细胞成分或生物合成、免疫系统、细胞内部分和细胞器等功能。KEGG分析表明,差异表达miRNA靶基因显著富集于赖氨酸降解、生产IgA的肠道免疫网络、NF-κB信号通路和T细胞受体信号通路等。实时荧光定量PCR验证结果表明,随机选取的5个miRNAs表达趋势与测序结果一致,表明测序准确可靠。综上所述,IPEC-J2的miRNAs参与了ETEC感染过程,为进一步揭示调控ETEC感染的关键miRNA及其作用机制提供科学依据。 展开更多

关键词 猪小肠上皮细胞(IPEC-J2) 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) miRNA 表达谱

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ETEC感染猪小肠上皮细胞初期差异表达cricRNA的筛选

8

作者 朱凯晴 朱悦 +3 位作者 刘迎迎 崔亚男 蒋秉妤 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3490-3498,共9页

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)初期宿主细胞内环状RNA(circularRNA,circRNA)的表达谱变化,并探究其调控机制。【方法】采用Illumina PE150测序平台对ETEC感染IPEC-J... 【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)初期宿主细胞内环状RNA(circularRNA,circRNA)的表达谱变化,并探究其调控机制。【方法】采用Illumina PE150测序平台对ETEC感染IPEC-J2细胞进行转录组测序,利用生物信息学在线软件筛选出差异表达circRNAs,经过GO功能和KEGG通路富集分析筛选出ETEC感染相关circRNAs,用IRESfinder和PFAM 33.1软件进行circRNAs编码潜能预测;随机挑选5个差异表达circRNAs,用实时荧光定量PCR验证circRNAs表达情况及核糖核酸酶R(RNase R)消化结果。【结果】转录组测序结果显示,共获得201个差异表达circRNAs,其中95个表达上调和106个表达下调。GO功能富集分析表明,ETEC感染初期circRNAs来源基因主要影响细胞形态、细胞代谢和泛素蛋白连接酶活性等功能。KEGG通路富集分析显示,circRNAs可能参与氨基酸代谢途径、泛素介导的蛋白质水解通路、黏合连接和肌动蛋白细胞骨架调节等信号通路。circRNAs编码潜能预测发现4个具有编码潜能的circRNAs,其中novel_circ_0009996和来源基因TNFAIP3共同富集在NF-κB和TNF信号通路。实时荧光定量PCR结果显示,5个circRNAs的表达水平与测序结果一致,差异表达circRNAs均为环状RNA分子,测序结果准确可靠。【结论】ETEC感染IPEC-J2细胞初期差异表达circRNAs和其来源基因主要参与炎症反应、基因表达的转录后调控、细胞免疫过程、细胞骨架、细胞增殖和凋亡等相关生物过程,其中novel_circ_0009996具有编码潜能,主要富集在NF-κB和TNF信号通路。研究结果为深入探究circRNA在ETEC感染初期的调控机制提供理论基础。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞 circRNA 感染

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基于猪小肠上皮细胞炎症模型分析产肠毒素大肠杆菌诱导的转录组表达变化

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作者 朱悦 刘迎迎 +4 位作者 李莹慧 李培 朱凯晴 贾垌 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期1445-1453,共9页

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multipl... 【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100的ETEC菌液感染IPEC-J2细胞,18 h后收集细胞上清,通过ELISA方法检测炎性因子白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)的分泌水平。由Illumina PE150测序平台进行高通量转录组测序,通过edgeR v 3.12.1软件对测序结果进行差异表达分析,利用GOseq和KOBAS 2.0软件对得到的差异表达mRNA进行GO功能和KEGG通路富集分析,随机挑选5条差异表达mRNA,利用实时荧光定量PCR对其验证。【结果】试验成功建立了ETEC感染诱导的IPEC-J2细胞炎症模型。与对照组相比,炎症模型组共发现529条差异表达mRNA,其中236条表达上调,293条表达下调,包括HSP90AA1、CGNL1、CADPS2、EHBP1等免疫相关基因。GO功能分析表明,ETEC感染后差异表达mRNA显著富集于细胞组分和生物过程,包括细胞内成分(intracellular part)、细胞质(cytoplasm)、核成分(nuclear part)、胞内膜结合细胞器(intracellular membrance-bounded organelle)、膜结合细胞器(membrance-bounded orgabelle)及细胞进程(cellular process)等。KEGG通路分析表明,炎症模型中差异表达基因大多数被注释到疾病相关通路及Toll样受体信号通路、mTOR信号通路、细胞周期、黏附连接等免疫相关信号通路。利用实时荧光定量PCR验证随机挑选的5条差异表达mRNA,结果与测序报告中差异表达mRNA变化趋势一致,证明测序结果可信。【结论】HSP90AA1、CGNL1、CADPS2和EHBP1等基因可能在ETEC黏附IPEC-J2细胞并诱导炎症反应中发挥关键作用,并通过Toll样受体、mTOR等信号通路进行免疫调控。研究结果为进一步揭示ETEC感染诱导炎症反应的分子机制及相关调控网络提供参考依据。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞(IPEC-J2) 炎症模型 转录组

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胰腺再生蛋白Ⅲγ在猪小肠上皮细胞中的表达调控机理

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作者 宋云云 孟江海 +4 位作者 刘丹 曹斌 赵越雯 田燕涛 陈韬 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期215-221,共7页

选取不同浓度(0、10^(4)、10^(5)、10^(6)、10^(7)、10^(8)、10^(9)cfu/mL)的灭活金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和不同质量浓度(0.0、0.1、1.0、10.0μg/mL)的肽聚糖(PG)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC–J2),通过q PCR和免疫印迹试验... 选取不同浓度(0、10^(4)、10^(5)、10^(6)、10^(7)、10^(8)、10^(9)cfu/mL)的灭活金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和不同质量浓度(0.0、0.1、1.0、10.0μg/mL)的肽聚糖(PG)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC–J2),通过q PCR和免疫印迹试验,检测RegⅢγmRNA和蛋白的表达水平,分析RegⅢγ及P65、P38、c–Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)等的表达变化,进一步探究RegⅢγ表达调控的分子机理。结果表明:灭活S.aureus和PG对IPEC–J2的细胞活力均有抑制作用;与不添加灭活S.aureus处理相比,添加灭活S.aureus可增加RegⅢγmRNA和蛋白的表达,且呈现剂量依赖性,当灭活S.aureus浓度达到10;cfu/mL时,RegⅢγmRNA和蛋白的表达水平极显著增加;同样PG也能诱导RegⅢγ蛋白的表达,与不添加PG的处理相比,添加1.0μg/mL PG时,RegⅢγmRNA和蛋白表达水平极显著升高;与不添加灭活S.aureus或PG的处理相比,添加10^(9)cfu/mL灭活S.aureus或1.0μg/mL PG能显著或极显著提高IPEC–J2的P65、P38、JNK、ERK等蛋白的表达水平,表明RegⅢγ在IPEC–J2中的表达可能是由髓样分化初级应答蛋白(MyD88)下游的核转录因子κB(NF–κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)2条信号通路途径所调控。 展开更多

关键词 胰腺再生蛋白Ⅲγ(RegⅢγ) 金黄色葡萄球菌 肽聚糖(PG) 核转录因子κB(NF–κB) 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 猪小肠上皮细胞(IPEC–J2)

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白藜芦醇对ZEN诱导的猪小肠上皮细胞损伤的作用效果研究 被引量：1

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作者 韩婧娥 王欢欢 +3 位作者 李鹏程 佘福泽 黎肖昱 秦顺义 《天津农学院学报》 CAS 2023年第3期47-52,共6页

试验旨在探究白藜芦醇对玉米赤霉烯酮(ZEN)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的影响。试验分组为:C组(对照组)、Z组(ZEN浓度25µg/mL)、ZR1组(25µg/mL ZEN+10µmol/L白藜芦醇)、ZR2组(25µg/mL ZEN+20µmol/... 试验旨在探究白藜芦醇对玉米赤霉烯酮(ZEN)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的影响。试验分组为:C组(对照组)、Z组(ZEN浓度25µg/mL)、ZR1组(25µg/mL ZEN+10µmol/L白藜芦醇)、ZR2组(25µg/mL ZEN+20µmol/L白藜芦醇)、ZR3组(25µg/mL ZEN+30µmol/L白藜芦醇);测定细胞活力、细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性、抗氧化酶水平以及Caspase 3、Caspase9、Bcl-2和bax等凋亡相关基因mRNA表达水平。试验结果显示:Z组细胞活力、SOD活性T-AOC水平和Bcl-2基因mRNA表达水平极显著低于C组(P<0.01),ZR2组和ZR3组细胞活力、SOD活性、T-AOC水平和Bcl-2基因mRNA表达水平极显著或显著高于Z组和ZR1组(P<0.01或P<0.05);Z组细胞LDH活性、MDA水平、Capase-3、Capase-9和Bax基因mRNA表达水平极显著高于C组(P<0.01),ZR2组和ZR3组细胞LDH活性、MDA水平、Capase-3、Capase-9和Bax基因mRNA表达水平极显著或显著低于Z组和ZR1组(P<0.01或P<0.05),ZR1组细胞LDH活性和Bax基因mRNA表达水平极显著低于Z组(P<0.01)。结果表明,白藜芦醇能够缓解ZEN诱导的IPEC-J2细胞的细胞活力、LDH活性、抗氧化功能和凋亡相关基因mRNA表达水平的改变。 展开更多

关键词 白藜芦醇 玉米赤霉烯酮 猪小肠上皮细胞 细胞活力 乳酸脱氢酶活性 抗氧化功能 凋亡基因

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猪小肠黏膜上皮细胞原代培养 被引量：6

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作者 王静 张彦明 周宏超 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期46-49,共4页

分别采用酶消化法和组织块培养法,建立了猪小肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min;处理2以2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min;处理3以50 mg/L嗜热菌蛋白酶消化50 min;处理4以5... 分别采用酶消化法和组织块培养法,建立了猪小肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min;处理2以2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min;处理3以50 mg/L嗜热菌蛋白酶消化50 min;处理4以50 mg/L嗜热菌蛋白酶+2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min。采用柠檬酸胰酶法分离纯化细胞。结果表明,组织块法原代培养获得的细胞活性较强。 展开更多

关键词 猪小肠黏膜上皮细胞 原代培养 组织块培养 纯化

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猪传染性胃肠炎病毒N蛋白在猪小肠黏膜上皮细胞中的表达及对细胞周期的影响 被引量：1

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作者 常嵘 张琪 +2 位作者 何亚鹏 童德文 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期7-10,共4页

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白在猪小肠黏膜上皮细胞(SIEC)中的表达并检测其对细胞周期的影响,将构建的含有TGEV N基因的重组质粒pEGFP-N1-N采用脂质体介导法瞬时转染SIEC,通过RT-PCR和Western blot方法分别从分子水平和蛋白水... 为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白在猪小肠黏膜上皮细胞(SIEC)中的表达并检测其对细胞周期的影响,将构建的含有TGEV N基因的重组质粒pEGFP-N1-N采用脂质体介导法瞬时转染SIEC,通过RT-PCR和Western blot方法分别从分子水平和蛋白水平检测N蛋白的表达,采用流式细胞术检测N蛋白对IEC细胞周期的影响。结果表明,N蛋白在SIEC中成功表达,并使细胞的S期延长。研究结果为深入研究TGEV N蛋白功能提供新的理论依据,并为进一步探讨TGEV的致病机理奠定基础。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 猪小肠黏膜上皮细胞 细胞周期

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猪轮状病毒NSP4的细胞定位及在细胞凋亡中的作用 被引量：1

14

作者 建琛瑶 王静 +1 位作者 董望 张彦明 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期1-4,共4页

为研究猪轮状病毒非结构蛋白NSP4的细胞定位及其蛋白功能,将构建的重组质粒pNSP4-EGFP,pviroporin-EGFP和pEGFP-N1空载体质粒转染到SIEC02细胞株,通过与内质网定位蛋白的共聚焦分析、实时荧光定量PCR检测和Western blot分析,发现NSP4主... 为研究猪轮状病毒非结构蛋白NSP4的细胞定位及其蛋白功能,将构建的重组质粒pNSP4-EGFP,pviroporin-EGFP和pEGFP-N1空载体质粒转染到SIEC02细胞株,通过与内质网定位蛋白的共聚焦分析、实时荧光定量PCR检测和Western blot分析,发现NSP4主要分布于内质网,少数定位于细胞核;NSP4蛋白可显著上调Bax基因水平(P<0.01)和caspase-3蛋白表达水平。说明猪轮状病毒NSP4蛋白具有类似viroporin的功能,主要定位于内质网上;NSP4依赖或部分依赖caspase的激活和Bax的活化促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 猪小肠上皮细胞 猪轮状病毒 非结构蛋白 4 细胞凋亡 NSP4

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撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛通过NLRP3/ASC/Caspase-1途径诱导IPEC-J2细胞焦亡 被引量：2

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作者 肖金龙 王浩 +8 位作者 万全 沈珏 张博 赵维薇 邓静 王喜 赵汝 肖鹏 高洪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5218-5227,共10页

旨在研究撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛(highly pathogenic virulence island,HPI)诱导IPEC-J2细胞焦亡的机制,本研究以LPS+ATP为阳性对照,将实验室前期筛选的E.coli HPI及通过CRISPR/Cas9基因敲除技术构建完成的E.coliΔHPI感染IPEC-J... 旨在研究撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛(highly pathogenic virulence island,HPI)诱导IPEC-J2细胞焦亡的机制,本研究以LPS+ATP为阳性对照,将实验室前期筛选的E.coli HPI及通过CRISPR/Cas9基因敲除技术构建完成的E.coliΔHPI感染IPEC-J2细胞,观察细胞损伤情况;RT-qPCR测定各组作用0.5、3、6、9、12 h后细胞内焦亡通路中关键因子NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、消皮素D(gasderminD,GSDMD)及炎性因子白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)的mRNA转录水平;激光共聚焦观察NLRP3/Caspase-1炎性复合体组装及表达情况;Western blot测定GSDMD及其活化形式GSDMD-N蛋白表达水平,PI染色检测胞膜完整性。结果表明:LPS+ATP处理显著促进细胞焦亡的发生,阴性对照组细胞正常生长、轮廓清晰,E.coli感染组及LPS+ATP组细胞出现变形、脱落、边界模糊等明显细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),且HE染色显示,E.coliHPI感染相较于E.coliΔHPI感染对细胞的损伤更严重;E.coli HPI组中的焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平在3~9 h均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;NLRP3/Caspase-1炎性复合体在细胞质中发生组装,且E.coli HPI组NLRP3/Caspase-1蛋白荧光强度、GSDMD、GSDMD-N蛋白表达水平及PI染色阳性率均极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;E.coli HPI组的CPE、HE染色、焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达量、NLRP3/Caspase-1共定位情况均与LPS+ATP组相似。结果提示,撒坝猪源E.coliHPI通过上调NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路中关键因子mRNA水平,诱导NLRP3/Caspase-1炎性复合体的组装,促进焦亡标志蛋白GSDMD及GSDMD-N的表达,并对IPEC-J2细胞膜进行打孔,从而诱导细胞发生焦亡。 展开更多

关键词 大肠杆菌 高致病性毒力岛 焦亡 猪小肠上皮细胞 NLRP3/ASC/Caspase-1通路

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猪流行性腹泻病毒在稳定表达猪ACE2基因的IPEC-J2细胞中的增殖研究 被引量：1

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作者 沈海燕 康桦华 +2 位作者 刘志成 张建峰 张春红 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期38-43,共6页

为获得稳定表达猪源血管紧张素转换酶2(ACE2)的细胞株,用以增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)。构建了稳定表达猪源ACE2的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),并对PEDV在该细胞上的增殖进行了分析。将重组表达质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP转染至IPEC-J... 为获得稳定表达猪源血管紧张素转换酶2(ACE2)的细胞株,用以增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)。构建了稳定表达猪源ACE2的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),并对PEDV在该细胞上的增殖进行了分析。将重组表达质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP转染至IPEC-J2细胞后,经潮霉素B筛选和单克隆细胞培养,获得IPEC-J2-ACE2细胞系。通过荧光定量RT-PCR和Western blot对单克隆细胞中ACE2基因的mRNA转录和蛋白表达水平进行鉴定。以PEDV-WH株感染IPEC-J2-ACE2细胞,通过间接免疫荧光试验和荧光定量RT-PCR检测发现,PEDV-WH株在IPEC-J2-ACE2细胞中比在IPEC-J2细胞中的增殖能力高。 展开更多

关键词 猪小肠上皮细胞 血管紧张素转换酶2 猪流行性腹泻病毒 增殖

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HO-1对IPEC-J2细胞氧化损伤的缓解作用

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作者 吴魏 杨涵琳 +6 位作者 刘一 张赛宇 何俊辉 杨彦宾 郭爽 王月影 李和平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期64-70,共7页

旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2... 旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2细胞分为对照组(CT)、H_(2)O_(2)组、HO-1+H_(2)O_(2)组,每组3个重复。RT-qPCR检测IPEC-J2细胞中IL-1α、IL-6、IL-8、Keap1、Nrf2 mRNA的相对表达丰度;ELISA检测IPEC-J2细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;化学荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平。结果显示,随着H_(2)O_(2)浓度的增加,IPEC-J2细胞活力降低,400μmol/L H_(2)O_(2)处理12 h,600μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h或24 h,IPEC-J2细胞活力均降至50%以下。根据细胞活力下降50%的原则,后续选用400μmol/L H_(2)O_(2)处理IPEC-J2细胞12 h。与CT组相比,H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中的IL-1α(P<0.05)、IL-6(P<0.01)和IL-8(P<0.01)mRNA相对表达丰度增加,细胞中ROS荧光强度增强(P<0.01)和MDA含量(P<0.001)升高。与H_(2)O_(2)组相比,HO-1+H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中IL-6(P<0.05)、IL-1α(P<0.01)和IL-8(P<0.05)mRNA相对表达丰度降低,细胞中ROS荧光强度减弱(P<0.05)和MDA含量显著下降(P<0.01)。Keap1/Nrf2信号结果显示,H_(2)O_(2)上调Keap1 mRNA表达(P<0.01),下调Nrf2 mRNA表达(P<0.01),降低CAT活性(P<0.01);HO-1与H_(2)O_(2)共处理,IPEC-J2细胞中Keap1 mRNA表达下调(P<0.01),Nrf2 mRNA表达上调(P<0.01),CAT活性升高(P<0.01)。提示400μmol/L H_(2)O_(2)能诱导IPEC-J2细胞发生氧化损伤,HO-1能在一定程度上缓解H_(2)O_(2)诱导IPEC-J2细胞的氧化损伤,HO-1能激活H_(2)O_(2)抑制的Keap1/Nrf2信号,促进抗氧化酶CAT的产生,发挥抑炎、抗氧化作用。 展开更多

关键词 血红素加氧酶1 过氧化氢 猪小肠上皮细胞 氧化损伤

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食淀粉乳杆菌代谢产物对TGEV感染IPEC-J2细胞屏障功能的影响 被引量：2

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作者 田宗民 张萍 +5 位作者 赵毅博 刘文娜 王子敬 张宏宇 张睿 魏萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期2194-2203,共10页

本研究采用荧光定量PCR方法,检测了IPEC-J2细胞不同时间点紧密连接蛋白3(claudin 3,CLDN-3)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8,KRT8)、黏蛋白1(mucin 1,MUC1)3种蛋白mRNA的表达量变化。本试验将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染IPEC-J2细胞,探... 本研究采用荧光定量PCR方法,检测了IPEC-J2细胞不同时间点紧密连接蛋白3(claudin 3,CLDN-3)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8,KRT8)、黏蛋白1(mucin 1,MUC1)3种蛋白mRNA的表达量变化。本试验将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染IPEC-J2细胞,探索食淀粉乳杆菌代谢产物是否通过维持或改善CLDN-3、KRT8、MUC1蛋白mRNA表达来增强细胞的屏障功能,是否对IPEC-J2细胞感染TGEV后的屏障功能产生影响。试验结果发现,正常细胞对照组MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量随时间没有显著变化(P>0.05),MRS培养基对照组与正常细胞对照组相比没有显著变化(P>0.05),食淀粉乳杆菌代谢产物单独处理组对细胞MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量呈显著上调作用(P<0.05);食淀粉乳杆菌代谢产物+TGEV试验组与病毒对照组相比,处理24、36和48h,MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白的表达显著升高(P<0.05)。结果表明,食淀粉乳杆菌代谢产物不仅能提高MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,还能负调节TGEV诱导的MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,从而加强IPEC-J2细胞对TGEV感染的屏障功能。 展开更多

关键词 食淀粉乳杆菌 猪传染性胃肠炎病毒 猪小肠上皮细胞

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β-伴大豆球蛋白通过p38/JNK MAPK信号通路引起IPEC-J2细胞损伤 被引量：5

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作者 彭成璐 张瑜 +7 位作者 夏晓冬 贺濛初 舒迎霜 冯士彬 李玉 王希春 李锦春 吴金节 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期242-249,共8页

采用细胞体外培养技术,研究不同浓度7S(β-伴大豆球蛋白)对IPEC-J2(猪小肠上皮细胞)的影响。实验分为6组,A(对照组)、B(1 mg·m L^(-1)7S)、C(5 mg·m L^(-1)7S)、D(10 mg·m L^(-1)7S)、E(5 mg·m L^(-1)7S+1μmol... 采用细胞体外培养技术,研究不同浓度7S(β-伴大豆球蛋白)对IPEC-J2(猪小肠上皮细胞)的影响。实验分为6组,A(对照组)、B(1 mg·m L^(-1)7S)、C(5 mg·m L^(-1)7S)、D(10 mg·m L^(-1)7S)、E(5 mg·m L^(-1)7S+1μmol·L^(-1)SP600125)、F(5 mg·m L^(-1)7S+1μmol·L^(-1)SB202190),24 h后,用CCK-8法检测细胞存活率,收集细胞用ELISA法检测NO、5-HT、IL-6和IL^(-1)0含量,用Western blot法检测p-JNK、p-p38、Bcl-2蛋白表达量,用PCR法检测Bad、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和Caspase-3 m RNA相对表达量。检测结果表明:C组和D组的IPEC-J2细胞活性极显著降低(P <0. 01),E组和F组的细胞活性显著高于C组(P <0. 05),说明7S促进炎性细胞因子NO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL^(-1)0的分泌,添加抑制剂使细胞因子NO、5-HT和IL-6分泌减少,IL^(-1)0的分泌增多;同时7S促进p-JNK、p-p38蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,添加抑制剂可抑制p-JNK、p-p38蛋白表达,使Bcl-2蛋白表达增高。Bcl-2/Bax m RNA比值随7S浓度增加而降低,Bax/Bcl-xl比值随7S浓度增加而升高,Caspase-3 m RNA相对表达量随7S浓度增加而升高。添加抑制剂后Bcl-2/Bax比值增高,Bax/Bcl-xl比值降低,Caspase-3 m RNA降低。结果表明,7S通过p38/JNK MAPK信号通路引起仔猪肠上皮细胞损伤。 展开更多

关键词 Β-伴大豆球蛋白 猪小肠上皮细胞 JNK P38

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低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞紧密连接蛋白表达的影响

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作者 傅春妮 李元辉 +2 位作者 李鹏程 李留安 秦顺义 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4311-4318,共8页

试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEN)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组(C)、ZEN(30μg/mL ZEN)、ZEN+0.5 Se(30μg/mL ZEN+0.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 S... 试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEN)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组(C)、ZEN(30μg/mL ZEN)、ZEN+0.5 Se(30μg/mL ZEN+0.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组。待细胞长至60%~70%汇合时,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,C和ZEN组更换为正常培养液,12 h后向含ZEN组加入30μg/mL ZEN,继续培养24 h。收集各组细胞培养液,检测碱性磷酸酶(AKP)活性;Western blotting法检测闭锁连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的表达,免疫荧光法检测ZO-1和Occludin蛋白的表达和定位情况。AKP活性检测结果表明,与对照组相比,ZEN、ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se组AKP活性均显著升高(P<0.05),ZEN+3 Se组AKP活性差异不显著(P>0.05);与ZEN组相比,ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组AKP活性均显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,与对照组比,ZEN组ZO-1和Occludin蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与ZEN组比,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组ZO-1表达水平均差异不显著(P>0.05),但随着Se浓度的增加,ZO-1表达水平逐渐升高,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3 Se组Occludin表达水平均显著升高(P<0.05)。免疫荧光结果表明,低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的ZO-1和Occludin蛋白荧光信号减弱现象,并恢复ZO-1和Occludin蛋白的定位分布。由此说明,低聚壳聚糖硒可降低ZEN引起的IPEC-J2细胞AKP活性升高,上调ZEN引起的ZO-1、Occludin蛋白表达水平下降,并调节其定位分布。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 低聚壳聚糖硒 猪小肠上皮细胞(IPEC-J2) 闭锁连接蛋白(ZO-1)

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